刘鸿飞，王明富，梁立春，张 涛

(佳木斯大学基础医学院，黑龙江 佳木斯 154007)

山茱萸纳米制剂对衰老小鼠脑组织akt基因mRNA表达的影响①

刘鸿飞，王明富，梁立春，张 涛

(佳木斯大学基础医学院，黑龙江 佳木斯 154007)

目的：探讨山茱萸纳米制剂对自然衰老小鼠脑组织akt基因mRNA表达的影响。方法：以衰老小鼠(11～12月龄)、青年小鼠(2～3月龄)为研究对象，灌服山茱萸纳米制剂，采用 RT-PCR方法检测 akt基因mRNA的表达。结果：衰老小鼠脑组织akt基因mRNA表达量较青年小鼠低，山茱萸纳米制剂可以不同程度的提高衰老小鼠脑组织akt基因mRNA的表达。结论：山茱萸纳米制剂显著提高衰老小鼠脑组织akt基因mRNA的表达，使衰老小鼠脑组织akt基因 mRNA表达趋于年轻化。

山茱萸；衰老小鼠；akt基因

山茱萸具有补益肝肾、收敛固涩之功效，还具有抗菌、调节免疫、降血糖、降血脂、抗氧化、抗癌、抗衰老等功效[1～3]。akt基因表达为分子量60kDa丝/苏氨酸蛋白激酶，后者具有多种生物学功能。前期我们实验探讨了山茱萸对衰老小鼠脑组织的p66shc表达及p-FoxO1蛋白表达的影响[6]，初步发现山茱萸抗脑衰老方面的作用及其机制。本实验观察山茱萸纳米制剂对akt基因mRNA表达的影响，探讨延缓脑衰老中akt基因的作用。

1 材料与方法

1.1 药品和制剂

山茱萸购于佳木斯大学医学院药店，经鉴定符合药典标准。

1.2 实验动物

1.2.1 人工饲养自然衰老小鼠(11～12月龄)90只，体重41～52g，随机分成9组，每组10只，青年小鼠(2～3月龄)10只，体重20～25g，分1组，总计10组动物。同室分笼饲养，自由进食(基础饲料)和水，室温(24±2)℃饲养，相对湿度50%～60%。

1.2.2 自然衰老小鼠基础饲养5d后再次称重给药，1)青年对照组、衰老对照组自由进食(基础饲料)和水；2)给药组：纳米水提大剂量组、纳米水提小剂量组、纳米醇提大剂量组、纳米醇提小剂量组、常药水提大剂量组、常药水提小剂量组、常药醇提大剂量组、常药醇提小剂量组 山茱萸大剂量组、小剂量组分别按照1.5g/kg·d、0.75g/kg·d体重剂量连续灌服30d。

1.3 实验方法和指标测定

各组小鼠于实验结束时断头处死，4℃条件下立即取出全脑，DEPC配置的盐水冲洗去除杂质，锡纸包裹后置于液氮备用。RT-PCR试剂盒测定脑组织akt基因mRNA转录活性，操作步骤按照试剂盒说明进行。

1.4 统计学方法

2 结果

山茱萸及其纳米制剂对小鼠脑组织akt基因mRNA表达的影响见图1，见表1。

图1 山茱萸对小鼠脑组织akt基因mRNA和β-actin表达的影响

注：与CONTROL比*P<0.05，**P<0.01；与YOUNG比

△P<0.05，△△P<0.01；与NMWL相比▲▲P<0.01，与NMWS比◇P<0.05，◇◇P<0.01；与CWL比☆P<0.05，☆☆P<0.01；与CWS相比★P<0.05，★★P<0.01。

图2 寿命相关信号转导的干路与支路

3 讨论

本实验小鼠脑组织akt基因mRNA表达因衰老而显著降低，山茱萸可以提高akt基因mRNA转录活性。实验研究显示：衰老小鼠脑组织akt-mRNA表达较青年组表达明显降低，其中纳米水提液大剂量组、纳米水提液小剂量组脑组织Akt-mRNA表达有明显升高。结果提示山茱萸除对衰老小鼠脑组织的p66shc-p-FoxO1蛋白途径影响达到延缓小鼠脑衰老外[4～7]，还有可能通过PI3K-AKT途径发挥延缓脑衰老作用(见图2)。我们还将探讨山茱萸对PI3-K表达的影响，进一步阐明山茱萸延缓脑衰老的作用机制。

[1]周京华．李春生．山茱萸有效化学成分的研究进展[J].中国新药杂志，2001，10(11)：808-812

[2]励建军．山茱萸有效成分和药理作用的研究进展及其在食品工业中的应用[J].食品科学，2003，24(3)：161-163

[3]欧芹，王雅丽．山茱萸多糖对HDF细胞β-半乳糖苷酶及p16表达的影响[J].中国老年学杂志，2007，27(4):325-327

[4]王晶，刘少君，王子仁．p66ShcA蛋白与机体衰老关系[J]．医学分子生物学杂志,2007，4(1)：50-53

[5]Pandolfi S， BonafèM， Di Tella L， et al． P66shc is highly expressed in fibroblasts from center narians[J]． Mech Ageing Dev，2005,126：839-844

[6]王明富，欧芹，朱贵明，等. 山茱萸纳米水提液对衰老小鼠脑组织p66shc表达的影响[J]. 中国老年学杂志，2010，9(30)： 1249-1250

[7]丁乙夫，江旭东，李晶，等. 山茱萸多糖对衰老小鼠肝组织中SIRT1基因表达的影响[J].黑龙江医药科学，2014,37(6)：6-8

The effects of Cornus nano preparation on the expression of mRNA of akt gene in brian tissue of aging mouse

LIUHong-fei，WANGMing-fu，LIANGLi-chun，ZHANGTao

(The Basic Medical College of Jiamusi University,Jiamusi 154007，China)

Objective: To investigate the effects of Cornus nano preparation on the expression of mRNA of akt gene in brain tissue of aging mouse.Methods: Aging mice (11～12 months),young mice(2～3 months)was used as the research object, which were given Cornus nano preparation by gavage. Then the expression of mRNA of akt gene was examined by RT-PCR. Results: The expressions of mRNA of akt gene in brain tissue of aging mice were lower than those in young mice, but the expression of mRNA of akt gene was increased in various degrees in brian tissus of aging mice given Cornus nano preparation. Conclusion: Cornus nano preparation significantly increased the expression of mRNA of akt gene in brain tissue of aging mice, and it makes the expression level of mRNA of akt gene in brain tissue of aging mice close to that of the young mice.

Cornus; aging mouse; akt gene

佳木斯大学科研资助项目，编号：S2010-46。

刘鸿飞(1989～)男，河北邯郸人，在读硕士研究生。

张涛(1964～)女，黑龙江佳木斯人，博士，教授，硕士研究生导师。E-mail:jmstao@163.com。

R285.5

A

1008-0104(2015)01-0022-02

2014-09-13)