徐 涛，罗婷婷，朱 珠，黄建梅

（中国人民解放军第82医院，江苏淮安223001）

宫颈癌是妇科比较常见的恶性肿瘤，占女性生殖系统恶性肿瘤首位。宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）是与子宫颈浸润癌密切相关的一组子宫颈病变，约60%CIN I可自然消退，20%CIN II会发展为CIN III，5%发展为浸润癌。CIN反映宫颈癌的发生发展过程中的连续过程，筛查发现CIN，并及时治疗高级别病变，是预防宫颈癌行之有效的措施[1]。近年来，国内外研究表明，CIN的发生、发展和预后与多种基因的变化密切相关[2]。P63参与肿瘤细胞的凋亡，共同参与CIN和癌变[3]。Ki67是细胞增生的相关蛋白，通常作为肿瘤细胞增殖的标志。本研究采用免疫组织化学方法，检查P63和Ki67在正常宫颈组织、CIN以及宫颈癌中的表达，旨在探讨二者表达变化与CIN分级和宫颈癌发生、发展的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集我院2013年1月—2015年6月因考虑宫颈疾病行石蜡包埋宫颈组织51例，其中CIN I 7例、CIN II 9例、CIN III 18例（其中宫颈原位癌8例），宫颈癌17例（其中镜下微小浸润癌5例），均经病理组织学确诊。患者年龄27～65岁，平均46岁，所有标本为宫颈活检或LEEP宫颈锥形切除标本或手术切除标本（其中正常宫颈组织为子宫良性病变行子宫切除术的宫颈组织），患者术前均未行化疗或放疗。取正常宫颈组织10例作为对照。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学方法：所有标本均采用5%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋切片。免疫组织化学采用PV-9000二步法，切片厚4μm，行微波处理，一抗4℃过夜，DAB显色，以PBS缓冲液代替第一抗体作阴性对照，已知的阳性组织作为阳性对照。试剂Ki67和P63（均北京中杉金桥生物技术有限公司）。

1.2.2 染色结果观察：Ki67阳性表达定位于上皮的基底层为阴性（-），超过基底层10%～25%为（+），26%～70%为（++），＞70%为（+++）。P63阳性表达局限于基底层和副基底层为阴性（-），超过副基底层10%～25%为（+），26%～70%为（++），＞70%为（+++）。蛋白表达程度：弱阳性为（+），中等强度为（++），强阳性为（+++）[4]。

1.3 统计学处理 采用SPSS17.0统计学软件进行分析和处理，计数资料组间差异性比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 P63、Ki67在CIN及宫颈浸润癌表达 P63在不同宫颈组织中的表达程度比较见表1，Ki67在不同宫颈组织中的表达程度比较见表2。P63和Ki67在正常宫颈组织中只有1例Ki67低表达（+），余均不表达。与正常宫颈组织比较，P63在CIN各组和宫颈癌组中阳性率逐渐升高，尤其是其表达强度，随着分级的增加，表达的程度呈上升趋势（P＜0.05）。与CIN II比较，在CIN III和宫颈浸润癌组织中，随着病情的进展，P63阳性率表达强度明显增强，P63在CIN II组+++阳性表达22.2%，而在宫颈浸润癌中阳性表达41.2%（P＜0.05）。与正常宫颈组织比较，Ki67在CIN各组和宫颈癌组中其表达的阳性率和表达程度随分级的上升而上升。Ki67在CIN II组+++阳性表达22.2%，而在宫颈浸润癌中阳性表达47.1%（P＜0.05）。本研究显示P63、Ki67在CIN、宫颈癌中均有表达，宫颈浸润癌中表达程度最强。

2.2 P63、Ki67在CIN及宫颈浸润癌表达的相关性分析 P63、Ki67在CIN I、II、III及宫颈浸润癌阳性表达率均呈逐渐增加趋势。P63在CIN I、II、III及宫颈浸润癌阳性表达率分别为42.9%、77.8%、94.4%、100.0%，Ki67的表达率分别为 57.1%、77.8%、100.0%、100.0%。而P63在CIN各级及宫颈浸润癌中表达++以上比例分别为14.3%、44.4%、61.1%、76.5%，Ki67分别为28.6%、33.3%、66.7%、88.2%。两者之间呈显著相关性，R接近于1，P＜0.001。

