包纳日斯 何套格苏 牧 丹 包青兰

(1.内蒙古医科大学蒙医药学院，内蒙古 呼和浩特 010010;2.内蒙古医科大学计算机信息学院，内蒙古 呼和浩特 010010;3.内蒙古医科大学2013 级硕士研究生，内蒙古 呼和浩特 010010;4.内蒙古医科大学2015 级硕士生，内蒙古 呼和浩特 010010;)

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一种长期过量饮酒使肝实质细胞脂肪变性和脂肪贮积为特征的临床病理综合征，大量流行病学调查显示，我国NAFLD 的发病率可高达15%以上，并且随着生活水平的提高，发病率正成倍增加［1］，因此，有效防治NAFLD，以及加强对NAFLD 治疗的探讨具有积极意义。本研究通过建立大鼠NAFLD 动物模型，根据祖国传统蒙医药理论“三根调节法”，即抑“赫依”、清“希拉”、祛“巴达干”［2］，使用蒙医临床中常用的、并取得了确切疗效的蒙药方剂巴日巴德-10，观察其对NAFLD 大鼠肝功、血脂水平以及抗氧化能力的影响，为探索其作用机制提供一定的实验依据。

1 材料与方法

1.1 试验药物：马来酸罗格列酮片，葛兰素史克(天津)有限公司，批号：08030115;巴日巴德-10 -由国家蒙药制剂中心(内蒙古国际蒙医院制剂室)提供【呼卫注字(97)001-116】，批号：20120421。

1.2 动物：SD 大鼠，SPF 级，体重80 -100g，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，实验动物合格证号：SCXK(川)2008 -24。

1.3 试剂：胆固醇，成都市科龙化工试剂厂，批号：090521;胆盐，北京奥博星生物技术有限责任公司，批号：20090807;大鼠胰岛素酶联免疫检测试剂盒，批号：200911;其余试剂盒均购自南京建成生物工程公司。

1.4 仪器：VARIOSKAN FLASH 2.4.3 全波长多功能读数仪(Thermo);全自动生化分析仪(7080)CDSYJYK022;AnkeTDL-60c 离心机(上海安亭科学仪器厂);电子天平BP121s 型(STRTORIUS)。

1.5 方法

1.5.1 动物分组 SD 大鼠，适应性饲养1wk 后，按体重随机分为空白对照组和模型对照组。空白对照组动物给予大鼠标准基础饲料，模型对照组每天灌胃给予酒精(56%)加高脂乳剂(1000g 高脂饲料：100g 猪油，20g 胆固醇，5g 胆盐，50g 蔗糖，825g 水)。于第4wk 末处死4 只大鼠，做血脂水平检测及病理检查，结果提示NAFLD 模型成功。将NAFLD 大鼠按体重随机分为模型对照组、阳性药物对照组(马来酸罗格列酮片)、巴日巴德-10 大、中剂量组4 组，每组8 只动物。空白对照组给予等体积的蒸馏水，模型对照组组继续灌服脂肪乳剂2wk 之后也给予等体积的蒸馏水，其余各组均按上述相应给药剂量给予相应药物，每天1 次，连续4wk。实验期间动物自由进水和进食(各组动物均以大鼠标准基础饲料喂养)。末次给药后大鼠禁食16h，取血并分离血清检测各项指标。迅速取出肝脏，经大体解剖观察后，取肝组织约1g 左右，用冷的生理盐水制成10%的肝组织匀浆，离心后取上清液，供肝组织匀浆指标检测。

1.5.2 血清指标检测 全自动生化分析仪测定血清TG 、甘油三酯(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、LDL-C、AST、谷丙转氨酶(ALT)、FFA 以及空腹血糖(FBS)，elisa 试剂盒测FINS 并计算空腹胰岛素抵抗指数FIRI 评价其胰岛素抵抗程度。FIRI = ln［FBS(mmol·L-1)× FINS(mU·L-1)/22.5］，FIRI 的大小与IR 程度呈正相关［4］。

