李 末，凌 燕，任 敏，况海斌，杨 蓓*

(1.南昌大学 基础医学院 生理学教研室, 江西 南昌 330006； 2.江西省人民医院 妇产科， 江西 南昌 330006)



重组kisspeptin- 10抑制子痫前期患者HUVECs的体外增殖、迁移及血管形成

李 末1，凌 燕2，任 敏1，况海斌1，杨 蓓1*

(1.南昌大学 基础医学院 生理学教研室, 江西 南昌 330006； 2.江西省人民医院 妇产科， 江西 南昌 330006)

子痫前期患者主要特征是胎盘血管形成异常，其血清及胎盘中kisspeptin表达水平明显上升[1]，其受体GPR54表达于冠状动脉，且kisspeptin- 10可促进冠状动脉收缩[2]，故推测，kisspeptin/GPR54系统可能参与子痫前期异常血管的形成与发展。本研究应用体外培养人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)，观察kisspeptin- 10对子痫前期患者HUVECs增殖、迁移及血管形成的影响，揭示其在子痫前期发病中作用。

1 材料与方法

1.1 材料：脐带取自江西省人民医院妇产科，且获该单位伦理委员会的批准及患者知情同意；GPR54 抗体(Novus公司)；重组Kisspeptin- 10(Phoenix公司)，MTS试剂盒(Promega公司)。

1.2 方法：1)常规分离与培养HUVECs。2)免疫荧光染色：细胞经甲醇和丙酮固定，后加入兔抗人GPR54 抗体，再用抗兔FITC标记的二抗，碘化丙啶(PI)染核，在激光共聚焦显微镜下观察荧光信号。3)细胞增殖：采用MTS法。实验分为5组(每组n=4)：①对照组；②～④组浓度分别为1、100 nmo/L和1 μmol/L重组Kisspeptin- 10；⑤10%胎牛血清组(10%FCS)。

4)划痕和管状结构形成实验：实验分为3组(每组n=4)：①对照组；②子痫前期患者组； ③1 μmol/L Kisspeptin- 10干预组。10% FCS培养48 h时后，采用尼康 TS2100 采集图片，用ImageJ软件计算细胞迁移距离和管状结构的面积。每组实验重复3次。

2 结果

2.1 GPR54 受体在HUVECs的表达：GPR54 受体蛋白表达于HUVECs(图 1)。

2.2 Kisspeptin- 10对HUVECs增殖的影响：kisspeptin- 10浓度为 100 nmol/L 和1 μmol/L时，可明显抑制HUVECs增殖(P<0.05，P<0.01)；10% 胎牛血清明显增加HUVECs增殖(P<0.01)(图 2)。

2.3 Kisspeptin- 10明显降低HUVECs迁移：1 μmol/L kisspeptin- 10组，HUVECs迁……