南文金，黄健强，胡鸿惠，吴静波，龚中贵，彭国良，于文涛

（1.韶关学院 动物疫病实验室,广东 韶关512005；2.广东省粤北生猪生产及疫病防控协同中心,广东 韶关512005；3.韶关市动物卫生防疫监督所,广东韶关512026）

猪O型口蹄疫母源抗体的变化规律及应用

南文金1，2，黄健强1，2，胡鸿惠1，2，吴静波1，2，龚中贵2，3，彭国良2，于文涛1，2

（1.韶关学院 动物疫病实验室,广东 韶关512005；2.广东省粤北生猪生产及疫病防控协同中心,广东 韶关512005；3.韶关市动物卫生防疫监督所,广东韶关512026）

摘要：O型口蹄疫是猪场疫病防控的重点之一.对猪群进行科学免疫是猪场防控O型口蹄疫病毒感染的重要途径,为确定某猪场仔猪O型口蹄疫的首免时间,以该场经O型口蹄疫灭活疫苗免疫的母猪所产的仔猪为研究对象,利用口蹄疫O型正向间接血凝抗体检测试剂盒对不同日龄段仔猪群母源抗体进行检测.结果表明,37～44日龄时,仔猪的母源抗体效价合格率为70%；45～51日龄时,仔猪的母源抗体效价迅速下降,合格率仅为40%左右.检测结果说明该猪场仔猪O型口蹄疫首次免疫最佳时间在45～50日龄比较适宜.

关键词：仔猪；O型口蹄疫；母源抗体

猪口蹄疫（Food-and-Mouth,FMD）是由口蹄疫病毒（Food-and-Mouth Virus,FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性高度传染性疫病,被世界动物卫生组织（OIE）列为必须通报的动物疫病,我国将其列为一类动物传染病［1］.口蹄疫血清型复杂,目前发现的有7个血清型.根据近几年相关报道及农业部疫情通报,我国猪口蹄疫流行还以O型为主,偶有A型猪口蹄疫发生［2］.

口蹄疫病毒主要传染途径是直接接触传播和气源性传播.直接接触带毒的动物、动物产品、运输车辆等都可以引起疫情传播,本病同时也可以发生远距离气源性传播,随口鼻呼出的气溶胶病毒可随风传播数百公里［3］.猪口蹄疫病毒母源抗体能保护仔猪早期免遭病原感染,但随着仔猪日龄增加,母源抗体水平会不断降低,需要及时通过接种疫苗提高抗体水平.首免时间对疫苗免疫成败有重要影响,若首次免疫时间过早,可能受到母源抗体的干扰导致免疫失败；若免疫时间过晚,母源抗体水平过低,免疫空白期较长,增加了感染和发病风险［4］.本试验通过正向间接血凝试验试验对某猪场不同日龄仔猪的O型口蹄疫母源抗体水平检测,通过母源抗体消长规律确定最佳首免时间,为猪场提高O型口蹄疫苗免疫效果提供科学依据.

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1血清来源

试验猪的血样采集自粤北某规模化养猪场,该场采用分区饲养,全进全出的饲养模式.

1.1.2实验器材和试剂

台式高速离心机（美国THERMO）,微量移液器（芬兰百德公司生产）；96孔110°V型血凝板；口蹄疫O型间接血凝抗体检测试剂盒（中国农业科学院兰州兽医研究所,批号∶2014120504）.

1.2方法

1.2.1抗体检测

根据该场生产流程,选择没有接种O型口蹄疫灭活疫苗,按生产批次饲养在不同猪舍的出生6～8、15～17、20～23天产房仔猪,出生28～34、37～44、45～51、52～60天保育舍仔猪和出生61～69、70～82天育肥前期猪,每个日龄段随机选择20头仔猪,前腔静脉采血5 mL左右,实验室离心制备血清,按口蹄疫O型间接血凝抗体检测试剂盒操作说明进行母源抗体检测.另外分别采集了20头猪出生83～90天,经O型口蹄疫灭活疫苗首次免疫后15天的的生长育肥猪和产前1个月的怀孕母猪血液样本进行了O型口蹄疫抗体水平检测.

1.2.2抗体水平判定标准

按试剂盒说明,以呈现“＋＋”血凝反应的血清最高稀释度作为该血清的间接血凝抗体效价.当阳性对照血清抗体效价≥1∶256、阴性对照血清抗体效价≤1∶16、稀释液对照孔无自凝现象时,试验成立.猪口蹄疫O型抗体效价≥1∶128为免疫合格.

