王尚凯，崔　莹，刘　红，高　冰　（河南省封丘县人民医院病理科，河南 封丘 500；郑州市卫生学校病理教研室，河南省武警总队医院，郑州大学护理学院，河南郑州50000）

S⁃100和HPA蛋白在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及意义

王尚凯1，崔莹2，刘红3，高冰4（1河南省封丘县人民医院病理科，河南 封丘 453300；2郑州市卫生学校病理教研室，3河南省武警总队医院，4郑州大学护理学院，河南郑州450000）

目的：探讨 S⁃100和 HPA在涎腺腺样囊性癌（SACC）中的表达以及在嗜神经侵袭和转移方面的意义．方法：采用免疫组化SP法检测44例涎腺腺样囊性癌中S100 和HPA的表达．结果：S⁃100与HPA在腺样囊性癌（SACC）中的表达与肿瘤嗜神经侵袭性、局部侵袭性和远处转移相关（P＜0．05）；与患者的年龄、性别和临床分期无关（P＞0．05）．结论：S⁃100与HPA蛋白在腺样囊性癌的嗜神经侵袭与远处转移中起重要作用．

S⁃100；乙酰肝素酶；腺样囊性癌；嗜神经侵袭；远处转移

涎腺腺样囊性癌（saliary gland adenoid cystic carcinoma，SACC）在涎腺肿瘤中的发病率较高，侵袭性强，远处转移率高，有典型的嗜神经性，早期即可发生神经侵袭和转移，导致面瘫、疼痛及麻木等神经受损［1］和手术范围难以确定的症状．在腺样囊性癌的神经侵袭研究中，发现肿瘤细胞的施万分化可能与侵袭神经有关［2］，而S⁃100作为施万细胞的标志物，最早被发现存在于胶质细胞和神经膜细胞以及它们的肿瘤中．S⁃100蛋白是一种高度酸性钙结合蛋白，富含苯丙氨酸，相对分子质量为21 000．乙酰肝素酶（heparanase，HPA）是近年来发现的与肿瘤侵袭和转移以及肿瘤新生血管形成有关的一种重要功能酶［3］．本研究采用免疫组化霉菌抗生物素蛋白⁃过氧化物酶连结（streptavidin⁃perosidase，SP）法，检测腺样囊性癌中S⁃100和HPA蛋白的表达，探讨表达的意义．

1　资料和方法

1．1临床资料选取2000～2012年郑州大学第一附属医院口腔外科手术切除资料详实的腺样囊性癌病例44例，所有病例术前均无放疗、化疗史且均经过病理确诊．男20例，女24例；年龄19～78（中位52）岁；有区域淋巴结或远处转移15例；TNM临床分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期16例，Ⅲ期10例，Ⅳ期7例；有神经侵袭症状13例，无侵袭11例．

1．2主要试剂兔抗人S⁃100多克隆抗体，兔抗人HPA单克隆抗体，即用型免疫组化SP法检测试剂盒，DAB显色试剂盒，均购自北京中杉金桥生物技术有限公司．

1．3实验方法免疫组化SP法按试剂盒说明进行操作，每例蜡块进行连续切片3张，每张4 um．一张染HE作对照观察，两张分别作S⁃100和HPA抗体染色．以PBS代替一抗作空白对照，用已知阳性表达的神经鞘瘤和乳腺癌分别作S⁃100和HPA的阳性对照．

1．4结果判定免疫组化结果以细胞质和细胞核中呈棕黄色染色为阳性表达．以染色强度和阳性细胞比例判断阳性表达情况：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分，深褐色为4分；阳性细胞数占所有肿瘤细胞的百分率≥5%判定为阳性［4］，阳性细胞率＜5%为0分，5%≤阳性细胞率＜10%为1分，10%≤阳性细胞率＜50%为2分，阳性细胞率≥50%为3分．表达强度＝染色强度×阳性细胞比例，0～2分为（－），3～4分为（＋），5～7分为（＋＋），8～9分为（＋＋＋）．

1．5统计学处理应用统计学软件SPSS13．0进行统计学分析，比较采用x2检验；相关分析使用Spean⁃man相关分析，P＜0．05表示差异有统计学意义．达率为97．73%，HPA表达率为63．64%，二者的表达呈正相关（r＝0．76，P＜0．05）．S⁃100与HPA蛋白在腺样囊性癌（SACC）组织中的表达与肿瘤嗜神经侵袭性、局部侵袭性和远处转移相关（P＜0．05）；与患者的年龄、性别和临床分期无关（P＞0．05，表1）．

2　结果

S⁃100表达于腺样囊性癌细胞的细胞核，阳性细胞染色较深（图1A），HPA表达于肿瘤细胞的细胞质中（图1B）．二者在腺样囊性癌均呈高表达，S⁃100表

图1　S100和HPA在腺样囊性癌中的表达

表1　S100与HPA在腺样囊性癌中的表达及与临床病理之间的关系［n（%）］

3　讨论

腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma，ACC）可发生于任何大小的涎腺，约占涎腺上皮性肿瘤的10%，涎腺恶性上皮性肿瘤的21．1%［5］．由于腺样囊性癌发病隐匿，具有局部浸润性生长和沿神经血管束扩散的特性［1］，术后易复发、转移，难以控制．侵袭和转移是腺样囊性癌的重要生物学特征，也是目前研究的热点．其过程复杂，肿瘤细胞穿越细胞外基质（extracel⁃luler matrices，ECM）和基底膜（basement membrane，BM）组成的组织学屏障以及肿瘤新生血管形成是这一过程的重要环节．肿瘤沿神经浸润是指肿瘤细胞包绕神经纤维，并进入神经束膜内沿其扩展的局部浸润转移现象．大量研究证明［6］腺样囊性癌出现嗜神经侵袭性是癌细胞向施万细胞分化的内在原因．

