张利宣，曲 艺

（1.河北医科大学第三医院，河北 石家庄 050000； 2.河北省医学情报研究所，河北 石家庄 050000）

食管癌是较常见的恶性肿瘤［1］，旺盛的增殖能力及无控性生长是恶性肿瘤的共同特点，研究食管癌的发生机制对于食管癌早期诊断及治疗具有重大意义。笔者利用流式细胞术检测食管鳞癌细胞增殖及细胞分裂周期（cell division cycle，CDC）25A蛋白表达水平，探讨细胞增殖与食管癌发生及发展的关系，利用细胞试验研究表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate，EGCG）抑制食管癌细胞Ec9706增殖及调控CDC25A蛋白作用，以期为临床研究低毒、高效的抗食管癌药物提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

试剂与仪器、细胞株：EGCG（美国Sigma公司）；胎牛血清（杭州四季青公司）；碘化丙啶（美国Sigma公司）。鼠抗人CDC25A单克隆抗体（克隆系 DCS-120，美国 Santa Cruz公司）。Epics-XL型流式细胞仪（美国Beckman Coulter公司）。人食管癌Ec9706细胞株（由中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室惠赠，本实验室传代培养）。接种细胞于含10%胎牛血清的PRMI1640培养基中（补充青霉素、链霉素各100 U/L），培养器皿置37℃含5%CO2的细胞培养箱中。

临床标本：选取河北医科大学第四医院病理科2005年9月至2006年5月手术切除食管癌标本38例，患者术前均未经任何抗癌治疗，均有完整的病理资料。其中男22例，女16例；年龄40～76岁；经病理医师证实均为进展期食管鳞状细胞癌。另取20例切缘正常食管黏膜组织作为对照。标本用70%乙醇固定。

1.2 方法

单细胞悬液制备：将食管癌或正常组织利用网搓法制备单细胞悬液，显微镜下观察细胞形态，保证细胞完整细胞好，细胞碎片少，调整细胞悬液浓度为1×107/mL。……