2　结果

2.1猪O型口蹄疫抗体效价检测结果

表1的检测结果显示,出生6～8天仔猪O型口蹄疫母源抗体效价合格率为80%；出生15～17、20～22、28～34天的仔猪O型口蹄疫母源抗体效价合格率均为90%；出生37～44日龄段仔猪的O型口蹄疫母源抗体水平开始下降,但合格率仍能达到70%；出生45天之后的仔猪O型口蹄疫母源抗体迅速下降,在采集的出生45～51、52～60、65～69、70～82天的仔猪样品中,O型口蹄疫母源抗体效价合格率在0%～40%.随机采集的产前1个月母猪O型口蹄疫抗体效价合格率达到100%,其中19头母猪抗体效价≥1：256,仅一头为1：128（文中为列数据）.经O型口蹄疫灭活疫苗首次免疫后15天的的生长育肥猪抗体效价合格率为40%.

表1　不同日龄猪O型口蹄疫抗体效价检测结果

2.2仔猪O型口蹄疫母源抗体变化规律

未进行猪O型口蹄疫疫苗免疫的仔猪母源抗体效价变化规律（图1）显示,该场仔猪O型口蹄疫母源抗体在2周龄左右达到最高水平,高水平母源抗体可以维持到5周龄；采集的出生37～44天仔猪群母源抗体水平开始下降,但抗体效价合格率仍然可以达到70%；出生45～51天,即约7周龄左右的仔猪群仔猪母源抗体下降迅速,抗体效价合理率为40%；7周龄之后仔猪母源抗体水平很低,在分阶段采集的3个不同日龄段的猪群中,仅在出生65～69日龄的猪群中检测到20%的样品为抗体水平合格.

图1　猪O型口蹄疫母原抗体消长规律

3　讨论

规模养猪是以群体免疫而不是个体免疫的理念进行疫苗免疫,在进行抗体监测时的抽样要根据猪场具体生产模式、检测目的设计合理的采样方案,获得的检测数据代表一个群体的免疫状态.试验猪场是按“周”为生产周期设计猪栏（舍）数量,严格执行全进全出和分区饲养,猪群转入下一个生产区时也是按同一栏或同一栋（间）猪转入相应的栏舍饲养,猪的疫苗免疫也是按栏或栋（间）为单位进行免疫,因此,本研究采样方案设计是按猪场实际生产流程,采集的每一日龄阶段样品即为免疫时间为同一天的同一批猪,所以出生时间有相应的跨度,按此采样方式检测的数据代表了该批次猪群整体抗体水平和变化规律,得到的检测结果更符合规模化猪场生产流程和免疫接种操作方案,对免疫程序的制定有更现实的指导意义.

猪在胎儿时期不能从母体获得母源抗体,新生仔猪通过吮吸初乳经消化道吸收获得母源抗体,母源抗体保护初生仔猪免受病原侵袭,提高仔猪抗病力和成活率方面发挥重要作用.本研究O型口蹄疫抗体水平检测结果表明该场绝大多数母猪O型口蹄疫抗体效价均≥1∶256,这就为仔猪获得较高水平的母源抗体提供了保障.但根据从表1数据统计可知,在不同日龄阶段的哺乳仔猪群体中母源抗体合格率最高为90%,并没有达到100%抗体合格率.在吕立新等利用液相阻断ELISA对仔猪O型口蹄疫母源抗体消长规律的研究中,也有部分哺乳期仔猪母源抗体水平较低,不同日龄仔猪母源抗体最高保护率为80%［5］.出现个别哺乳仔猪母源抗体较低或呈阴分析最主要原因可能是出生2小时内没有吮吸到足够的初乳.

根据图1结果可知,随着仔猪日龄增加,母源抗体效价维持一段时间后开始下降.该场仔猪出生2周左右后母源抗体水平达到最高,且维持在一个较高水平至大约5周龄.在6～7周龄间,猪O型口蹄疫母源抗体的效价开始下降到70%.在约7周龄之后采集的各个阶段的样品母源抗体效价迅速下降,抗体合格率都比较低或全部样品为阴性,该场O型口蹄疫母源抗体消长规律和吕立新的报道结果相一致［5］,科学的首免日龄应该选择在45～50日龄进行.余琼等的报道中［6］,21日龄仔猪O型口蹄疫母源抗体合格率为66.67%,28日龄时有三分之一的仔猪母源抗体水平还能提供保护,35日龄仔猪母源抗体水平保护率仅有6.6%,显然其监测的猪场仔猪O型口蹄疫母源抗体下降速度比较快,首免日龄应该选择在25日龄左右.

首免时间合理对猪口蹄疫免疫免疫成败至关重要,但免疫效果研究表明猪口蹄疫疫苗仅仅一次免疫对猪群的保护率较低,必须进行加强免疫才能使猪群整体抗体水平较高［6-8］.本试验采集了O型口蹄疫灭活疫苗首免后15天的生长育肥猪血液样品20份（出生83～90天猪群）,根据该场猪口蹄疫母源抗体消长规律可知此批生长育肥猪进行O型口蹄疫首免时母源抗体效价已经很低,但首免后15天抗体效价合格率仅为40%,.在母源抗体水平极低情况下接种疫苗,首免后15天抗体水平仍然很低,因此在口蹄疫疫苗免疫必须在首免疫后3～4周加强免疫一次.

