沈凤英，吴伟刚，张艳杰，寇宏达，冀红柳，李亚宁，刘大群



玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63A基因阻断突变株的构建

沈凤英1,2，吴伟刚2，张艳杰1，寇宏达3，冀红柳1，李亚宁1，刘大群1

1 国家北方山区农业工程技术研究中心河北省植物病虫害生物防治工程技术研究中心河北农业大学植物保护学院，河北保定 071001 2 河北北方学院，河北张家口 075000 3 河北农业大学国际合作处，河北保定 071001

沈凤英, 吴伟刚, 张艳杰, 等. 玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63 nsdAmgh基因阻断突变株的构建. 生物工程学报, 2015, 31(12): 1741–1752.Shen FY, Wu WG, Zhang YJ, et al. Construction of nsdAmgh gene disruption mutant in Strempomyces roseoflavus Men-myco-93-63. Chin J Biotech, 2015, 31(12): 1741–1752.

为研究从玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中克隆到的，与天蓝色链霉菌M 145中的一个重要负调控基因A基因同源的A基因的功能，本文构建了A基因破坏型重组质粒pSRNA2500 (pKC1139::1.5 kbA::1.0 kbKm)，转化ET12567 (pUZ8002) 获得接合转移供体菌ET12567 (pUZ8002，pSRNA2500)，通过接合转移将重组质粒导入玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中。在高温和抗生素双重筛选压力下，筛选得到表型为AmKm的A基因阻断突变株，通过PCR、Dot bloting和Southern blotting验证了突变株中的A基因已被正确阻断。与出发菌株相比，突变株在摇瓶水平上对棉花黄萎病菌的抑制能力提高了一倍。

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63，pKC1139，A基因，基因阻断，同源重组

A (Negative regulator ofdifferentiation) 是普遍存在于大多数链霉菌中的全局性负调控基因[1]，对链霉菌抗生素的合成和产孢形态分化具有负调控作用。该基因最先在天蓝色链霉菌中发现，A基因被阻断后，天蓝色链霉菌的放线紫红素 (Act) 等4种抗生素的产量明显提高，孢子产量也明显提高，突变株产孢量是天蓝色链霉菌M 145的20倍[2]。在变铅青链霉菌ZX64中，A基因的阻断可激活沉默的放线紫红素生物合成基因簇的表 达[3]。……