肖 婕，张万兴，王 欢，余艳婷，袁金兰

（吉安市妇幼保健院遗传室，江西吉安343000）

羊水细胞原代培养和传代培养方法比较

肖 婕，张万兴，王 欢，余艳婷，袁金兰

（吉安市妇幼保健院遗传室，江西吉安343000）

羊水细胞培养及染色体核型分析是产前确诊染色体疾病诊断的金标准，为妊娠中晚期胎儿临床诊断提供可靠的科学依据。羊膜腔穿刺是损伤性的取样技术，对孕妇和胎儿有造成损伤、感染、流产的潜在危险，流产发生率约0.5%［1］。羊水细胞培养因技术要求高、难度大、周期长、易污染、分裂相少，一旦培养失败，孕妇难接受第二次穿刺取样。因此，提高羊水细胞培养成功率是关键。本研究就羊水细胞的原代培养和传代培养两种方法比较。

1 材料与方法

1.1 标本来源 2013年7月－2014年7月我院产前诊断中心对因各种产前诊断指征就诊的169名孕妇，孕周16－26不等，行羊膜腔穿刺术取羊水做染色体检查。

1.2 培养试剂和器材 CO2培养箱，T型培养瓶（CORNING，型号430639），离心机，倒置显微镜，购自BioAMF羊水培养基，广州达晖公司提供40μg／ml的秋水仙碱。

1.3 方法

1.3.1 标本采集 在B超引导下，经腹穿刺抽取羊水30ml左右，分装入2支一次性无菌离心管中，尽快送达实验室接种。

1.3.2 接种 羊水以1 700r／min离心10分钟。在超净工作台内，弃去上清液，保留0.5ml沉淀，加入5ml羊水培养基吹打混匀。将混匀的两份羊水细胞分别移入两个T型培养瓶中，静置于CO2培养箱中，温度37℃，CO2浓度5%。

1.3.3 细胞原代和传代培养 细胞培养6－7天后观察细胞贴壁及生长情况，此时可见瓶底贴壁细胞已形成克隆。……