伪狂犬病病毒gB基因的原核表达及间接ELISA方法的建立

2015-06-18吉艺宽张宝石向柯宇琚春梅

动物医学进展 2015年6期

王雨，吉艺宽，程艺，张宝石，向柯宇，琚春梅

（华南农业大学兽医学院，广东广州 510642）

伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）引起的动物以发热、奇痒、脑脊髓炎为主要特征的传染病，猪为其储存宿主，并可引起猪的潜伏感染。本病在世界范围内广泛流行，给世界养猪业造成了巨大的经济损失［1-2］。我国从20世纪90年代开始在规模化猪场广泛使用PRV基因缺失疫苗，很好地控制了该病造成的危害，但自2011年以来，该病又有暴发流行趋势，因此加强该病的防控对我国养猪业的健康发展至关重要。

PRV基因组为线状双链DNA，大小约为180 kb，G＋C含量高达74%，可以编码70种蛋白，其中糖蛋白有gB、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gK、gL、gM、gN 11种［3］。gB作为病毒的一个重要囊膜组分和中和抗原，对于病毒的感染起到重要作用，并参与病毒特异性体液免疫和细胞免疫［4］。gB基因属于疱疹病毒中保守的糖蛋白基因，编码913个氨基酸，gB蛋白分别在59-126aa、214-289aa、507-734aa处存在优势抗原表位，其中59-126aa之间有3个连续的抗原表位，在214-279aa之间有一个连续的抗原表位，在540-734aa区间有8个潜在的非连续抗原表位［4］。根据gB基因的以上特点，本研究针对其中的优势抗原表位，应用PCR扩增gB基因的主要抗原表位区，构建原核表达质粒，并在大肠埃希菌中进行表达，利用表达蛋白作为抗原建立gB768-ELISA诊断方法，为伪狂犬病疫苗免疫效果的评估提供技术方法。