1.5.3 肝组织匀浆指标检测 取肝组织匀浆上清液，全自动生化仪测定TC、TG 含量。考马斯亮蓝法测定肝组织蛋白含量，按试剂盒说明测定超氧化物岐化酶(SOD)、MDA含量。

2 结果

2.1 对NNAFLD 模型大鼠血脂的影响：与空白对照组相比较NNAFLD 模型组大鼠TG、FFA 显著升高(P＜0.01 或P＜0.05)。连续给药4wk 后罗格列酮可显著降低血清LDL-C 水平(＜0.05)，但对其他指标无显著影响。巴日巴德-10 可显著降低血清TG、LDL -C、FFA 水平(P＜0.01 或P＜0.05)，但对TC、HDL-C 无显著影响，见表1。

组别 剂量/g·kg -1 TG/mmol·L -1 TC/mmol·L -1 HDL-C/mmol·L -1 LDL-C/mmol·L -1 FFA/μmol·L -1.8 ±197.3模型对照组 0.58 ±0.15* 1.47 ±0.22 0.93 ±0.17 0.36 ±0.11 1518.7 ±412.4＊＊罗格列酮组 0.003 0.48 ±0.07 1.28 ±0.27 1.06 ±0.21 0.24 ±0.09# 1244.8 ±484.0*巴日巴德-10 2.500 0.36 ±0.06* ## 1.42 ±0.29 1.10 ±0.21 0.24 ±0.10# 926.8 ±247.6##巴日巴德-10 1.250 0.39 ±0.07## 1.26 ±0.19* 0.94 ±0.14* 0.20 ±0.04* ## 1240.0 ±269.7*空白对照组 0.45 ±0.05 1.40 ±0.26 1.11 ±0.14 0.30 ±0.10 868

2.2 对NNAFLD 模型大鼠肝功能指标的影响：与空白对照组相比较NNAFLD 模型组大鼠AST 显著升高(P＜0.01)。连续给药4wk 后罗格列酮可显著降低血清AST 水平(P＜0.05)，但对ALT 无显著影响。蒙药巴日巴德-10 可显著降低AST 水平(P＜0.01)，对ALT 也无显著影响，见表-2。

组别 剂量/g·kg -1 AST/IU·L -1 ALT/IU·L -1 149.1 ±27.0 46.80 ±11.95模型对照组 191.0 ±21.6＊＊ 48.45 ±10.16罗格列酮组 0.003 164.2 ±28.3# 46.25 ±6.78巴日巴德-10 2.500 152.1 ±26.3## 48.10 ±11.83巴日巴德空白对照组-10 1.250 155.3 ±20.2## 46.75 ±9.38

2.3 对NAFLD 模型大鼠FBS、FINS 以及FIRI 的影响 与空白对照组相比较NAFLD 模型组大鼠FINS、FIRI 显著升高(P＜0.01 或P＜0.05)。连续给药4wk 后罗格列酮可显著降低FBS、FINS、FIRI 水平(P＜0.01 或P＜0.05)。巴日巴德-10 可显著降低FINS、FIRI 水平(P＜0.01 或P＜0.05)，但对FBS 无显著影响，见表3。

组别 剂量/g·kg -1 FBS/mmol·L -1 FINS/mU·L -1 FIRI 5.72 ±0.46 7.07 ±0.63 0.6 ±0.07模型对照组 5.79 ±0.66 10.64 ±1.40＊＊0.81 ±0.13*罗格列酮组 0.003 4.82 ±0.69* # 7.24 ±1.37## 0.42 ±0.24#巴日巴德-10 2.500 5.67 ±0.74 6.54 ±0.51## 0.52 ±0.19##巴日巴德空白对照组-10 1.250 5.75 ±0.20 6.61 ±0.41## 0.66 ±0.11

2.4 对NAFLD 大鼠肝组织中TG、TC、SOD 和MDA 的影响：与空白对照组相比较NAFLD 模型组大鼠肝组织TG、TC、MDA 水平显著升高(P＜0.01)。给药4wk 后罗格列酮可显著降低TC，升高SOD 水平(P＜0.01 或P＜0.05)，但对TG、MDA 无显著影响。蒙药巴日巴德-10 可显著降低TG、TC、MDA 水平(P＜0.01 或P＜0.05)，但对SOD 无显著影响，见表4。

