王　慰，杨　莉，高恒波，郑欢伟，李兵顺

不同血清HBV DNA载量慢性乙型肝炎病毒携带者外周血T淋巴亚群的变化*

王慰，杨莉，高恒波，郑欢伟，李兵顺

【摘要】目的探讨不同病毒载量乙型肝炎病毒（HBV）携带者外周血T细胞亚群的变化。方法使用流式细胞仪检测86例慢性HBV携带者和22例正常人外周血T细胞CD3+、CD4+和CD8+细胞亚群；采用荧光定量PCR法检测HBV DNA载量。结果血清HBV DNA低载量HBV携带者外周血CD3+和CD4+细胞百分比分别为（65.6±12.5）%和（32.1±9.5）%，HBV阴性组分别为（63.8±13.3）%和（31.6±11.3%），均显著低于正常人［分别为（72.1±5.0）%和（39.1±5.3）%，P＜0.05］；HBV DNA低载量组CD8+细胞百分比为（25.8±7.1）%，与正常人的（27.6±4.3）%比，无统计学差异（P＞0.05）；HBV DNA高载量组外周血CD3+、CD8+细胞百分比分别为（73.2±9.5）%、（30.0±8.5）%，CD4+细胞为（37.6±6.4）%，与正常人比均无统计学差异（P＞0.05）。结论随着血清HBV DNA载量的升高，HBV携带者T淋巴细胞亚群处于接近正常水平，其发生机制还有待于进一步研究

【关键词】慢性乙型肝炎病毒携带者；T淋巴细胞亚群；流式细胞术；病毒载量

乙型肝炎病毒（HBV）感染机体所引发的宿主免疫反应对病毒的清除是导致疾病进展的关键因素。T淋巴细胞亚群在此免疫反应过程中起主要作用［1，2］。我国HBV携带者超过

1.2亿，其中一些人会发展至乙型肝炎、肝硬化和肝癌［3，4］。本文检测了不同病毒载量的HBV携带者外周血T淋巴细胞亚群的变化，现报道如下。

1　资料与方法

1.1病例来源2012年10月～2013年3月期间我科诊治的慢性HBV携带者86例，男64例，女22例；年龄15～62岁，平均年龄为（37.5±12.6）岁。临床诊断符合慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）的标准［5］。所有患者半年内未用过抗病毒药物和免疫调节剂。另选正常人22例，男性15例，女性7例；年龄18～60岁，平均年龄（39.7±12.9）岁，排除乙型肝炎、高血压病、冠心病、糖尿病。两组人群性别和年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2外周血淋巴细胞亚群检测抽取静脉血2 ml，EDTA抗凝。取全血100 μl，加入抗CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5（美国BECKMANNCOULTER公司）20μl，室温下避光孵育10 min，加溶血素500 μl，15 min，加稀释液500 μl，10 min后上流式细胞仪（美国BECKMANN COULTER公司生产的Epics-XLⅡ型）检测CD3+、CD4+和CD8+淋巴细胞百分比。

1.3外周血HBV DNA定量检测抽取静脉血2 ml，EDTA抗凝，采用荧光定量PCR法（美国ABI公司的7300型PCR仪）检测血清HBV DNA（中山大学达安基因股份有限公司）。根据HBV DNA定量水平，将86例患者分为3组：HBV DNA阴性组（HBV DNA＜0.5 U/L），HBV DNA低载量组（HBV DNA为1×101～102U/L），HBV DNA高载量组（HBV DNA为1×103～105U/L）。

1.4统计学方法应用SPSS l3.0软件包进行分析，计量资料以（x±s）表示，多组样本均数的比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA），P＜0.05为差异具有统计学意义。

2　结果

HBV阴性组和低载量HBV DNA组外周血CD3+T细胞百分比比正常人降低，高载量HBV DNA组比低载量HBV DNA组明显降低（P＜0.05）；HBV DNA低载量组和HBV阴性组CD4+T细胞百分比比正常人降低，HBV DNA高载量组降低更明显（P＜0.05）；HBV DNA高载量组CD8+T细胞百分比比正常人有所升高，但无统计学意义（P＞0.05）；慢性HBV携带者外周血CD4+/CD8+细胞比值比正常人有所降低，但无统计学意义（P＞0.05，表1）。

3　讨论

机体感染HBV后主要依靠细胞毒效应与非细胞毒效应两种免疫机制消除病毒，其中 T淋巴细胞参与的细胞毒效应起主导作用。慢性乙型肝炎的发病主要是由于机体 T淋巴细胞通过细胞免疫清除 HBV时引发了肝细胞的病理性损伤。因此 HBV感染的发生、发展和转归与宿主细胞免疫功能状态密切相关［6，7］。研究认为慢性HBV携带者常在幼年由于机体免疫系统尚未健全或功能低下时，感染HBV后免疫系统不能有效识别病毒，造成携带状态。临床上，尚难打破慢性HBV携带者的免疫耐受状态，如何治疗HBV携带者也就成了被关注的热点［8，9］。

表1　各组外周血T淋巴细胞百分比（%）的比较

T细胞膜表面分子基因主要以白细胞分化抗原（cluster of differentiation，CD）、组织相容性抗原以及膜表面的受体等构成。CD3+分子能表达于全部 T细胞上，是 T细胞共同的表面标志［10，11］。所以，检测CD3+淋巴细胞可反映T淋巴细胞的总数。本研究发现，与正常人比，HBV DNA阴性组、HBV DNA低载量组HBV携带者CD3+淋巴细胞百分比明显降低，且差异具有显著性，而HBV DNA高载量组与正常人比无显著性差异，说明随着HBV DNA水平的升高，HBV携带者体内T淋巴细胞总数也不断增高，提示HBV携带者在病毒呈阴性或低载量时，机体参加细胞免疫反应的免疫活性细胞数不足，携带者细胞免疫未激活。

