苏建友 ，孙宝兰 ，沈荣春 ，宋红花 ，倪红兵 ，杨春兰

（南通大学附属医院1医学检验中心；2儿科实验室，江苏226001）

急性下呼吸道感染（ALRI）是婴幼儿时期的常见病、多发病，严重威胁婴幼儿的健康。据报道，ALRI是5岁以下儿童住院与门诊就医的主要原因，给家庭和社会带来了严重负担[1]。据世界卫生组织（WHO）统计，全世界每年约有200万5岁以下儿童死于肺炎，占该人群总死亡率的19%[2]。在我国，急性呼吸道感染占儿科门诊的39.0%～65.5%，占儿科住院患儿的24.5%～65.2%[3]。自上世纪70年代以来，肺炎一直是我国5岁以下儿童的首位死因，我国每年5岁以下儿童因肺炎死亡者约35万人，占全世界儿童肺炎死亡的10%[4]。因此，明确引起儿童呼吸道感染的病原，有效控制儿童呼吸道感染，对降低婴幼儿死亡率、提升保护婴幼儿健康具有重要意义。

本研究回顾性分析我院儿科2014年1月—12月收治的ALRI住院患儿752例常见呼吸道病毒检测结果，以了解南通地区ALRI住院患儿呼吸道病毒感染状况，为本地区儿童ALRI的防治提供有效依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 根据第7版诸福棠《实用儿科学》儿童ALRI诊断标准[5]，选取确诊为ALRI的儿童752例为研究对象，其中男464例，女288例，年龄12天～12岁。临床诊断：肺炎335例，毛细支气管炎128例，支气管炎伴喘息111例，支气管炎无喘息141例，支气管哮喘合并感染37例。

图1 直接免疫荧光法7种呼吸道病毒镜检阳性结果（200×）

1.2 方法 采用直接免疫荧光法用D3 Ultra DFA Respiratory Virus Screening ID Kit（D3试剂，美国HYBRID公司）测定。入选患儿均在诊断3日内留取标本，采用植绒拭子经鼻孔插入鼻腔到达鼻咽部采集鼻咽拭子标本，立即放入3mL 0.9%无菌氯化钠注射液中送检。操作步骤：将植绒拭子样本在漩涡混匀器上混匀见浑浊后去掉植绒拭子。于离心管中2 000 r/min，离心 10min，弃上清液（留约 100～150 μL），吸管吹打混匀，制成混浊细胞悬液。取约20μL/孔将样本分别点样在专用载玻片上，干燥后冷丙酮中固定10min，取出晾干后于每个样本中分别加D3试剂盒中7种单独包装的荧光标记单克隆抗体：流感病毒A 型、B 型（IVA、IVB）、副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型（PIVⅠ、Ⅱ、Ⅲ）、呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）1滴（25μL），37℃孵育 30min，PBS洗片 3次，风干后封片镜检。结果判断：荧光显微镜（OLYMUS I×71）放大200倍读片，1孔涂片细胞数大于100个认为此片有效，视野中找到≥2个完整细胞内有苹果绿色荧光判为阳性。

1.3 统计学处理 采用SPSS13.0统计软件进行数据处理，计数资料组间差异性比较采用χ2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 各病毒检出率及阳性分布 荧光显微镜下阳性细胞显示明亮苹果绿荧光，不同种类病毒感染的细胞在染色上略有差异：流感病毒（A型、B型）和腺病毒为胞浆颗粒型、细胞核均质型（图1A，B，G）；副流感病毒（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型）为胞浆颗粒型（图 1C，D，E）；呼吸道合胞病毒为胞浆颗粒型，合胞体中亦可见小块包涵物染绿色荧光（图1F）。752例鼻咽分泌物标本中，7种呼吸道病毒抗原任一阳性的标本有317例，总检出为42.1%，7种呼吸道病毒的病毒检出率差异具有统计学意义（χ2=725.31，P=0.00），见表 1。

表1 ALRI住院患儿7种呼吸道病毒检出率及阳性分布构成比（%）

2.2 不同年龄呼吸道病毒检出率 在752份样本中，0～6月患儿中有136例检出病毒阳性，检出率53.33%；6月～1岁患儿中有70例检出病毒阳性，检出率51.09%；1～3岁患儿中有87例检出病毒阳性，检出率34.25%；3～5岁患儿中有20例检出病毒阳性，检出率27.03%；5岁以上患儿中有4例检出病毒阳性，检出率12.50%。各年龄组的病毒检出率差异具有统计学意义（χ2=72.34，P=0.00），以 0～6 月、6月～1岁儿童的病毒检出率最高。同时，随着年龄的增长，ALRI儿童常见呼吸道病毒检出率逐渐下降，见表2。

