史传道，刘海英，张荣强，陈志辉，樊晓晨

1陕西中医学院，陕西 咸阳 712046；2第四军医大学；3西安红十字会医院

抗疏健骨颗粒的长期毒性实验研究*

史传道1，刘海英2，张荣强1，陈志辉1，樊晓晨3

1陕西中医学院，陕西 咸阳 712046；2第四军医大学；3西安红十字会医院

目的：观察抗疏健骨颗粒长期应用的安全性，为临床用药提供实验依据。方法：将SD大鼠160只随机分为高剂量组(40 g/kg)、中剂量组(20 g/kg)、低剂量组(10 g/kg)及空白对照组，连续灌胃给药6个月。分别于实验中期(给药3个月)、实验结束(给药6个月)及停药后4周恢复期测量大鼠体质量，计算脏器系数，测定血液学和血液生化学指标，作组织病理学检查。结果：抗疏健骨颗粒高、中、低剂量组大鼠的外观体征，行为活动，体质量，脏器系数，血液学和血液生化学指标与空白对照组比较，均无统计学差异(P＞0.05)；病理检查未见与药物毒性相关的明显病变，停药后也未见药物延迟性毒性反应。结论：抗疏健骨颗粒在规定剂量下口服是安全的，无明显毒性反应。

抗疏健骨颗粒；SD大鼠；长期毒性实验

抗疏健骨颗粒以“补肾、健脾、活血”立法，由淫羊藿、丹参、杜仲、怀牛膝、白术、骨碎补等中药组成，用于防治骨质疏松症。为确保临床用药的安全性，本研究对其进行了大鼠长期毒性试验。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂 抗疏健骨颗粒(1 g干浸膏粉相当于13.5 g生药)由陕西省中药基础与新药研究重点实验室提供，使用时加蒸馏水配制成不同药物浓度供实验应用；化学试剂均为市售分析纯；血液生化检测专用试剂及血液细胞学检测专用试剂均为专供产品。

1.2 实验动物 S D大鼠160只，体质量80～110g，雌雄各半，雌性大鼠无孕，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，动物合格证号：S C X K(陕) 2012-003。动物按性别分笼饲养于有空调的动物实验室内，室温(22±40)℃，相对湿度60%±80%。自由饮水，喂标准颗粒饲料。

1.3 实验仪器 全自动生化分析仪(O l y m pu s A U 600型，日本)；全自动血细胞分析仪(S ys m a x X T-1800，日本)；全自动血凝分析仪(A M A X-200型，德国)。

1.4 分组及给药 将6～8周龄S D大鼠160只随机分为抗疏健骨颗粒高剂量组(40 g/k g)、中剂量组(20 g/k g)、低剂量组(10 g/k g)及空白对照组(生理盐水)各40只，高、中、低3个剂量分别为人每天用量的80、40、20倍。给药体积为0.01m L/g (体质量)，空白对照组给予等体积生理盐水溶液，2次/d，每周6天，连续给药6个月。给药前及给药期间每周称体质量1次，并按体质量调整给药计量。全部实验过程分3个阶段，即试验中期(给药3个月)、试验结束(给药6个月)及4周的停药恢复期。实验期间每天观察大鼠一般状态、体征、摄食量、饮水及粪便状况。如有中毒反应的动物取出单笼饲养，重点观察。有死亡或濒死动物及时尸检［1］。

1.5 标本采集与处理 连续给药3个月，在末次给药24小时后，每组随机抓取10只大鼠(雌雄各半)，腹腔注射戊巴比妥钠(35m g/k g)麻醉，腹主动脉取血，用血细胞分析仪检测［2］采集血样的红细胞(R B C)、血红蛋白(H G B)、白细胞(W B C)、血小板(P L T)、淋巴细胞系(L Y M)及中性细胞系(M O N)等血液学指标。另外取血分离血清，用生化自动分析仪测定血清中的总胆红素(T B I l)、总蛋白(T P)、白蛋白(A L B)、谷丙转氨酶(A L T)、谷草转氨酶(A S T)、碱性磷酸酶(A L P)、尿素氮(B U N)、肌酐(C rea)、葡萄糖(GL U)等生化指标。并进行全面尸检，取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺等脏器称重，计算脏器系数。然后对上述主要脏器及胃、小肠、子宫、卵巢、睾丸、脑等脏器用10%甲醛固定，进行常规病理学检查［3］。其余动物连续给药6个月，在停药后24小时每组随机抓取20只动物(雌雄各半)，依次进行如上检测［4］。留作恢复期观察的动物于停药4周时依次进行如上检测。

1.6 统计学方法 数据采用S P SS 20.0软件进行统计处理，计量资料以(±s)表示，组间比较采用方差分析，采用L S D-t法进行两两比较；系统尸解及组织病理学采用定性指标描述，检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 对动物一般情况的影响 给药期间，抗疏健骨颗粒各剂量组及空白对照组大鼠外观体征、行为活动、进食量及粪便等状况正常，动物无一死亡；高剂量组个别时间点大鼠食量有所减少，但与空白对照组比较无明显差异；停药观察4周亦无明显变化，见表1。

2.2 对动物体质量的影响 给药期间抗疏健骨颗粒各剂量组及空白对照组大鼠体质量正常增长。与空白对照组比较，各剂量组体质量变化差异无统计学意义(P＞0.05)；停药观察4周后，亦无明显变化，见表2。

表1 对大鼠食量的影响 g/(kg·d)

