张 丽，姜 华，郭 敏

1甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000；2甘肃省中医药研究院;3甘肃省中医院

中风颗粒处方药材的醇提工艺研究*

张 丽1，姜 华2△，郭 敏2,3

1甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000；2甘肃省中医药研究院;3甘肃省中医院

目的：优选出中风颗粒处方中药材的最佳醇提条件。方法：以乙醇用量、回流时间和乙醇浓度为实验因素，按正交实验设计进行实验，以得膏率和阿魏酸含量为指标。结果：最佳提取工艺为6倍量70%的乙醇回流1.5小时。结论：该工艺设计合理，稳定可行。

脑中风；乙醇；工艺研究

脑中风［1］是一组以脑部缺血及出血性损伤症状为主要临床表现的疾病，又称脑卒中或脑血管意外，主要分为出血性脑中风(脑出血或蛛网膜下腔出血)和缺血性脑中风(脑梗塞、脑血栓形成)两大类，以脑梗塞最为常见。脑中风是世界上最重要的致死性疾病之一，多发生于中老年人群，且病情缠绵，后遗症多。中风膏是在古方“佛手散”的基础上，按辨证论治的治疗原则，结合临床经验筛选参合而成，方中重用当归为君药，起养血、活血之作用，配川芎、羌活加强其祛风通络的作用；黄芪益气固表为臣药，辅水蛭增强其活血通络之力；甘草调和诸药，全方合用，共奏益气养血、添精补髓、化瘀通络之功效。但是患者在服用中风膏时发现，有服用剂量不准确，口感不适，服用、携带不便等问题，基于此本研究将中风膏开发为颗粒剂以克服以上缺点。本研究对方中的当归、川芎、丹参和羌活的提取方法及检测方法，通过查阅文献，采用乙醇为溶剂，以得膏率和阿魏酸含量为指标，按正交实验的方法优选出最佳提取方法。

1 材料与方法

1.1 仪器 高效液相色谱仪 (检测器：W aters 2487；进样器：W aters 1525)；O D S C18(Ag l i e n t，5μm，4.6mm×250mm)；旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂提供)；电子分析天平(上海天平仪器厂提供)；超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司提供)；电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂提供)。

1.2 药材及试剂 当归、川芎、丹参、羌活(甘肃省中医院中药房提供)；95%乙醇；甲醇(色谱纯)；磷酸；阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所提供)。

1.3 方法及结果

1.3.1 阿魏酸的含量测定

1.3.1.1 色谱条件 色谱柱：O D S C18(Ag l i e n t，5μm，4.6mm×250mm)；流动相：0.1%，磷酸水-甲醇(72∶28)；检测波长：320 n m；柱温：室温；进样量：10μL；流速:1.0m L/m in。

1.3.1.2 对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品20mg，用甲醇定容于10m L的容量瓶中，作为对照品溶液(2mg/m L)备用。

1.3.1.3 供试品溶液的制备 分别取提取的干膏2 g，加入适量甲醇，超声5分钟，过滤定容于10m L容量瓶中，备用。

1.3.1.4 标准曲线的制备 精密吸取阿魏酸对照品溶液 (2mg/m L)1.0、0.8、0.6、0.5、0.3m L分别定容于5m L容量瓶中，作为1、2、3、4、5号对照液，测其吸收度。以吸收度和对照品溶液浓度求得回归方程：Y=1.5993X+0.0666，r=0.9991。在0.12～0.4mg/m L有良好线性关系。

1.3.1.5 精密度实验 精密吸取4号对照品溶液10μL，重复进样6次，测得峰面积，其R S D=3.89%。表明仪器精密度良好。

1.3.1.6 重复性实验 精密吸取3号样品液10μL，每隔1小时进样1次，共进样6次，测得峰面积，其R S D=1.42%，表明样品在6小时之内稳定。

1.3.1.7 样品测定 将制备好的样品溶液在上述色谱条件下进样，代入标准曲线计算阿魏酸的含量。

1.3.1.8 加样回收率实验 精密称取已知阿魏酸含量的1号样品干膏约0.4g共9份，于5m L的容量瓶中，分别加入阿魏酸对照品。按“1.3.1.3”项操作，进样测其吸收度，并计算平均回收率为99.6%，R S D为3.47%(n=9)，见表1。

表1 加样回收率

1.3.2 正交实验设计

1.3.2.1 因素水平确定 采用正交实验法对提取工艺进行优选，根据文献报道［2-4］，本实验以乙醇用量(A)、回流时间(B)、乙醇浓度(C)为实验因素，每个因素设计3个水平，应用L9(34)正交表安排实验，见表2。