表2 不同年龄组病毒检出情况

2.3 不同月份呼吸道病毒检出率 南通地区全年均有常见呼吸道病毒感染，但有月份差异，常见呼吸道病毒感染高发于2014年1月、3月、12月份，检出率分别为53.63%、58.75%、53.53%；而2014年6月份病毒检出率最低为32.39%，其余月份病毒的检出率接近。各月份病毒检出率之间差异具有统计学意义（χ2=32.25，P=0.00），见表 3。

表3 2014年不同月份病毒检出情况

2.4 不同疾病呼吸道病毒检出率 毛细支气管炎病毒检出率最高62.50%，其次分别为喘息型支气管炎49.54%、支气管哮喘合并感染45.94%、肺炎36.12%，支气管炎无喘息的病毒检出率最低，为31.21%。各组疾病检出的最主要病毒均为RSV，但占比各有不同，毛细支气管炎为80.00%，支气管炎伴有喘息患儿RSV的感染率为50.00%，肺炎组检出的RSV 57.02%，支气管炎无喘息组RSV感染率47.72%，哮喘合并感染患儿检出RSV占35.29%，见表4。

3 讨 论

从传染病预防控制的角度，对病原学和流行病学的病因了解至关重要，儿童90%以上的呼吸道感染是由病毒引起。研究表明，呼吸道病毒中呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial virus，RSV），流感病毒（influenza viruses，IFA）、副流感病毒（parainfluenza viruses，PIV）、腺病毒（adenovirus，ADV）是儿童急性呼吸道感染的主要病原[6]。目前我国虽有多个地区已对当地常见呼吸道病毒感染进行了研究，但由于ARI的病原学受地理位置、季节、流行病学状况等多种因素影响，不同地区的病原学资料也不相同。我国许多地区仍长时间缺乏多种病原学的可靠检测资料，且各地区的流行病学又不尽一致。因此，尽快建立各地区系统的儿童呼吸道感染病原谱成为当务之急。

表4 不同下呼吸道感染疾病病毒检出情况 例

为了解南通地区儿童呼吸道感染常见病毒病原学特征，本研究对2014年在本院诊断为下呼吸道感染的患儿进行了常见7种呼吸道病毒检测，结果发现7种呼吸道病毒总检出率为42.1%，高于北京地区（36.1%）、上海地区（38.1%）、重庆地区（36.2%），略低于温州地区（43.3%）和山东地区（45.88%）[7]。这种差异的存在，提示呼吸道感染病毒病原体和地域有关，其次也与检测方法以及所测病毒种类有关。本研究发现RSV病毒检出阳性率最高，其次为PIVⅢ，而其余5种相对较少，表明RSV是南通地区2014年急性下呼吸道感染儿童最主要的病毒病原。在儿童急性下呼吸道感染的病原体检测中，国内外研究均发现RSV阳性检出率最高，其余病毒的检出率则与地域有关。提示在各个地区RSV是儿童急性下呼吸道感染的重要病原。

以往报道表明冬、春季是病毒高发期，本研究也发现2014年1月、3月、12月是病毒感染的高峰期，说明儿童呼吸道病毒感染有一定的季节性，且以冬、春季为高发。本研究还发现不同年龄组患儿病毒的检出率不同，以0～6月、6月~1岁年龄段病毒检出率最高，并随着年龄增加，其病毒的检出率随着降低。婴儿病毒感染率高，与其机体免疫系统发育尚未完善，气道粘膜上皮细胞缺乏分泌性IgA的保护有关。RSV在5岁以下儿童ALRI中为检出率最高的病毒，且年龄越小检出率越高[8]。

本研究同时发现不同下呼吸道疾病中病毒的检出率存在差异，其中毛细支气管炎的病毒检出率最高，且下呼吸道感染伴有喘息的患儿中病毒检出率（49.54%）明显高于无喘息者（31.21%），提示病毒感染更容易导致喘息，增加喘息发作频率[9]。七种呼吸道病毒中RSV在喘息患儿中检出率最高，原因可能是RSV感染的患儿呼吸道常有上皮细胞和移行细胞浸润，且有纤维素、痰液混合和水肿，从而导致患儿呼吸道明显阻塞，引起喘息发作[10]。

综上所述，2014年南通地区儿童急性下呼吸道感染的主要病毒病原体为RSV，病毒感染多见于5岁以下儿童，并随着年龄增加而降低，于冬、春季好发，且不同下呼吸疾病病毒检出率不同。

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