张璐莹，罗春海，许启有，李诗莹，邹晓，付世新

（黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319）

子宫内膜炎是奶牛主要疾病之一，对畜牧经济有着直接的经济影响。子宫内膜炎主要发生的原因为细菌感染[1]，而目前临床治疗仍旧以抗生素为主要治疗方法，伴随着耐药性和药物残留问题的日益凸显，临床治疗上需要可以替代抗生素的新型药物[2]。溶菌酶作为一种绿色药物[3]，受到了人们的关注，其具有杀菌效果强、菌谱广、稳定性好等优点[4-5]。以此为基础，实验室通过毕赤酵母表达系统制备了重组牛乳溶菌酶，并对其纯化浓缩后获得重组牛乳溶菌酶粉剂，不仅具有以上的生物学作用，同时具有同源性的优势。实验主要通过对牛乳溶菌酶进行溶血试验和刺激性试验，进行安全性评价，为进一步临床试验提供保障和依据。

1 材料

1.1 实验动物

健康白兔家兔6 只，体重2.0～2.5 kg。

1.2 溶菌酶

实验室制备的重组牛乳溶菌酶粉剂。

1.3 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌由黑龙江八一农垦大学诊断实验室提供。

2 方法

2.1 牛乳溶菌酶抑菌效果的确定

2.1.1 牛乳溶菌酶溶液和菌液的制备

取实验室已获得的纯化浓缩后的重组牛乳溶菌酶粉剂，用蒸馏水配制成浓度为10.0 mg·mL-1的牛乳溶菌酶溶液[6]。将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌在营养琼脂平板上划线分离培养，挑取少量单个菌落加入肉汤培养基中，37 ℃恒温箱培养 24 h，分别制成肉汤培养基。

2.1.2 牛乳溶菌酶抑菌效果的测定