母源抗体在保护仔猪早期免遭病原感染的同时又通过清除抗原物质、中和弱毒疫苗抗原和对机体免疫系统特异性抗原位点的封闭而对疫苗免疫发挥干扰作用［9］.母源抗体消长规律和母猪群抗体水平以及猪群健康状态密切相关,针对不同猪场开展的口蹄疫母源抗体消长规律研究得到的结果不尽相同,根据相关报道［5-6,10］,不同猪场O型口蹄疫最佳首免日龄不同,最早的有21日龄首免,最晚的有50日龄进行首免,因此在生产中猪场要根据口蹄疫O型母源抗体水平决定最佳首免疫日龄.

参考文献：

［1］孔宪刚.兽医微生物学［M］.2版.北京∶中国农业出版社,2013∶664-665.

［2］中华人民共和国农业部.动物疫情状况［J］.兽医公报,2015,17（2）∶1-2.

［3］张海明,王艳丽,田野,等.猪口蹄疫的流行特点［J］.猪业科学,2015（1）∶34-35.

［4］项科顺,张娟,孙红祥.猪口蹄疫的疫情现状及防控措施的最新研究进展［J］.浙江畜牧兽医,2015,40（2）∶9-12.

［5］吕立新,何孔旺,倪艳秀,等.规模化猪场不同日龄仔猪O型口蹄疫母源抗体规律及免疫试验［J］.江苏农业科学,2011,39 （5）∶304-306.

［6］余琼,李建,周治平,等.猪O型口蹄疫母源抗体消长规律的测定和免疫效果观察试验［J］.西昌学院学报,2012,26（2）∶22-24.

［7］项朝荣,王儒磊,赵建东,等.猪O型口蹄疫疫苗免疫抗体消长动态研究［J］.安徽农业科学,2015,43（8）∶109-111.

［8］陈正博,魏邦香.仔猪口蹄疫最佳免疫时间试验研究与分析［J］.国外畜牧业—猪与禽,2014,34（12）∶50-51.

［9］Zinkernage1R M.Materna1antibodies,chi1dhood infections,and autoimmune diseases［J］.New Eng1and Journa1of Medicine, 2001,345（18）：1331-1335.

［10］杨先富,王开功,李毅,等.仔猪口蹄疫母源抗体消长规律监测［J］.山地农业生物学报,2007,26（1）∶26-29.

（责任编辑∶闫文龙）

中图分类号：Q95-331

文献标识码：A

文章编号：1007-5348（2015）10-0049-07

［收稿日期］2015-06-26

［基金项目］韶关市科技计划项目（2013CX/N09）.

［作者简介］南文金（1981-）,男,河南灵宝人,韶关学院动物疫病实验室助理研究员,硕士；研究方向∶动物疫病检测技术与防控技术.

The Change Regularlty and APPllcatlon of
Sw lne TyPe-O Foot-and-m outh M aternal Antlbody

NANWen-jin1,2,HUANG Jian-qiang1,2,HU Hong-hui1,2,WU Jing-bo2, GONG Zhong-gui3,PENG Guo-1iang2,YUWen-tao1,2（1.Laboratory of Anima1Disease,Shaoguan University,Shaoguan 512005,Guangdong,China；
2.North Guangdong Co11aborative Innovation and Deve1oPment Center of Pig Farming and Disease Contro1, Shaoguan 512005,Guangdong,China；3.Shaoguan Institute of Anima1Hea1th SuPervision, Shaoguan 512026,Guangdong,China）

Abstract:The tyPe-O Foot-and-mouth（FMD）is one of the imPortant diseaseswhich needed to be contro11ed. Scientific immunization is themain way to contro1and Prevention Pig PoPu1ation infected with the tyPe-O Footand-mouth virus（FMDV）.In order to determine the date of first immunization of FMD vaccine in a Pig farm, some b1ood samP1eswere co11ected from different days-o1d Pig1etswhich born from sows immunization of inactivated tyPe-O FMDV vaccine.The samP1esmaterna1antibody was tested by tyPe-O FMD indirect hemagg1utination antibody detection reagent kit.The resu1ts showed that the Pig1ets between 37 to 44 days,which qua1ified rate ofmaterna1antibody 1eve1sti11can reach 70%,but between 45 to 51 days o1d,thematerna1antibody titer Percent of Pass raPid1y decrease to 40%.There data revea1ed that tyPe-O FMDV vaccine first immune date of Pig1ets between 45 to 50 days o1d can be use in the Pig farm.

Key words∶Pig1et；tyPe-O Foot-and-mouth；materna1antibody