孟慧芝，孙 涛，岳志芹，王文斌

（1.山东出入境检验检疫技术中心，山东青岛266000；2.山西农业大学，山西太谷030801）

猪流感（Swine influenza，SI）是由A 型流感病毒引起的一种急性、高度接触性的呼吸道传染病。根据表面糖蛋白血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的抗原性差异，A 型流感分为18个H 亚型和11个N亚型［1－2］。目前，在猪体内分离到的流感亚型众多，广泛流行于我国猪群中的有H1N1、H3N2［3］等不同血清亚型。刘丽萍等［4］曾在2012年－2013年以类禽型H1N1（EAH1N1）和2009甲型H1N1（pdm／09 H1N1）抗原对我国大多数省份猪群抗体做了调查，发现猪流感 H1N1 抗体阳性率为55.52%和13.92%。虽然猪流感病毒（Swine influenza virus，SIV）在猪与猪的传播中有限，但均能引起猪的较高发病率，而且已经证实1918年古典SIV 和2009年新型SIV 都能感染并致人死亡，甚至在人与人之间传播［5－6］，但在人类之间传播的分子机制目前未知，因此对猪流感的持续监测，不仅对畜牧业有重大的经济意义，其公共卫生意义更不容忽视。

本文拟利用自行设计的条形码引物，对2009年自山东猪场分离到的一株H1N1流感病毒进行全基因组快速扩增和测序，并与古典猪流感、禽源猪流感、人源猪流感比对，并对其遗传演化关系进行分析，从分子水平上探究该病毒来源，为进一步研究SIV 抗原变异和遗传演化关系积累数据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 毒株及载体 猪源分离株：A／swine／Shandong／01／2009（H1N1）由山东出入境检验检疫实验室保存；9日龄～11日龄SPF 鸡胚由山东农业科学院家禽研究所提供；大肠埃希菌DH5α感受态细胞及pMD－18T 克隆载体为宝生物工程（大连）有限公司产品。

1.1.2 试剂 Rneasy Mini Kit是QIAGen公司产品；cDNA 反转录试……