宇川川，贾桂燕，李丽阳，阮洪生，赵竹青，崔玉，葛文中

（1.黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆 163319；2.齐齐哈尔市梅里斯区第二中学）

甾体的微生物转化是一种有效且经济的能制备药用活性成分的重要方法。存在于中枢和外周神经系统的孕甾烯醇酮（Pregnenolone，PREG），对睡眠、细胞兴奋性毒性等产生作用，在体内可被代谢为20α-羟基化和7α-羟基化产物[1]。而7α-羟基孕甾烯醇酮能提高小鼠的免疫反应[2]，具有抗糖皮质激素的功效[3]，能提高空间记忆[4]，并可作为神经元的激活剂去激发自主活动[5]。

研究表明，Fusarium oxysporum var.cubense[6]，Exophiala jeanselmei var.lecanii-corni[7]等菌株使孕甾烯醇酮发生7α-羟基化反应，而孕甾烯醇酮分别被Mucor plumbeus[8]和 Mucor circi -nelloides var lusitanicus[9]转化为7α，11β-和7α，11α-二羟基化产物。葛文中[10，11]利用Mucor racemosus 对一系列3-羟基-5-烯甾体进行生物转化，研究发现该菌株的生物转化具有较强的规律性，都能专一性的发生7α 羟基化，C5-C6 双键的形成对羟基化位置的引入有重要影响，C16-C17 双键及16α，7α-环氧甾体发生16-甲氧基的新反应。

林生毛霉可以分泌蛋白酶，应用于腐乳的加工过程[12]，鲍松林等[13]对生产绍兴腐乳的林生毛霉的蛋白酶进行系统检测研究。本研究利用M.silvaticus 对孕甾烯醇酮进行生物转化，采用IR、MS 和2D NMR等波谱方法对转化产物的结构进行鉴定，对13C 谱数据进行归属，并详细地解析了3β，7α，9α-三羟基-5-烯-20-酮，为系统分析甾体微生物转化和其他甾体衍生物结构鉴定提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

孕甾烯醇酮、林生毛霉（Mucor silvaticus AF 93204，购自中国典型培养物保藏中心）；发酵培养液：1 000 mL 水、12 g 蛋白胨、30 g 葡萄糖、1 g 酵母膏、1.3 g KH2PO4，用浓盐酸调pH 为4.5；实验室所用各种试剂均为分析纯。……