冶贵生，马玉花，张 爽，张晓芬，韩志辉，邹 勇，贾跃宁

（1.青海大学农牧学院，青海西宁810016；2.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌712100）

产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）是一种革兰阳性芽胞杆菌，在污水、食物等中均有分布，是一种重要的人畜共患传染病的病原［1］，也是一种引起食物中毒的重要病原菌［2］。随着四环素类抗生素的广泛使用，四环素耐药性细菌也日渐增多，大肠埃希菌［3］、沙门菌［4］、链球菌［5］等多种细菌均表现出对四环素类药物的耐药性。四环素类药物可与细菌核糖体30S亚基结合从而中断细菌蛋白质的生物合成，而细菌对四环素产生耐药性可通过表达核糖体保护蛋白、外排泵等方式进行［6］。

近年来产气荚膜梭菌的耐药性日趋严重，国外学者已经开展了产气荚膜梭菌四环素耐药性以及四环素耐药基因检测等方面的研究［7－10］。产气荚膜梭菌对四环素耐药相关的基因有tetA（P）、tetB（P）和tetM等［11］，其中tetA（P）基因编码产气荚膜梭菌外排泵蛋白，其在产气荚膜梭菌主动外排抗药性过程中起着重要作用，而目前国内关于产气荚膜梭菌四环素耐药基因的研究开展的相对较少。因此，本实验通过PCR技术扩增A 型产气荚膜梭菌青海分离株tetA（P）基因，软件分析tetA（P）基因序列，预测TetA（P）蛋白亲水性、二级结构、三级结构、功能位点及跨膜区，以期为进一步研究A 型产气荚膜梭菌TetA（P）蛋白主动外排抗药功能提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 A 型产气荚膜梭菌青海分离株由青藏高原动物疾病研究室保存。

1.2.1 主要试剂 FT 培养基为北京陆桥技术有限责任公司产品；……