贺宝莹，杨红梅，王聪颖，唐安玲，宋 英，朱 聪

1成都中医药大学，四川 成都 610075；2成都中医药大学附属医院

芪术鼻喷剂提取工艺研究

贺宝莹1，杨红梅1，王聪颖1，唐安玲1，宋 英2△，朱 聪2

1成都中医药大学，四川 成都 610075；2成都中医药大学附属医院

目的：研究芪术鼻喷雾剂的制备工艺。方法：采用薄层色谱鉴别的方法考察白术等芳香水的提取工艺，以毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量、总黄酮含量为评价指标，采用正交实验法对水提取工艺进行优选。结果：确定的白术等的芳香水提取工艺为：白术等加10倍水蒸馏提取5小时，收集1.4倍处方量的芳香水。优选的水提工艺为：白术等的药渣与其余药味饮片加14倍剂量水，提取3次，每次提取0.5小时。结论：该制剂的提取工艺稳定，可行，适用于工业大生产。

鼻喷剂；芳香水；毛蕊异黄酮葡萄糖苷；总黄酮；紫外分光光度法

近年来，鼻黏膜给药系统正日益受到人们的重视，被认为是一种药物能被快速高效吸收的给药方式。鼻黏膜下有丰富的血管和淋巴管，药物通过黏膜吸收后可直接进入体循环，药物中有效成分可免受胃肠道中酶的破坏以及肝脏的首过效应［1］。鼻喷剂的药液以雾状形式喷出，能在黏膜均匀分布，吸收快，可直达病所，且使用方便，操作简单。芪术鼻喷雾剂原处方为医院临床经验方，具有益气固表，通窍摄涕的功效，处方由黄芪、白术、防风、桂枝、鹅不食草等中药组成，用于过敏性鼻炎的治疗。为充分浸出处方中各药有效成分，获得稳定、可控的制剂，以更好地发挥该制剂的疗效，本课题对芪术鼻喷雾剂的提取工艺进行了研究。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 HP 1100高效液相色谱仪(DAD紫外检测器)(美国惠普公司提供)；Ag i l e n t C h em S tat i o n色谱工作站(美国安捷伦公司提供)，U V-210紫外分光光度仪(日本岛津公司提供)；J A2003上海电子天平(上海精科天平提供)； B P211D分析天平(十万分之一型，德国赛多利斯公司提供)。

1.2 试剂 毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品(批号：111920-201203，购于中国药品生物制品检定所，含量为97.3%)，芦丁对照品(批号：100080-200707，购于中国药品生物制品检定所，含量为92.5%)，色谱甲醇(美国天地公司提供)，水为重蒸馏水(实验室自制)，薄层层析硅胶G为化学纯(青岛海洋化工有限公司分厂提供)，其他试剂均为分析纯。药材均购自四川省新荷花中药饮片有限公司，经医院质检部鉴定符合2010版《中国药典》及四川省中药饮片炮制规范的要求。

2 方法与结果

2.1 芳香水提取工艺

2.1.1 芳香水的提取 按处方比例称取白术、防风、桂枝、鹅不食草共466 g，加入10倍量水，补加吸水量，浸泡3小时，水蒸气蒸馏提取11小时，在0.5小时收集1次芳香水，后每隔1小时收集芳香水约100m L。

2.1.2 薄层色谱鉴别 吸取上述各时间段芳香水0.5μL，3味药材混合挥发油0.3μL，分别点于同一硅胶G薄层板，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液，观察挥发油的提取程度。结果见表1、图1。

表1 芳香水收集量的考察

图1 白术、桂枝等芳香水薄层鉴别

由图可知，药材提取5小时后，色谱斑点不明显，芳香水提取量640m L，约为提取药材量1.4倍，制剂量的50%。

结合前期预试，考虑生产实际，确定芳香水的提取条件为：药材加水10倍量，蒸馏提取5小时，收集1.4倍药材量的芳香水。

2.1.3 芳香水提取工艺验证实验 按处方比例称取白术等4味饮片，共3份，分别加10倍量水且补足吸水率，浸泡3小时后，蒸馏提取5小时，分别于0.5、1、2、3、4、5小时各时段收集芳香水，并进行薄层鉴别。薄层结果均较明显。