表2 对大鼠体质量的影响 g/(kg·d)

2.3 对大鼠血液学指标的影响 抗疏健骨颗粒连续给药3个月后，与空白对照组比较，各项血液学指标差异无统计学意义；连续给药6个月后，高剂量组大鼠W B C、L Y M略有升高，但在正常范围内，与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；其他各剂量组的各项指标与空白对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；停药恢复1月后，中剂量组、低剂量组大鼠P T略有升高，与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；其他指标与空白对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，见表3。

表3 对大鼠血液学指标的影响

2.4 对大鼠血液生化指标的影响 抗疏健骨颗粒连续给药3个月后，中剂量组大鼠血清A S T值有所降低，与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；高剂量组血清C rea值有所升高，与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，其他各剂量组的各项指标与空白对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；连续给药6个月后，高剂量组大鼠血清C rea值升高，与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，其他各剂量组各项指标与空白对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；停药恢复1个月后，与空白对照组比较，各项指标差异无统计学意义(P＞0.05)，见表4。

表4 对大鼠血液生化指标的影响

2.5 对动物脏器系数的影响 给鼠连续用药3月、6月和停药4周后，抗疏健骨颗粒高、中、低剂量组和空白对照组大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺等主要脏器系数比较差异无统计学意义(P＞0.05)，表明长期灌服抗疏健骨颗粒对大鼠主要脏器无明显影响，见表5。

表5 对大鼠脏器系数的影响 mg/g

2.6 组织学检查 连续用药3月、6月和停药4周后，分别处死动物，剖取脏器。肉眼观察见脏器外形、体积、色泽正常，无充血、肿胀、坏死等异常现象。然后，用10%甲醛溶液固定脏器48小时，按常规方法做病理切片，在光学显微镜下观察。结果空白对照组有2例、高剂量组有1例标本存在肝细胞轻度脂肪变性，属动物常态分布；高剂量组有1例标本有部分睾丸组织萎缩，综合血液学和生化学指标分析，判定由睾丸发育不良所致，与药物毒性引起的病变无关。其他各剂量组脏器组织形态学正常，与空白对照组比较，未见明显由药物毒性引起的病理改变。表明大鼠长期灌胃抗疏健骨颗粒不会影响动物器官组织形态学改变。

3 结论

本研究表明抗疏健骨颗粒以40、20、10 g/k g (体质量)，相当于人每天用量的80、40、20倍，连续灌胃给药3个月、6个月及停药4周后，与空白对照组比较，动物的一般状况、体质量、主要脏器系数无明显差异；血液学指标、血液生化学指标各剂量组与空白对照组比较，虽有个别检测指标存在一定差异，但其测定值仍在正常值范围内或停药后恢复到正常值范围内，故无实际意义［5］。主要脏器的病理检查表明，组织形态学正常，未见与药物毒性相关的明显病变；停药4周后也未见药物延迟性毒性反应。表明抗疏健骨颗粒在规定剂量下口服是安全的，无明显毒性反应。

［1］ 中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学)［M］.北京：中华人民共和国卫生部药政管理局，1994：194-235.

［2］ 中华人民共和国食品药品监督管理局.中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则［M］.北京：中华人民共和国卫生部，2005：3-13.

［3］ 徐叔云.药理实验方法学［M］.3版.北京：人民卫生出版社，2003：231.

［4］ 黄芳华.中药新药申报资料中长期毒性试验的常见问题［J］.中国新药杂志，2004，13(7)：661-663.

［5］ 中华人民共和国卫生部药政管理局.新药(西药)临床前研究指导原则汇编［M］.北京：人民卫生出版社，1993：199-200.

The Long-term Toxicity Testof KangShu JianGu Granuleson SD Rats

SHIChuandao1,LIU Haiying2,ZHANG Rongqiang1,CHEN Zhihui1,FAN Xiaochen3
1 ShaanxiUniversity of Chinese Medicine,Xianyang 712046,China; 2 The Fourth Military Medical University;3 Xi′an Red Cross Hospital

Objective:To observe the long-term safety of KangShu JianGu granules(anti-osteoporosis and bone-strengthening granules)and provide the experimental basis for clinicalmedication.Methods:Totally 160 SD ratswere randomized into high dosegroup(40 g/kg),middle dosegroup(20 g/kg),low dose group(10 g/kg)and blank group,w ith intragastrically adm inistered for6months.The rats'constitution tested,organ coefficient counted, hematologic and biochem ical indexes determ ined aswell as histopathological examinationswere conducted in the m iddle period(administered for 3months),in the end period(administered for 6months)and after 4 weeks of stoppingmedicine respectively.Results:In the comparison of rats'outward appearance,behavior,constitution,organ coefficient as well as hematologic and biochem ical indexes between the high,m iddle and low dose groups and the blank group,therewas no significantdifference;by pathologicalexam ination,therewas no obvious illness relevant to medical toxicity and no indication of delayed toxicity reaction after stopping medicine.Conclusion:KangShu JianGu granulesof the specified dose taken orally are safew ithoutobvious toxic reaction.

KangShu JianGu granules;SD rat;long-term toxicity test

R285.15

A

1004-6852(2015)03-0014-06

2014-02-22

2012年陕西省科技统筹创新工程计划项目(编号2012KTCL03-22)；陕西省中管局中医药科研项目(编号13-LC069)；陕西省教育厅科研项目(编号11JK0674)。

史传道(1965—)，男，硕士研究生导师，教授。研究方向：退行性骨病的中西医结合诊治。