史雪灿，柴龙会，牛曙东，肖向红

（东北林业大学野生动物资源学院，黑龙江哈尔滨150040）

近年来，由于栖息环境的破坏、水源污染、微生物侵袭、疾病流行等因素，导致两栖动物的种群数量呈逐年下降趋势［1］。已有研究表明，嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila，Ah）作为一种普遍存在于两栖类中的条件性致病菌［2］，可引起蛙类出血性败血病（俗称“红腿病”），是影响其生存能力和种群数量下降的一个重要因素［3］。在微生物侵袭时，机体Toll样受体（toll－like receptors，TLRs）不仅可以识别病原相关分子模式（pathogen associated molecular pattern，PAMP）启动固有免疫应答，而且能激活信号通路调控适应性免疫应答。其信号通路中髓样分化因子（myeloid differentiation factor 88，MyD88）与肿瘤坏死因子受体相关因子6（TNF receptor associated factor 6，TRAF6）形成的复合物是多种信号向下游传递的共同途径，在启动多种TLR 和IL－1R信号转导途径、激活相关信号因子中起关键性作用［4］。东北林蛙（Rana dybowskii）作为我国重要经济动物，在药用、科研等方面具有重要价值。本试验以东北林蛙为试验对象，采用荧光定量PCR 技术检测东北林蛙被易感微生物嗜水气单胞菌注射后其皮肤MyD88和TRAF6mRNA 的差异表达，以期揭示东北林蛙在识别嗜水气单胞菌后，其机体TLR 信号通路中相关免疫分子的动态变化，探讨微生物侵袭时东北林蛙的TLR 信号调控机制，认识两栖类动物机体的免疫应答体系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用动物及菌株 东北林蛙，105只，雄性，2岁～3 岁，2013 年9 月 采 于 黑 龙 江 省 伊 春 地区。嗜水气单胞菌（1.1801）购自中国科学院微生物研究所，由东北林业大学动物生理实验室培养并冻存。

1.1.2 主 要 试 剂 TRIZOL○RReagent 为Life Technology公司产品；……