2.2 黄芪等水提工艺考察

2.2.1 毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定［2］

2.2.1.1 色谱条件 B osto n p H L e x O D S(250mm× 4.6mm，5μm)色谱柱；按表2进行梯度洗脱，其中乙腈为流动相A，0.2%的甲酸溶液为流动相B；检测波长为260 n m；流速为1m L/m in；柱温为30℃。理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于3 000。

表2 梯度洗脱

2.2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品3.26mg，置50m L量瓶中，加甲醇，定容，摇匀，即得(0.063 44mg/m L)。

2.2.1.3 标准曲线的绘制 分别精密吸取对照品溶液(0.06344mg/m L)0.5、1、3、5、7μL注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标，得回归方程：

表明进样量在0.031 72～0.444 1mg/m L范围内线性关系良好。

2.2.1.4 供试品溶液制备 精密量取“2.2.3”项下样品溶液10m L，置25m L量瓶中，加甲醇，定容，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.1.5 缺黄芪阴性供试品溶液制备 按处方比例称取缺黄芪的其他饮片及提芳香水后药渣，加10倍水，煎煮3次，每次煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至450m L，作为缺黄芪阴性样品溶液。精密吸取缺黄芪阴性样品溶液10m L，余下制备缺黄芪阴性供试品溶液。

2.2.1.6 样品测定 取对照品溶液、供试品溶液、缺黄芪阴性供试品溶液，各精密吸取10μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量。色谱图见图2。

图2 毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定HPLC图谱

2.2.2 总黄酮的含量测定［3］

2.2.2.1 对照品溶液的配制 精密称取芦丁对照品4.01mg，置10m L量瓶中，加60%甲醇，定容，摇匀，即得(0.370 9mg/m L)。

2.2.2.2 标准曲线的绘制 取芦丁对照品溶液(0.3709mg/m L)，精密吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0m L，分别置10m L量瓶中，加60%甲醇，定容，摇匀。分别取上述溶液适量，置比色皿中，在265 n m波长处测定吸光度A。以吸光度A为纵坐标，总黄酮含量C为横坐标，得回归方程为：A=9.0860C+0.0632，r=0.998 8，表明0.007 418～0.037 09mg/m L的范围内线性关系良好。

2.2.2.3 供试品溶液的制备 取“2.2.3”项下样品溶液，过滤，精密量取续滤液5m L，加60%的甲醇定容至20m L，再精密量取5m L，置20m L量瓶中，加60%甲醇定容值刻度。

2.2.2.4 含量测定 取供试品适量，置比色皿中，在265 n m波长下，测定吸光值，代入回归方程，计算总黄酮含量。

2.2.3 正交实验设计 以毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量、总黄酮含量为正交实验考察指标。以影响水提主要因素加水量、提取时间、提取次数，选择3个因素的水平［4-5］，按L9(34)正交表进行正交试验，因素水平见表3。

表3 因素水平设计

2.2.3.1 实验方法 按处方比例称取黄芪、白术、防风、桂枝、鹅不食草，共9份，按L9(34)正交表安排实验(第一次加水时补加饮片吸水率)，加水煎煮，滤过，合并滤液，浓缩并定容至450m L，作为样品溶液。

2.2.3.2 实验结果 采用S P SS软件进行处理分析，实验结果见表4，方差分析见表5。

表4 正交实验结果

表5 方差分析

结果分析：由表直观分析可知，影响水提效果的各因素优先顺序为：C(提取次数)＞A(加水量)＞B(提取时间)。经方差分析，因素C(提取次数)对水提效果有显著性影响，因素A(加水量)、因素B(提取时间)无显著性影响，考虑节约成本，优选的水提工艺条件为：A3B1C3，即加14倍量水，煎煮3次，0.5 h/次。

