何燕斌，齐亚坤，黄霖霆，周蓉，邵蔚蓝



一种低温表达型T载体及其应用

何燕斌1，齐亚坤1，黄霖霆1，周蓉1，邵蔚蓝2

1 南京师范大学生命科学学院，江苏南京 210046 2 江苏大学环境与安全工程学院，江苏镇江 212000

何燕斌, 齐亚坤, 黄霖霆, 等. 一种低温表达型T载体及其应用. 生物工程学报, 2015, 31(12): 1773–1783.He YB, Qi YK, Huang LT, et al. An expression T-vector and its application at low temperatures. Chin J Biotech, 2015, 31(12): 1773–1783.

在现代生物学和生物技术研究中，通过基因重组表达获得目标蛋白已成为常规技术。因其培养简单、操作方便、遗传背景清楚、克隆表达技术成熟，大肠杆菌表达系统通常是人们表达重组蛋白的首选。但是在常规温度下进行基因的重组表达，动、植物和常温微生物的基因产物多数在数小时内变性沉淀；还有一些重组蛋白对宿主具有细胞毒性，难以得到重组表达。因此，我们构建了1种新型T载体——pEXC-T；它结合TA克隆技术和低温诱导表达功能，具有表达水平高、操作方便、目标蛋白得到分子伴侣保护和低温保存等特点。采用构建和优化的pEXC载体，P1抗原蛋白、溶血素PLO两种不稳定性蛋白在pEXC中都实现了高效的可溶性表达。低温表达系统pEXC的建立和发展为蛋白质的结构与功能的研究，以及抗原和药用蛋白的制备提供了便利的途径。

大肠杆菌，表达系统，低温诱导，可溶性蛋白

大肠杆菌表达系统由表达载体和相应的宿主细胞两部分构成，是发展最早、应用最广、最容易操作的基因高效表达系统。在大肠杆菌表达系统中，表达载体通常运用可调控型启动子控制外源基因的表达；这些启动子的类型对降低被表达的目标蛋白对细胞生长的抑制、减少细胞蛋白酶对目标蛋白的降解，以及目标蛋白的产量和可溶性等起着至关重要的作用。……