庞荣清，王强，杨建勇，朱光旭，李自安，何洁，朱向情，阮光萍，潘兴华

骨髓胚胎样干细胞体内重建dystrophin的表达

庞荣清，王强，杨建勇，朱光旭，李自安，何洁，朱向情，阮光萍，潘兴华

目的观察骨髓胚胎样干细胞体内再生dystrophin的可行性。方法采用SSP-PCR方法鉴定mdx小鼠的基因型。分离扩增人骨髓胚胎样干细胞，采用DIR标记后，注射细胞到mdx小鼠腹股沟三角皮下，采用活体成像法观察植入细胞的存活情况，采用免疫荧光染色法检测dystrophin的表达。结果杂合子鼠交配可以产生3个基因型的子代鼠，采用SSP-PCR可以鉴定出mdx小鼠基因型；采用无血清培养基可从骨髓中分离到表达SSEA-4和FZD-9的胚胎样干细胞，可在注射细胞的mdx小鼠离体后肢肌肉检测到明显的荧光信号，并在肌肉组织中检测到人dystrophin的表达。结论人骨髓胚胎样干细胞可在mdx小鼠体内存活并表达dystrophin。

骨髓；胚胎样干细胞；mdx小鼠；基因型；dystrophin；Duchenne型肌营养不良

Duchenne型肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy，DMD)是临床上常见的神经内科遗传病，目前尚无有效治疗方法[1]。研究DMD治疗、尤其是干细胞治疗，mdx小鼠是常用的动物模型[2]。本课题前期研究[3]表明，从骨髓中可以分离获得表达多潜能抗原标志的胚胎样干细胞(embryonic-like stem cells，ELSCs)，这些细胞已成为目前成体干细胞生物学研究的一个亮点。本实验以mdx小鼠为研究对象，探讨骨髓胚胎样干细胞在体内再生dystrophin的可行性。

1 材料与方法

1.1 实验动物及试剂器材DMD模型种鼠(牛津大学Davies教授惠赠，检疫许可证号AD44010011)，饲养于屏障系统动物实验室[SYXK(滇)2013-0011]；无血清培养基和trypsin-EDTA均为invitrogen公司生产；……