2.2.4 验证实验 为了验证上述实验结果，以保证提取工艺的合理可靠，取10倍处方量的饮片，共3份，按上述确定的实验方法，进行验证实验。实验结果见表6。

表6 正交验证实验 mg/mL

验证实验结果表明：此工艺稳定、可行，故确定优选的工艺为A3B1C3。即加14倍量水，煎煮3次，0.5 h/次。

3 讨论

根据上述药材有效成分及该处方功能主治相关的活性成分的理化性质，确定制剂的提取方法为白术、防风、桂枝、鹅不食草提取芳香水，药渣与其他药味加水提取。考虑到白术、鹅不食草等饮片中的挥发油对过敏性鼻炎有明显的治疗作用［6-9］，且提取芳香水的饮片量占处方比重较大，故最终确定收集芳香水的量占制剂的50%。处方为玉屏风散加减方，具有补益脾肺之气，扶正气，固护卫表，通窍摄涕的功效；其中黄芪为方中君药，主要发挥益气固表之功效，处方中含黄酮的药味占60%，且药理研究表明，黄芪、鹅不食草等的黄酮类成分具有调节免疫力的作用［10-13］，故本研究采用君药黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量以及饮片中总黄酮的含量为指标来评价水提工艺。此工艺经过3次验证，证明其工艺合理，可行，且工艺简单，节约成本，适用于医院制剂的生产。

［1］ 冯胜，张毕奎.鼻黏膜给药剂型的研究进展［J］.中国药房杂志，2007，18(8)：625-627.

［2］ 李圆圆，宋英，方芳，等.HPLC测定益心通脉合剂中丹参素钠和毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量［J］.中国实验方剂学杂志，2013，19(22)：64-67.

［3］ 房树标，李艳彦，刘必旺，等.紫外分光光度法测定蒙古黄芪中总黄酮的含量［J］.中国药物与临床，2007，7(12)：899-901.

［4］ 刘晓昱，王佩，吴锡铭，等.正交设计法优选麦芪口服液提取工艺［J］.中华中医药学刊，2008，26(9)：2052-2054.

［5］ 孙学惠，胡北，马宏达，等.正交设计优选参芪养心滴丸的最佳水提工艺［J］.中国药师，2013，16(5)：700-702.

［6］ 杨娥，钟艳梅，冯毅凡，等.白术化学成分和药理作用的研究进展［J］.广东药学院学报，2012，28(2)：218-221.

［7］ 王林丽，宋志勇.防风的研究进展［J］.中国药业，2006，15(10)：63-64.

［8］ 刘志刚，余洪猛，文三立，等.鹅不食草挥发油治疗过敏性鼻炎作用机理的研究［J］.中国中药杂志，2005，30(4)：292-294.

［9］ 徐世军，沈映君，解宇环，等.桂枝挥发油的抗炎作用研究［J］.中药新药与临床药理，2007，18（3）：186-189.

［10］李庆.黄芪的药理药效研究进展［J］.医药产业资讯，2006，3(11)：128-129.

［11］沈自强.黄芪的现代药理研究进展［J］.内蒙古中医药，2011，30(19)：111-112.

［12］刘宇，杨艳芳，刘红兵，等.鹅不食草的化学成分及生物活性研究进展［J］.湖北中医杂志，2005，27(5)：52-53.

［13］林远灿，高明.鹅不食草的化学成分及药理研究进展［J］.浙江中医药大学学报，2011，35（2）：303-304.

Study on Extraction Technology of QiZhu Nasal Spray

HE Baoying1,YANG Hongmei1,WANG Congying1,TANG Anling1,SONG Ying2△，ZHU Cong2
1 Chengdu University of TCM,Chengdu 610075,China；2 Teaching Hospital of Chengdu University of TCM

Objective:To study the preparation technology of QiZhu nasal spray.Methods:Thin-layer chromatography(TLC)was adopted to investigate the extraction technology of aromatic water of BaiZhu(Rhizoma Atractylodis Macrocephalae).Taking calycosin-7-glucoside contentand total flavonoids contentas the evaluation index,theoptimization ofwaterextraction technology wascarried outby orthogonal test.Results:Extraction technology of aromatic water of BaiZhu was determ ined as follows:distillation of BaiZhu w ith 10-fold volume of water for fivehours;aromaticwaterwhichwasasmuch as1.4 timesof prescription volume.The optim ization ofwaterextraction technology wasextracting residuesof BaiZhu and the restof decoction piecesw ith 14-fold volume ofwater for three timesw ith 0.5 hour once.Conclusion:This extraction technology which is stable and feasible can be used in industrialproductionw idely.

nasalspray;aromaticwater;calycosin-7-glucoside;total flavonoids;ultravioletspecterphotometry

R282.4

A

1004-6852(2015)04-0039-04

2014-08-24

贺宝莹(1989—)，女，在读硕士研究生。研究方向：中药制剂的研发。