兰炜明 ，谢峰 ，黎晓琴 ，姜唯声 ，谢曙英 ，葛军 ，曾小军

(1、江西省寄生虫病防治研究所，江西 南昌330046；2、进贤县血吸虫病防治站，江西 进贤331700)

间接血凝试验 (IHA，indirect hemagglutination assay)是血吸虫病查病的主要方法[1,2]，现场工作中采集的血清样本在处理过程中往往发生溶血，血吸虫病病人由于个体差异或合并有其他并发症，高胆红素和高血酯(TG)血清的出现较常见。家兔血吸虫病血清IHA试验中溶血、反复冻融、肝素抗凝等因素的影响已有报道[3]，也有报道显示在酶联免疫试验(ELISA)中，结合胆红素、溶血血红蛋白和乳糜在大于一定浓度下可能会影响ELISA结果，因此必须注意标本的前处理和标本的新鲜[4,5]。为了解人血清样本出现溶血、血脂、胆红素及抗凝剂是否对血吸虫病IHA结果产生影响，本文探讨这些物质在血吸虫IHA检测中的干扰作用，结果如下。

1 材料与方法

1.1 材料 血吸虫病人(粪检阳性人群)血清10份，正常人(来自非疫区，未接触疫水人群)血清10份，胆红素(分析纯，MW584.67上海迈坤化工有限公司批号：20130410)，脂肪乳注射液(30%脂肪乳注射液西安力邦制药有限公司 批号：1209044，甘油三酯的含量为28.55mmol/L)，IHA反应板(V型)，血吸虫抗体检测试剂盒 (IHA法)(江西环鄱科技发展有限公司 批号：20130509)，生理盐水，蒸馏水。

1.1.1 溶血样本制备 真空采血管采集8ml血吸虫病人血清10份，小心吸取血清后，将剩下的血清与红细胞置冰箱反复冻融2次，用希森美康XS-500i血细胞分析仪检测每份溶血样本血红蛋白含量。再用每位患者血清稀释溶血样本，使每份血清样本血红蛋白含量分别为 4g/L、8g/L、16g/L、32g/L。

1.1.2 血浆样本 对10名血吸虫病人分别以临床检验常规用柠檬酸钠抗凝管(含3.8%柠檬酸钠)、肝素钠抗凝管(含肝素钠45IU)和EDTA-K2抗凝管采集患者静脉血5ml后分离血浆备用。

1.1.3 胆红素血清样本制备 准确称取0.01g胆红素 (注意避光)，加入到10ml蒸馏水中，配制成1710μmol/L胆红素液。用蒸馏水稀释胆红素液配置浓度成1000μmol/L胆红素标准液[6]。将10份血吸虫病人及正常人血清分别混匀后加入适量胆红素标准液，使胆红素浓度为分别为10、50、100、150、200、250、300、350、400 和 450μmol/L， 在血吸虫病人和正常人血清中加入与胆红素标准液等量的生理盐水作为胆红素对照。

1.1.4 甘油三酯血清样本制备 用蒸馏水稀释医用脂肪乳成含甘油三酯为20和28 mmol/L的标准液，分别在10份正常人血清和血吸虫病人血清中加入适量甘油三酯标准液，使血清甘油三酯浓度分别为 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0、13.0、14.0、15.0 和 16.0mmol/L， 在血吸虫病人和正常人血清中加入与胆红素标准液等量的生理盐水作为甘油三酯对照。

1.2 方法 用血吸虫抗体检测试剂盒(IHA法)检测采集的血清和血浆，操作按说明书进行，每份样本测试终点滴度。

2 结果

2.1 溶血血清IHA结果 10份检测样本中，血红蛋白浓度为4g/L、8g/L时，检测结果不变。血红蛋白浓度为16g/L时，有3份样本抗体下降1个滴度，抗体几何平均滴度(GMT)为1：40；血红蛋白浓度为32g/L时，所有样品抗体滴度较对照血清均下降，抗体平均几何滴度为1：23。见表1。

