隆旭红，金文丽，刘光斌

1嘉峪关市食品药品检验所，甘肃 嘉峪关 735100；2酒泉医院

HPLC法测定香菊胶囊中总黄酮的含量

隆旭红1，金文丽1，刘光斌2△

1嘉峪关市食品药品检验所，甘肃 嘉峪关 735100；2酒泉医院

目的：建立HPLC测定香菊胶囊中总黄酮含量的方法。方法：采用Unimicro Technologies, Inc.4.6×250 Daiso SP-120-5-ODS-AP色谱柱，梯度洗脱，流动相A为甲醇，B为0.05mol/L磷酸溶液，流速为0.8mL/min,检测波长为257nm，室温下进样量20μL。结果：线性范围分别为10.34～165.36μg/mL(R2=0.9999),平均回收率为100.6%，RSD为0.56%(n=9)。结论：该方法简便、准确、灵敏、重现性好，可作为香菊胶囊中总黄酮含量的测定方法。

高效液相色谱法；香菊胶囊；总黄酮；含量测定

香菊胶囊是治疗急慢性鼻窦炎、鼻炎的特效中成药。化香树果序是该药治疗鼻窦炎以及伤风鼻塞、鼻窒(急慢性鼻炎)的主药，具有清热解毒、活血化瘀、消肿排脓、通窍止痛的功效，主要化学成分为黄酮类化合物，具有抗菌、消炎、抗突变、降压、镇静、利尿、抗氧化等功效［1］。现代研究表明鼻窦炎的病因是病菌感染，致病菌多为化脓性杆菌如肺炎双球菌、溶血性链球菌等，其次为杆菌，如流感杆菌、大肠埃希菌等，多数为混合感染，而黄酮类化合物具有较强的抗菌作用［2］。因此建立定量检测总黄酮含量的方法，用于香菊胶囊质量控制是非常必要的。

1 仪器与试药

L C-20A T高效液相色谱仪；U-3900H紫外-可见分光光度计；M E TT L ERE L204-I C、M E TT L ER M S205D U电子天平。甲醇为色谱纯；磷酸为分析纯；水为超纯水；芦丁对照品(100080-200707)购自中国食品药品检定所；样品香菊胶囊由山东步长制药股份有限公司生产(批号：130451)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性实验 色谱柱：U ni m i cro T ec h n o l o g i es，I n c.4.6×250 D a i so S P-120-5-O D S-A P；流动相：甲醇为流动相A，0.05m o l/L磷酸为流动相B；流速：0.8 m L/m in，检测波长：257 n m，进样体积：20μL，梯度洗脱；理论板数以芦丁峰计，应不低于3 000，见表1、图1。

表1 梯度洗脱程序

图1 色谱图

2.2 对照品溶液的制备 精密称取120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品25.84 m g，置25 m L量瓶中，加甲醇约20m L水浴微热使溶解，放冷，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。

2.3 对照品溶液的制备 精密量取对照品溶液2.0m L置50m L量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。

2.4 供试品溶液的制备 取供试品60粒的内容物，精密称定，混匀，取内容物约3 g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚120m L，加热回流2小时，放冷，弃去乙醚液。再加甲醇90m L，加热回流2小时，移至100m L量瓶中，用甲醇洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。

2.5 线性关系考察 取上述对照品溶液，分别进样5、10、20、40、60、80μL，记录色谱图，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为A=8.70×105C-4.07×105(r2=0.9999)，表明浓度与峰面积在10.34～165.36μg/m L范围内呈良好的线性关系。

2.6 检出限与定量限 精密量取对照品溶液，用甲醇逐级稀释后取20μL在“2.1”项色谱条件下测定，记录色谱图，并对色谱系统进行基线检测。分别以信噪比3∶1与10∶1考察检测限和定量限。检出限为0.02μg/g，定量限为0.06μg/g。

2.7 精密度实验 精密量取对照品溶液20μL，连续进样5次，记录色谱图，以峰面积计算，RS D为0.47%。结果表明仪器的精密度良好。

2.8 稳定性实验 取混合对照品溶液，按“2.1”项色谱条件，于0、2、4、8、12、24小时进样，记录色谱图，结果峰形无改变，峰面积的RS D为0.64%，表明对照品溶液在24小时内稳定。