CD4+和CD8+T细胞亚群在机体特异性免疫应答中起核心作用。CD4+亚群属辅助性 T细胞（Th），可产生多种细胞因子，能辅助 B细胞产生抗体，也能辅助CD8+T细胞产生细胞毒作用；CD8+细胞可产生穿孔素等细胞毒物质，参与抗肿瘤免疫、抗病毒和移植排斥反应，归属于抑制性T细胞（Ts）［5］。本研究发现，与正常人比，HBV DNA阴性组、HBV DNA低载量组人群CD4+细胞百分比明显降低，HBV DNA高载量组与正常人比，虽有所降低，但是无显著性差异；HBV DNA阴性组、HBV DNA低载量组人群CD8+细胞百分比与正常人比有一定程度的降低，但是无统计学差异，而HBV DNA高载量组则呈增多状态，但也无统计学差异。由此可见，HBV携带者免疫低下主要是由于CD4+淋巴细胞减少所致，从而导致免疫耐受状态。

CD4与CD8的消长平衡能反映促炎/抑炎因子的失衡及程度［6］。本研究结果显示慢性HBV携带者CD4/CD8比值与正常人比有一定程度的降低，虽差异不显著，但是随病毒载量的升高，此比值也在不断升高，表明患者体内存在不同程度的CD4与CD8的失衡。

本研究结果显示，HBV携带者体内病毒载量低时，T淋巴细胞数量处于低下状态，而患者病毒载量增高，T淋巴细胞数量也不断增高，甚至与正常人差异不大，表明患者体内免疫系统处于活跃状态，此时应是清除病毒的时期，是否可以考虑当患者体内病毒载量升高时，对患者进行抗病毒及各种免疫治疗来达到清除病毒的目的，需要对患者体内各类淋巴细胞的功能进行详细的了解，也将成为我们今后进一步研究的方向。

【参考文献】

［1］曾艳梅，张思泉，娄国强，等.替比夫定阻断乙肝病毒宫内感染的临床研究.中国临床药理学与治疗学，2010，15（4）:443-445.

［2］Zhang Y，Ren Y，Wu Y，et al.The L60V variation in hepatitis B virus core protein elicits new epitope-specific cytotoxic T lymphocytes and enhances viral replication.J Virol，2013，87 （7）:8075-8084.

［3］马萍，宋诗铎，王磊.阿德福韦治疗对慢性乙型肝炎患者Th细胞相关细胞因子水平及HBVDNA的影响.中国感染控制杂志，2011，10（1）:15-17.

［4］Zhu X，Chen L，Fan W，et al.An intronic variant in the GRP78，a stress-associated gene，improves prediction for liver cirrhosis in persistent HBV carriers.PLoS One，2011；6（7）:e21997.

［5］中华医学会肝病学分会和感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）.实用肝脏病杂志，2011，14（2）：81-89.

［6］张小，兪海英，郭银燕，等.阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎儿童外周血T淋巴细胞的变化.实用肝脏病杂志，2013，16（6）:546-547.

［7］Shrivastava S，Trehanpati N，Patra S，et al.Increased regulatory T cells and impaired functions of circulating CD8 T lymphocytes is associated with viral persistence in hepatitis B viruspositive newborns.J Viral Hepat，2013，20（8）：582-591.

［8］廖丹，张秀兰，王滏，等.慢性乙型肝炎病毒携带者抗病毒治疗的临床疗效观察.广西中医学院学报，2004，7（3）:41-42

［9］Lee YH，Bae SC，Song GG，et al.Hepatitis B virus（HBV）reactivation in rheumaticpatientswithhepatitiscoreantigen （HBVoccultcarriers）undergoinganti-tumornecrosisfactor therapy.Clin Exp Rheumatol，2013，31（1）:118-121.

［10］詹辉，王剑松，武城闯，等.CD3+T淋巴细胞在膀胱癌肿瘤上皮与癌旁尿路上皮中的分布差异研究.昆明医科大学学报，2014，35 （1）:28-31.

［11］Bashour KT，Gondarenko A，Chen H，et al.CD28 and CD3 have complementary roles in T-cell traction forces.PNAS，2014，111（2）:2241-2246.

（收稿：2014-09-16）（

本文编辑：际宗炳）

第一作者：王慰，女，38岁，医学学士，副主任医师。主要从事中西医结合治疗感染性疾病研究。E-mail：wwei1818@sina.com

DOI：10.3969/j.issn.1672-5069.2015.01.019

*基金项目：河北省卫生厅科研基金项目（编号：20090607）

作者单位：050021石家庄市第五医院肝病科（王慰，郑欢伟，李兵顺）；检验科（杨莉）；河北医科大学第二医院急诊科（高恒波）

通讯作者：李兵顺，E-mail：crb49lbs@163.com

Changes of T lymphocyte subsets in chronic hepatitis B virus carriers with different serum HBV DNA loads Wang Wei，Yang Li，Gao Hengbo，et al.Department of Liver Diseases，Fifth Hospital，Shijiazhuang 050021，HeBei Province

【Key words】Chronic hepatitis B virus carriers；T lymphocyte subsets；Flow cytometry；HBV DNA