邓开凤 戴盛明★

·综述·

实时荧光定量PCR检测血清/血浆microRNAs临床应用前的准备

邓开凤 戴盛明★

现已证明血清/血浆microRNAs（miRNAs）表达谱的变化与多种疾病的发生、发展相关。血清/血浆miRNAs分子稳定，不易降解，且标本采集创伤小、便捷，非常适合应用于临床实验室检测。因此miRNAs极有可能成为未来疾病诊断和预后评估的分子标志物乃至治疗靶标。实时荧光定量PCR检测法（real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）操作简便，需要的RNA量较少，灵敏度极高，能在短时间内获得结果，并可同时检测多种miRNAs表达，有良好的应用前景。本文将详细探讨现阶段用于血清/血浆miRNAs定量检测的RT-qPCR方法，以及总结血清/血浆miRNAs定量检测应用于临床检验应注意的问题。

MicroRNAs；血清/血浆；实时荧光定量PCR

miRNAs发现始于1993年，Lee等研究人员在秀丽新小杆线虫（caenorhabditis elegans，C. elegans）中意外发现控制着线虫时序性发育的双链小RNA分子lin-4［1］。直至2000年，Reinhart［2］等发现第二个具有转录后调节功能的RNA小分子let-7，miRNAs才逐渐进入人们的视野成为一个崭新的研究领域。越来越多的研究人员相继发现了这类具有调控调控作用的小RNA分子。目前人们普遍的共识是：miRNAs是一类高度保守，长度在19～24个核苷酸（nucleotide，nt）左右的内源性非编码小分子RNA。而外周血循环miRNAs是组织细胞分泌产生［3］，成熟的miRNAs在细胞内被脂质或脂蛋白包被成外切酶体（exosome），分泌至胞外并进入血液，外切酶体通过内吞作用进入受体细胞，释放出miRNAs发挥生物学功能［4］。生物信息学预测发现，哺乳动物miRNAs能调控超过60％的基因，在细胞发育、凋亡、分化、增殖等重要的生理病理过程中均发挥重要作用［5］。……