楚振宇，周小林，薛振伟，崔梅萍，蔺苏琴，李瑞华

0 引 言

小细胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)恶性程度在所有肺癌类型中最高［1］，然而其对放化疗敏感，如早期发现，采用综合治疗后5年生存率可达30%以上，因此SCLC的早期诊断和治疗尤为重要。胃泌素释放肽前体(pro-gastrin releasing peptide，PGRP)作为神经内分泌性细胞来源的肿瘤如小细胞肺癌肿瘤标志物已得到广泛认可［2－4］，其敏感性和特异性均高于血清神经元特异烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)［5］，特别是对于局限期 SCLC的诊断具明显优势［6－7］。在病情监测、疗效评估、预后等方面亦有较高准确性［8－9］，在临床上有广泛的应用前景［10－11］。本研究通过人工合成 PGRP抗原决定簇对本实验室自行研制的单克隆抗体进行筛选;采用改良过碘酸钠法对抗体进行辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)标记，从而建立双抗体夹心酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent assay，ELISA)，并将此方法应用于癌症患者PGRP浓度的检测，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料 PGRP抗原(本实验室自行研制);抗原决定簇PGRP(31－98)序列中N端到C端的3个抗原肽段—GSLKQQLREYIR(肽段1)、NLLGLIEAK(肽段2)和KENRNHQPPQ PKALG(肽段3)，委托赛百盛公司合成;单克隆抗体19株(本实验室采用杂交瘤技术自行研制的鼠单克隆抗体);多克隆抗体(本实验室自行研制的兔多克隆抗体);辣根酶标记羊抗小鼠IgG(H+L)与辣根酶标记山羊抗兔IgG(H+L)(ZSGB-BIO公司生产);HRP为AMRESCO公司生产;癌症患者血样共67份(由太原肿瘤医院提供)，血样以离心半径6 cm、3000r/min离心15min后收集上层血清;BioTek酶标仪(型号ELx800);Thermo Scientific微量分光光度计(型号NANODROP 2000);ELISA试剂盒(PGRP检测试剂盒为IBL公司生产);本实验所选用化学试剂规格皆为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 间接ELISA法筛选……