2.2 含抗凝素血浆及对照血清的IHA结果 10份阳性血清和血浆进行IHA试验，1份以EDTA-K2和1份以肝素钠抗凝血浆抗体滴度与对照血清一致，其余血浆样本效价较对照血清均下降1个滴度，对照血清GMT为1:49，枸缘酸三钠、EDTA-K2、肝素钠血浆GMT分别为1:25、1:26、1:26。见表2。

表1 溶血血清及对照血清IHA结果

表2 血清与血浆样品IHA结果

2.3 含胆红素血清及对照血清IHA结果 配制的含胆红素阳性和阴性血清及对照血清进行IHA终点滴度试验，显示胆红素浓度的高低变化均不会引起阳性血清IHA滴度的改变，也不会引起阴性血清的误判。见表3。

表3 含高胆红素血清及对照血清IHA结果

2.4 含甘油三酯血清及对照血清的IHA结果 配制的含甘油三酯阳性和阴性血清及对照血清进行IHA终点滴度试验，显示甘油三酯浓度在2.0~5.0 mmol/L时不会引起结果的变化，在6.0~10.0 mmol/L间影响阴性血清结果的判读，在11.0 mmol/L以上阳性血清出现一个滴度的上升，同时影响阴性血清出现假阳性结果。见表4。

3 讨论

血吸虫病IHA试验由于敏感性高、特异性强、操作简便，是目前疫区现场用于血吸虫病筛查的主要手段[7,8]，对血吸虫病可疑病人采血进行IHA检测血吸虫抗体时，检测样本中常易出现如溶血、高胆红素和(或)高血脂及抗凝血浆等情况。在临床血吸虫病诊断中对溶血无严格划分标准[9,10]，而总胆红素 1.71～17.1μmol/L(0.1mg/dl～1.0mg/dl)为正常范围；血浆甘油三酯(TG)1.7～2.3mmol/L为临界[11]，为获得与临床收集样本基本相似的血清，本研究通过制备带有单一干扰物质获得模拟阳性和阴性血清进行IHA试验，来验证人工模拟状态下外源性干扰物质是否对IHA结果产生影响及影响的程度，临床血清样本中外源性干扰物质的实际影响情况尚需进一步探讨。

表4 含甘油三酯血清及对照血清的IHA结果

结果显示，当溶血血清样本血红蛋白＜16g/L时对IHA的检测无影响，血红蛋白≥16g/L时，抗体效价随血红蛋白浓度升高而下降，与兔血清溶血样本检测结果相符[3]。不同抗凝剂血浆样本中，除2份抗体效价不一致外，其他样本结果均相同，但血清与血浆样本IHA结果存在差异，阳性血浆样本进行IHA检测时，抗体虽均呈阳性，但相较于对照血清均下降1个滴度，且GMT较对照血清有所下降。结果表明对于血清抗体水平接近临界值的样本，以血浆为检测样本结果可能为假阴性，因此，在IHA检测中不宜以血浆为检测样本。

血清中胆红素的含量多少对IHA检测结果亦无影响。血清甘油三酯浓度在2.0~5.0 mmol/L时对试验亦无影响，但在6.0~10.0 mmol/L间影响阴性血清结果的判读，在11.0 mmol/L以上阳性血清出现一个滴度的上升，阴性血清则出现假阳性结果，这与ELISA检测结果报道相似[3]。血清甘油三酯浓度高于5.0 mmol/L时会影响IHA结果的准确性，在试验中出现高血脂血清进行IHA检测时，必要的预处理可能去除血脂对IHA结果的干扰[7]，或重新采血复查，以消除其对结果的影响。

综上上述，在IHA试验中,只有明确样品中干扰因素对检测结果的影响，排除影响因素，才能获得准确的检测结果。在本研究中模拟状态下，显示溶血、高血脂及抗凝样本对IHA检测结果均产生影响，血清胆红素小于450μmol/L时对IHA结果无影响，因此在现场及临床进行IHA检测时应避免使用溶血和有抗凝剂的标本，高血脂标本需要复查结果。

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