包满节 乌仁图雅

(内蒙古医科大学 蒙医药学院，内蒙古 呼和浩特 010110)

银露梅为蔷薇科植物银露梅Potentilla glabra Lodd.的茎枝。蒙药常用药材，蒙文名称孟根—乌日阿拉格，银露梅枝有固齿、镇赫依，燥“协日乌素”，用于牙病，肺病，胸肋胀痛，胸肋胀满，“协日乌素”病［1］。银露梅主含槲皮素、三萜类成分及鞣质等有效成分，其中槲皮素的高效液相方法较多，且方法成熟，故以槲皮素的含量作为其质量控制指标［2］。

1 仪器与试药

岛津LC ～10AP 高效液相色谱仪、N2000 色谱工作站(浙江大学智达信息有限公司)、SPD ～10A 型紫外检测器。LGC—1025M 柱温箱、AB135 -S 型电子分析天平(梅特勒-托利多)、KQ-250 型超声波清洗机(巩义予华仪器厂)。试剂：甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

槲皮素对照品：购于中国药品生物制品检定所，批号：0081 ～9304，(供含量测定用)，银露梅样品：内蒙古赛罕乌拉自然保护区，内蒙古大青山劈柴沟，内蒙古蛮罕山，国家蒙药制剂中心。经内蒙古药品检验所蒙药科专家鉴定为蔷薇科植物银露梅(Potentilla glabra Lodd.)的茎枝。

2 方法与结果

2.1 色谱条件：色谱柱：C18 柱(250mm ×4.6mm)，柱温：30℃，检测波长：360nm，流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶ 50)，流速：1.0ml/min，理论塔板数按槲皮素计算应不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备：精密称取槲皮素对照品0.017g，加甲醇定容至100mL 容量瓶中，摇匀，即得浓度为0.17mg/mL 的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备：取本药材粉末(过40 目筛)约1g，精密称定置具塞的锥形瓶中，精密加入80%甲醇50mL密塞。称定重量加热回流1h 放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失重量。摇匀滤过。精密量取续滤液10mL 加入盐酸1mL，置90℃水浴中加热回流1h，取出，迅速冷却。转移至25mL 容量瓶中，加80%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 线性范围的考察：精密吸取槲皮素对照品溶液(浓度为0.17mg/mL)1.5mL，2.5mL，5mL，7.5mL，10mL，分别定容于100mL 容量瓶中，摇匀，得到浓度分别为0.00255mg/mL，0.00425mg/mL，0.0085mg/mL，0.0125mg/mL，0.0170mg/mL，精密吸取10μL，注入液相色谱仪，以峰面积对进样量进行回归，以取样量为X 轴，峰面积为为Y 轴得回归方程Y=2E+0.6X-18494，r=0.9998。结果表明：槲皮素在0.0255 ～0.1700μg 范围内，峰面积值与进样量呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验：取内蒙古赛罕乌拉自然保护区样品，精密称定，按供试品溶液制备方法制成精密度试验溶液，精密吸取溶液10μL，在上述色谱条件下重复进样5 次，测得RSD 为1.14%。表明该系统精密度良好。

2.6 重现性试验：取内蒙古赛罕乌拉自然保护区样品5份，每份约2.0g，精密称定，按供试品溶液制备方法制成重现性试验溶液，精密吸取溶液10μl，注入液相色谱仪，结果RSD 为1.68%。实验结果表明，该方法重现性良好。

2.7 稳定性试验：精密称内蒙古赛罕乌拉自然保护区样品，按供试品溶液制备方法制成稳定性试验溶液，分别在0、1、2、3、8h 时，精密吸取10μL，注入液相色谱仪，测得槲皮素峰面积的RSD 为1.185%。试验结果表明，供试品溶液在8h 内稳定性良好。

2.8 加样回收率试验：称取已知含量的样品(重复性试验中的样品)六份，每份约1.0g，精密称定，加入适量的槲皮素对照品，按供试品溶液制备方法制成加样回收试验溶液。分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，测定平均回收率为96.72%，RSD 为2.169。加样回收率良好，见表1。

2.9 样品含量测定：取本药材粉末1.0g，分别精密称定，按供试品溶液制备方法进行制备，各精密吸取10μL，注入液相色谱仪，测定，见表2。

序号 取样量(g) 样品中对照品的量(mg) 加入对照品的量(mg) 测得总量(mg) 加样回收率(%)平均值(%) RSD(%)1 0.9854 1.1194 0.3024 1.4077 95.34 2 0.9910 1.1257 0.3024 1.4154 95.80 3 1.0020 1.1383 0.9072 2.0410 99.50 4 1.0050 1.1417 0.9072 2.0410 99.13 5 0.9905 1.1252 0.6048 1.6961 94.39 6 0.9920 1.1269 0.6048 1.7086 96.18 96.72 2.169

药材来源 取样量(g) 峰面积1 峰面积2(mg/g) 含量1(mg/g) 含量2(mg/g) 平均含量(mg/g).1126拉自然保护区 1.0380 158979.797 156206.594 1.0988 1.0978 1.0983内蒙古大青山 1.0010 189671.703 200268.297 1.3500 1.4255 1.3878劈柴沟 1.0021 202424.234 203613.906 1.4189 1.4337 1.4263内蒙古蛮罕山 1.0012 116295.500 116407.203 0.8386 0.8394 0.8390 1.0003 115419.797 120510.555 0.8331 0.8698 0.8514国家蒙药制剂中心 1.0011 237091.797 237753.797 1.6989 1.7036 1.7013 1.0007 235552.000 235117.813 1.6885 1.6854 1.6870内蒙古赛罕乌 1.0530 163458.297 163159.594 1.1136 1.1116 1

3 讨论

3.1 本试验所用样品均经过了原植物鉴定，并在试验前进行了性状比较与鉴定，确保了试验结果的一致性。

3.2 本试验建立了蒙药银露梅含量测定方法，定量精密度高，稳定性好，可作为蒙药银露梅的质量控制重要项目。

［1］那生桑.蒙药质量标准化研究［M］.呼和浩特：内蒙古人民出版社，2007：632 -633.

［2］孙文基，谢世昌，天然药物成分定量分析［M］.北京：中国医药科技出版社，2003：400 - 403.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典附录［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：47 - 53.

［4］吴宁远，郭晓宇，陈建平，等.枝叶中鞣质的提取和含量测定［J］.内蒙古医科大学学报，2014;36(1)：35 -43.