表1 P63在不同组织中的表达程度 例（%）

表2 Ki67在不同组织中的表达程度 例（%）

3 讨 论

3.1 P63与宫颈癌 P63是近年来发现的p53基因家族新成员，定位于染色体3q27-3q29，编码6种以上主要异构体，分别伴有转录激酶活性，死亡诱导活性（TAP63）和显色失活活性，参与肿瘤的发生、发展和细胞凋亡的过程。P63是一种核蛋白，具有调节皮肤、宫颈、乳腺及泌尿生殖道上皮细胞生长发育的功能[5]。本研究发现，P63在正常宫颈组织中阴性表达，在CIN及宫颈癌组织中阳性表达，在CIN中阳性表达程度随CIN病理分级的增高而增加，在宫颈癌组织中阳性表达最强，三者间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。提示P63在CIN和宫颈癌的发生、发展过程中起到了促进作用。

3.2 Ki67与宫颈癌 Ki67抗原是存在于增殖细胞核的标志蛋白，与细胞增殖密切相关，参与细胞周期的调控，被认为是较为理想的检测细胞增殖活性的抗体[6]。Ki67表达在多种肿瘤中均有明显改变，对恶性肿瘤诊断和预测肿瘤的预后具有重要意义。Ki67的高表达表示细胞增殖明显活跃，恶性程度高，预后差；反之预后佳。本研究结果发现，Ki67只在1例正常组织中低表达（+），余均不表达，而在宫颈CIN组织中，阳性表达率随CIN级别的升高而升高，在宫颈癌组织中阳性表达最强。提示宫颈上皮细胞癌变过程中细胞增殖活跃是一个逐渐增强的过程，反映CIN发展为宫颈癌是一个较为漫长的过程，即由CIN（I→II→III）→早期宫颈浸润癌的连续发展过程。

3.3 P63、Ki67表达的相关性 本研究显示，P63在CIN I、II、III及宫颈浸润癌阳性表达率分别为42.9%、77.8%、94.4%、100.0%，Ki67的表达率分别为57.1%、77.8%、100.0%、100.0%，说明随着病情的发展，阳性表达率均呈逐渐增加趋势。P63在CIN各级及宫颈浸润癌中表达“++”以上比例分别为14.3%、44.4%、61.1%、76.5%，Ki67为 28.6%、33.3%、66.7%、88.2%。两者之间呈显著相关性，r接近于1，P＜0.001。P63参与肿瘤细胞的凋亡，Ki67是细胞增生的相关蛋白，通常被作为肿瘤细胞增殖的标志。本研究提示P63、Ki67在抑制细胞凋亡的同时引起了细胞的增殖，从而通过双重作用来促进肿瘤的发展。

综上所述，P63、Ki67异常表达与CIN和宫颈癌显著相关，P63、Ki67联合检测可作为早期诊断宫颈癌前病变和宫颈癌的标志物。

[1]谢辛，苟文丽.妇产科学［M］.8版.北京：人民卫生出版社，2013：301-303.

[2]袁冬兰，钱华，宫颈疾病患者外周血CD4+CD25+CD127+/low Treg细胞的检测及临床意义［J］.海南医学，2012，23（4）：11-13.

[3]刘芬芳，左云海，龙浪，等.p63与p16在宫颈上皮内瘤变中的表达与意义［J］.海南医学，2013，24（14）：2042-2043.

[4]齐朝阳，陈艳，曾鸿，等.宫颈上皮内肿瘤 P16、P53、Ki67、P63的表达与HPV感染及其临床意义［J］.实用医学杂志，2011，27（20）：3638-3640.

[5]王会娟，刘欣，王丽.Survivin、Ki67和P63在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达及临床意义［J］.青岛医药卫生，2013，45（1）：11-14.

[6]文艳红，张永建，徐洪.消化道类癌43例Ki-67表达与肿瘤分期相关性研究［J］.交通医学，2013，27（2）：131-133.