1965年，Moore发现了S⁃100蛋白，其可溶解在100%硫酸铵溶液中形成钙结合蛋白［7］，它是一种小分子酸性蛋白，由两个亚基组成．S⁃100是施万细胞的标志物，在腺样囊性癌中高表达，提示腺样囊性癌可能发生施万细胞分化，而这些肌上皮来源的腺样囊性癌细胞发生了神经膜细胞分化进而具有了嗜神经侵袭能力．

乙酰肝素酶（heparanase，HPA）是新近克隆出来的一种作用于细胞外基质多聚糖成分的酶—即肿瘤转移关键酶，它不仅破坏组织屏障，促进肿瘤细胞侵入基质和血管壁，而且通过调节生长因子的活性诱发新生血管的生成，与肿瘤的侵袭转移密切相关［3］．在正常情况下，HPA主要分布在胎盘、免疫器官（如脾脏、淋巴结、胸腺等）、免疫细胞（如中性粒细胞、单核巨噬细胞、淋巴细胞、血小板等）、平滑肌细胞和培养的内皮细胞中，而在成熟组织中如心、脑、肺、肝、骨骼肌、肾和胰腺等则无明显表达［8］，而在生长和转移的恶性肿瘤细胞中该酶普遍存在，大部分研究观测到该酶定位于胞浆［9］．在我们的研究中发现，S⁃100与HPA在腺样囊性癌蛋白上的表达是一致的，与肿瘤嗜神经侵袭性、局部侵袭性和远处转移相关（P＜0．05）；与患者的年龄、性别和临床分期无关（P＞0．05）．特异性的标志物可以使我们更好的了解腺样囊性癌的特性，不仅可以指导临床，也为腺样囊性癌的转移和神经侵袭的研究提供依据．

［1］高太虎，王旭红，米玉录．涎腺腺样囊性癌130例疗效分析［J］．中国药物与临床，2004，12（4）：966－967．

［2］孙沫逸，陈伟，杨连甲，等．许旺氏标记物GFAP与肌上皮细胞标记物α⁃SMA在涎腺腺样囊性癌中共表达［J］．中华口腔医学杂志，2006，41（8）：461－463．

［3］Elkin M，Ilan N，Ishai⁃Michaeli R，et al．Heparanase as mediator of angiogenesis：mode of action［J］．FASEB J，2001，15（9）：1661－1663．

［4］Kawasaki H，Altieri D C，Lu C D，et al．Inhibition of apoptosis by survivin predicts shorter survival rates in colorectal cancer［J］．Cancer Res，1998，58（22）：5071－5074．

［5］Aksoy E，Unlu E，Sensoe O．A retrospective study on epidemiology and treatment of maxillofacial fractures［J］．JCraniofac Surg，2002，13（6）：772－775．

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［7］Moore BW．A soluble protein characteristic of nervous system［J］．Biochem Biophys Res Commun，1965，19（6）：739－744．

［8］Ginath S，Menczer J，Friedmann Y，et al．Expression of heparanase，Mdm2，and erbB2 in ovarian cancer［J］．Int JOncol，2001，18（6）：1133－1144．

［9］Zester A，Levy AF，Kaplan V，etal．Processing and activation of latent heparanase occurs in lysosomes［J］．JCell Sci，2004，117（11）：2249－2258．

Expression and significance of S⁃100 protein and HPA protein in salivary gland adenoid cystic carcinoma

WANG Shang⁃Kai1，CUIYing2，LIU Hong3，GAO Bing4
1Department of Pathology，People's Hospital of Fengqiu，Fengqiu 453300，China；2PathologyStaff Room，ZhengzhouHealth School，Zhengzhou 450000，China；3Armed Police Corps Hospital in Henan Province，Zhengzhou 450000，China；4Nursing School of Zhengzhou University，Zhengzhou 450000，China

0　引言

A IM：To explore the protein expression of S⁃100 and heparanase（HPA）in saliary gland adenoid cystic carcinoma （SACC），and its significance in perineural invasion and metastasis．M ETHODS：The expression of S⁃100 and HPA of 44 patients with saliary gland adenoid cystic carcinoma were detected by immunohistochem ical streptavidin⁃perosidase（SP）method．RE⁃SULTS：The protein expression of S⁃100 and HPA in SACC was related to tumor perineural invasion，local aggressive and distant metastasis（P＜0．05），and no relation was observed between protein expression of S⁃100 and HPA in SACC in patient's age，gender as well as clinical stages（P＞0．05）．CONCLUSION：S⁃100 protein and HPA protein plays an important role inperineural invasion and distantmetastases of adenoid cystic carcinoma．

S⁃100；HPA；SACC；perineural invasion；distant metastasis

R739．8

A

2095⁃6894（2015）08⁃004⁃03

2015－07－25；接受日期：2015－08－10

王尚凯．E⁃mail：WANGshk01＠163．com