表2 提取溶剂及时间的因素水平

1.3.2.2 正交实验设计及结果 为综合考量提取工艺对2个指标的影响，本试验对测得的得膏率和阿魏酸含量2个指标用权重法进行评分，将2个指标中测得的最大值定为100分，其他数据与最大值的比值计算得分。将得膏率与阿魏酸含量的权重系数定为0.6和0.4，综合评分=得膏率×0.6/43.57+阿魏酸含量×0.4/0.76，见表3。

采用S P SS 16.0软件对数据进行处理，得到方差分析结果，见表4。

表3 提取溶剂及时间的正交实验

表4 提取溶剂及时间综合评分的方差分析

通过表3和4的综合分析，3个因素对本实验结果均没有显著性影响(P＞0.05)，三因素的影响大小为：A3＞A1＞A2，B2＞B1＞B3，C3＞C2＞C1。确定的最优组合为A3B2C3，即6倍量70%的乙醇回流1.5小时。

3 讨论

当归、川芎药典规定测定其中的阿魏酸，丹参药典中测的是丹参酮ⅡA，而且阿魏酸和丹参酮ⅡA是本组方的主要药效成分，研究以阿魏酸含量和得膏率为检测指标。当归、川芎中阿魏酸的提取，报道的有双提取、醇提及超临界流体萃取等［5-9］。但是，水回流提取时温度太高，阿魏酸不耐热，且水煎液中含糖量较醇提液中要高，不利于后续工序的处理，故本研究采用醇提工艺。

多指标的正交设计实验分析方法有综合平衡法和综合评分法。综合平衡法就是对测得的各个指标，先逐一分别按单指标计算分析，找出其因素水平的最优组合，再根据各项指标重要性及其各项指标中因素主次、水平优劣等进行综合平衡，最后确定整体最优组合。综合评分法是将每个实验所得各指标实测值转化成一个总评分，然后以此评分作为单指标来进行统计分析。本实验采用综合评分法优选出最佳组合。

由主观分析可知三因素对本实验的影响顺序为乙醇用量、回流时间和乙醇浓度，确定的最优组合为A3B2C3，即6倍量70%的乙醇回流1.5小时。

［1］ 徐伟峰，钱小刚.中药治疗脑中风的研究进展［J］.现代中西医结合杂志，2007，16(35)：5389-5391.

［2］ 张玲莉，彭燕，涂毅.正交试验法优选丹参的提取工艺［J］.中国医院药学杂志，2005，25(11)：1093-1094.

［3］ 倪力军，史晓浩，高秀蛟，等.提取时间、溶剂对丹参提取物质量的影响研究［J］.中成药，2003，25(10)：780-782.

［4］ 刘雪平.当归有效成分分离纯化工艺的研究进展［J］.内蒙古中医药，2011，30(13)：93-95.

［5］ 金城汝，李贵文，马素丽，等.当归中阿魏酸提取工艺的优化研究［J］.中成药，2008，30(4)：516-519.

［6］ 蔡翠芳，唐星，李积军.川芎中阿魏酸的提取纯化工艺［J］.沈阳药科大学学报，2008，25(1)：70-72.

［7］ 陈象青，刘圣，方焱，等.多指标正交试验优选当归提取工艺［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16(8)：25-28.

［8］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：2134-2135.

［9］ 赵飞，胡燕月，陈益萍，等.川芎中阿魏酸的提取分离［J］.中国医院药学杂志，2005，25(1)：8-10.

Study on A lcohol Extraction of the Herbs in ZhongFeng Granu les

ZHANG Li1,JIANG Hua2△,GUOMin2,3
1 Gansu University of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730000,China; 2 Gansu Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine; 3 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

Objective:To optimize the best conditions for alcohol extraction of the herbs in ZhongFeng granules.Methods:The experimentwas carried out as orthogonal test,the amount of alcohol,reflux time and the density of alcoholwere taken as experimental factors,and the resultsweremeasured by the indexes of yield and the contents of ferulic acid.Results:The optimal extraction technology is:six times of 70%alcohol refluxed for 1.5 hours.Conclusion:The technology isstableand feasiblew ith reasonabledesign.

stroke;alcohol;technology study

R282.4

A

1004-6852(2015)04-0036-03

2013-12-05

甘肃省中医药科学技术研究课题(编号GZK-2011-76)。

张丽(1988—)，女，在读硕士研究生。研究方向：中药制剂工艺研究。

△通讯作者：姜华(1959—)，女，博士学位，硕士研究生导师，主任药师，研究员。研究方向：中(藏)药有效成分筛选及质量分析。