2.9 加样回收率实验 取已测总黄酮含量的同一批号(130451)约3 g，共9份，3份为1组，分别精密加入对照品溶液3.2、4.0、4.8 m L，即按对照品溶液浓度的80%、100%、120%配制，置100m L量瓶中，按“2.4”项制备，在“2.1”项色谱条件下，按外标法以峰面积计算回收率，平均回收率为100.6%，RS D为0.56%(n=9)。结果表明本法有良好的回收率。

2.10 重复性实验 选取市售同一批号(130451)样品60粒的内容物，精密称定，混匀，精密称取约3 g共5份，按“2.4”项制备。分别精密量取混合对照品溶液和供试品溶液20μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算其含量，结果分别为：10.26、10.47、10.44、10.41、10.36m g/粒，RS D为0.79%。

2.11 耐用性实验 对照品溶液和供试品溶液于“2.1”项色谱条件下，分别用下列色谱柱测定：T h er m o O D S-2 H YP ERS I L 250mm×4.6mm，5μm色谱柱；I n erts i l O D S(250 mm×4.6 mm，5μm)色谱柱，结果表明含总黄酮分别为10.42 m g/粒，RS D=0.68%(n=5)；10.34m g/粒，RS D=0.82%(n=5)，且峰形良好，各性能参数均达实验要求，说明本法耐用性好。

3 讨论

3.1 波长的选择 通过紫外可见分光光度计在190～330 n m的波长范围内进行扫描，在257 n m波长处均有良好的吸收，故本研究选择在257 n m测定。

3.2 色谱条件的选择 先采用乙腈-水为流动相，不断改变比例，出峰时间太快且峰形不好，再选择甲醇-水为流动相，不断改变比例，峰面积不稳定，且峰形不好。故本研究选择甲醇-0.05 m o l/L磷酸溶液，进行梯度洗脱，能够保证各参数的要求，并能保证供试品中被检成分与相邻峰之间的分离度。

3.3 样品的预处理［3］先采用甲醇超声30分钟提取，过滤，测定，得到的总黄酮量少，提取不完全，且杂质较多，分离不好。本研究先用乙醚加热回流提取2小时，弃去乙醚液，再用甲醇加热提取2小时，使黄酮类化合物被提取到甲醇液中，保证了提取液成分的较单一性和提取的完全性，达到含量的准确性，且分离度符合要求。

［1］ 黄河胜，马传庚，陈志武.黄酮类化合物药理作用研究进展［J].中国中药杂志，2000，25(10)：589-592．

［2］ 高蓉，李稳宏，刘明霞，等.化香树果序中总黄酮不同提取方法对比研究［J].食品科学，2007，28(8)：230-232．

［3］ 李冬，李稳宏，廉媛媛，等.化香树果序总黄酮提取动力学研究［J].天然产物研究与开发，2011，23(4)：689-708.

The HPLC Determ ination of Total Flavonoids in XiangJu Capsules

LONG Xuhong1,JINWenli1,LIU Guangbin2△
1 Jia Yuguan Institute for Food and Drug Control,Jia Yuguan 735100,China;2 Jiugang Hospital

Objective:To establish a HPLCmethod for determ ination of total flavonoids in XiangJu capsules. Methods:The HPLC conditionswere follows:chromatographic column:unimicro technologies,Inc.4.6×250 Daiso SP-120-5-ODS-AP;gradient elution;mobile phase:A wasmethanol and B was 0.05 mol/L phosphoric acid;flow rate:0.8m L/m in;detection wavelength:257 nm;injection volume under room temperature:20μL.Results:The linear range of total flavonoidswas from 10.34 ug/m L to 165.36μg/m L(R2=0.999 9),the average recovery ratewas 100.6%and RSD was0.56%(n=9).Conclusion:Themethod iseasy,accurate and sensitivew ith good reproduction, therefore itcan beused to determ ine the contentsof total flavonoids in XiangJu capsules.

HPLC;XiangJu capsule;total flavonoids;contentdeterm ination

R284

A

1004-6852(2015)03-0032-03

2014-02-22

隆旭红(1968—)，男，副主任药师。研究方向：药物分析。

△通讯作者：刘光斌(1970—)，男，主任药师。研究方向：药物分析、医院制剂及临床药学。