组别 剂量/g·kg -1 TG/mmol·L -1 TC/mmol·L -1 SOD/U·mg prot -1 MDA/nmol·mg prot -1 1.08 ±0.39 0.84 ±0.29 24.31 ±2.44 3.53 ±0.71模型对照组 1.76 ±0.51＊＊ 1.34 ±0.48＊＊ 22.88 ±0.52 5.26 ±0.93＊＊阳性对照组 0.003 1.58 ±0.45* 0.86 ±0.27## 24.42 ±1.33# 4.44 ±0.78*巴日巴德-10 2.500 0.98 ±0.24## 0.73 ±0.15## 25.11 ±2.86 3.31 ±0.95##巴日巴德-10 1.250 1.42 ±0.33 0.8 ±0.26## 23.98 ±1.52 3.空白对照组13 ±0.6##

3 讨论

目前对NAFLD 的发病机理没有完全解释清楚，但它的病理生理学被认为与酒精无关，与肥胖、胰岛素抵抗、氧化应激和线粒体功能障碍、细胞因子和脂肪因子的相互作用、细胞凋亡以及小肠细菌的过度生长等有关［5］。现在普遍认同的是“二次打击”学说，这个假说认为“一次打击”胰岛素抵抗导致了肝脏脂肪变性，进而出现脂肪代谢紊乱，TG、TC、FFA 等的堆积以及肝脏损伤。“二次打击”是以氧化应激和脂质过氧化反应为中心。由氧化应激引发的活性氧簇(ROS)的大量增加导致了脂质过氧化反应、炎症、肝细胞凋亡和纤维化［6］。

蒙医药是我国传统医药学重要组成部分，由于蒙古族主要以肉食品、乳制品、面食品等为主食的饮食习惯NAFLD的发病率较高，蒙医学经典著作中有“脂肪过盛病”之说，即脂肪肝病。蒙医理论认为“脂肪过剩病”主要是由于调节人体生理平衡的“赫依”“希拉”“巴达干”(称之为“三根”)功能失调，导致饮食未消化，肝脏内脂肪聚集的一种消化系统慢性疾病。临床中常采用“三根调节法”，抑“赫依”、清“希拉”、祛“巴达干”，使三根趋于平衡，从而维持人体生理的正常代谢［7-9］。代表方剂巴日巴德-10 在临床中用于“三根调节”已经获得了确切疗效，尤其对“混合型脂肪肝”的治疗临床上被公认。

本实验通过灌胃给予高脂肪乳剂建立大鼠NAFLD 模型，造模后大鼠血清AST、FFA、TG、FIRI 显著升高，TC、ALT、LDL-C 水平有升高的趋势，HDL -C 水平有降低趋势但无显著性差异，肝组织TG、TC、MDA 水平也显著升高，SOD 水平有降低的趋势但无显著性差异。提示NAFLD 模型大鼠出现一定程度的肝功能异常、血脂升高、脂质过氧化反应以及胰岛素抵抗，基本符合人类NAFLD 的特点。给药后巴日巴德-10 可显著降低NAFLD 模型大鼠血清TG、AST、FFA、FIRI、LDL-C 水平以及肝组织TG、TC、MDA 水平。表明蒙药巴日巴德-10 可在一定程度上降低NAFLD 模型大鼠血脂水平，改善肝功能损伤和胰岛素抵抗，同时还具有一定抗氧化能力，改善氧化应激和脂质过氧化反应。以上结果提示用蒙药巴日巴德-10 治疗NAFLD 可能与其改善肝功能、降血脂、抗氧化作用以及改善胰岛素抵抗有关，为揭示“三根调节法”(抑“赫依”、清“希拉”、祛“巴达干”)提供了实验依据，同时为了进一步探索蒙医药治疗NAFLD 的机制我们应做更深一步的研究。

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