张 丽 陈婷婷 刘永林 周郁鸿 李晓芳 陈益民

再生障碍性贫血患者外周血CD55、CD59表达分析

张 丽 陈婷婷 刘永林 周郁鸿 李晓芳 陈益民

再生障碍性贫血；CD55；CD59；C3；C4；免疫球蛋白再生障碍性贫血（aplastic anemia，AA）是一种多原因引起的血液疾病，近年来T细胞免疫诱导的重要性在再障发病机制中逐渐被揭示[1-2]，本课题前期亦证实AA患者外周血存在T细胞的异常活化[3-4]和调节性T细胞的异常[5]，但体液免疫在AA发病机制的作用仍然存在争论，因此我们通过检测AA患者外周血粒、红细胞表面CD55和CD59的表达和补体的变化，探讨补体系统在AA发生过程中的作用。

1 对象与方法

1.1 研究对象 2010年7月—2012年9月在浙江省中医院门诊或住院就诊AA患者81例，其中男40例，女41例，年龄5~77岁，中位年龄31岁，平均（33.7±20.6）岁；所有病例均为初次就诊，诊断均参照文献[6]。非AA组为浙江省中医院体检人群，共31名，其中男17名，女14名，年龄13~64岁，中位年龄33岁，平均（31.2±15.4）岁，外周血细胞计数排除AA和明显感染。

1.2 仪器与试剂 美国BD公司PE-anti-CD55鼠抗人单克隆抗体,PE-anti-CD59鼠抗人单克隆抗体单抗体、PC5-anti-CD19鼠抗人单克隆抗体、鼠抗人PE-anti-IgG1同型对照、鼠抗人PC5-anti-IgG1同型对照。美国Beckman公司IgG、IgA、IgM、C3、C4试剂。美国Beckman公司EPICS-XL流式细胞仪、Immage全自动特定蛋白仪。

表1 两组CD55、CD59表达与血清补体比较（±s）

表1 两组CD55、CD59表达与血清补体比较（±s）

注：与非AA组比较，t=3.715、2.777、3.732、3.711、4.935、6.809，△P<0.05；AA：再生障碍性贫血

组别非AA组AA组例数31 81红细胞（%） 粒细胞（%）CD55 97.92±1.40 94.54±7.88△CD59 97.85±1.67 93.06±15.28△CD55 99.28±0.69 91.92±17.72△CD59 97.88±2.20 93.83±9.17△C3（g/L）1.03±0.26 0.86±0.11△C4（g/L）0.30±0.10 0.20±0.05△

1.3 指标检测 两组均取外周血5mL，其中2mLEDTA-K2抗凝备用，3mL全血静置15min后，2000rpm离心5min，取血清，全自动特定蛋白仪检测IgG、IgA、IgM、C3、C4含量。取抗凝的外周血1μL，加入PBS缓冲液200μL稀释，然后取3根试管，分别加入稀释后红细胞20μL和PE-anti-CD55抗体20μL、稀释后红细胞20μL和PE-anti-CD59抗体20μL、稀释后红细胞20μL和PE-anti-IgG1抗体，室温孵育30min，加入PBS绶冲液1mL，上流式细胞仪分析。……