王宇丹等

[摘要] 目的 探讨神经内分泌以及免疫学部分指标在EV71感染所致手足口病患儿病情评估中的价值。 方法 将我院收治的210例EV71感染所致小儿手足口病分为普通患儿112例（A组）、重症患儿57例（B组）和危重型患儿41例（C组）；另选择同期在我院检查的健康患儿80例作为对照组；分别检测各组患儿皮质醇（COR）、β-内啡肽（β-EP）、免疫球蛋白、淋巴细胞亚群、B淋巴细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）、白细胞介素-13（IL-13）、干扰素-γ（IFN-γ）水平。 结果 A、B、C三组COR、β-EP、IL-13、IFN-γ、NK细胞（CD19+）水平显著高于对照组（P<0.05）；B组、C组IgG、IgA、IgM水平显著高于对照组（P<0.05）；随着病情的加重，各指标水平逐渐升高。B组、C组CD3+、CD4+、CD8+等T细胞亚群及B淋巴细胞（CD16+ CD56+）水平显著低于对照组，随着疾病的加重，CD3+、CD4+、CD8+、CD16+ CD56+显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 EV71感染所致手足口病伴有细胞免疫、体液免疫等免疫功能紊乱，并与疾病进展密切相关；对患儿进行免疫指标和神经内分泌指标监测，有助于评估患儿的病情。

[关键词] 神经内分泌指标；免疫学指标；肠道病毒71型；手足口病

[中图分类号] R725.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2015）09-0016-03

Value of neuroendocrine indices in the diagnosis of hand-foot-mouth disease infected by EV71

WANG Yudan1 ZHAO Shiyong2 WU Ye1

1.Department of Pediatrics， Huzhou Central Hospital in Zhejiang Province， Huzhou 313000，China；2.Department of Pediatrics， the Sixth People's Hospital of Hangzhou City， Hangzhou 310023，China

[Abstract] Objective To explore the value of neuroendocrine indices and some immune indices in the assessment of conditions for children patients with hand-foot-mouth disease infected by EV71. Methods All 210 children patients with hand-food-mouth disease infected by EV71 who were admitted to our hospital were divided into three groups， 112 normal patients （group A）， 57 severe patients （group B） and 41 critical patients （group C）； 80 healthy children who received examination in our hospital during the same period of time were selected as control group； levels of COR， β-EP， immune globulin， lymphocyte subpopulation， B lymphocytes， natural killer cells （NK cells）， IL-13， and IFN-γ were tested in each group. Results Levels of COR， β-EP， IL-13， IFN-γ and NK cells（CD19+） in group A， B and C were significantly higher than those in control group（P<0.05）； levels of IgG， IgA and IgM in group B and C were significantly higher than those in control group（P<0.05）； With the conditions became severe， the level of each index gradually rose. Levels of subpopulation of T cells such as CD3+， CD4+， and CD8+ and B lymphocytes（CD16+ CD56+） in group B and C were significantly lower than those in control group， and those levels declined with the condition went severe. The differences between groups were statistically significant（P<0.05）. Conclusion Hand-foot-mouth disease infected by EV71 are complicated with immune dysfunction such as cell-mediated immunity and humoral immunity， which are closely related to disease progress. Therefore， the supervision on immune indices and neuroendocrine indices for children patients is helpful in assessing patients' conditions.

[Key words] Neuroendocrine indices； Immunological indices； Enterovirus 71； Hand-foot-mouth disease

由肠道病毒71型（EV71）感染所致小儿手足口病临床上较为常见，其临床表现也呈多样性[1]。研究显示[2]EV71病毒存在嗜神经性，因此部分患儿合并有神经系统损害症状；且患儿病情变化迅速，在短时间内会引起肺水肿，严重时甚至导致死亡。因此评估手足口病患儿的病情并采用积极的干预措施对提高患儿的预后有重要意义。田健美[3]研究证实，手足口病患儿发生病毒感染后会引起机体免疫系统和神经系统反应，因此我们推测神经内分泌指标和免疫学指标在患者的病情预测、评估中有重要作用。为证实上述猜想，本研究对手足口病患儿的各指标进行分析，以期探讨患儿病情和预后评价的可靠指标，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2012年7月～2013年7月在我院门诊及住院就诊210例手足口病患儿作为研究组，男113例，女97例；年龄5个月～7岁，平均（2.7±0.8）岁；所有患者均经核酸检测为EV71阳性。按照临床表现及病情发展，将210患儿分为普通患儿112例（A组）、重症患儿57例（B组）、危重型患儿41例（C组）。其中A组表现为手、口、足有皮疹出现，伴或不伴有发热症状。B组表现为患者伴有精神系统受累症，包括谵妄、惊厥、嗜睡、呕吐、共济失调、眼球震颤等；同时患儿出现脑膜刺激征，肌腱反射消失或明显减弱。C组表现为①循环功能不全者，如休克；②出现昏迷、抽搐、脑疝等；③呼吸困难、肺部啰音、紫绀等；当出现以上情形之一者则认为是危重型手足口病。另选择同期在我院检查的健康患儿80例作为对照组，男47例，女33例；年龄6个月～6岁，平均（2.5±0.7）岁。两组性别、年龄等一般资料差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 EV71 RNA检测 所有患儿在入院24 h进行EV71 RNA检测：取患儿外周血3 mL，采用逆转录酶-聚合酶链式反应检测，荧光定量PCR仪由Applied Biosystems公司提供，试剂盒由上海吉玛制药技术有限公司提供。

1.2.2 神经内分泌指标检测 神经内分泌指标包括皮质醇（COR）和β-内啡肽（β-EP），其中COR采用化学发光分析法进行检测，试剂盒购至上海研域生物科技有限公司；β-EP采用放射免疫吸附法检测，试剂盒购至上海信然生物科技有限公司；所有操作均参考试剂盒说明书。

1.2.3 免疫学指标检测 免疫学指标包括免疫球蛋白、淋巴细胞亚群、B淋巴细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）、白细胞介素-13（IL-13）、干扰素-γ（IFN-γ）；其中IL-13、IFN-γ采用化学发光分析法进行检测，试剂盒购至上海研域生物科技有限公司；免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）采用单向琼脂扩散试验检测，试剂盒由上海源叶生物科技有限公司提供；外周血T细胞亚群、B淋巴细胞、NK细胞用BD FACSAria II流式细胞仪（BD公司）进行检测。

1.3 统计学方法

采用SPSS19.0统计学软件，计量资料用（x±s）表示，若方差齐采用方差分析，方差不齐采用秩和检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组神经内分泌指标检测结果比较

A、B、C三组COR、β-EP水平显著高于对照组，随着病情的加重，COR、β-EP水平逐渐升高，组间相比差异具有统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 各组神经内分泌指标检测结果比较（x±s）

2.2 各组免疫球蛋白水平比较

B组、C组IgG、IgA、IgM水平显著高于对照组；而A组与对照组各免疫球蛋白水平相比差异无统计学意义（P>0.05）；随着病情的加重，IgG、IgA、IgM水平显著升高，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

表2 各组免疫球蛋白水平比较（x±s，g/L）

2.3 各组外周血T细胞亚群、B淋巴细胞、NK细胞水平比较

B组、C组CD3+、CD4+、CD8+等T细胞亚群及B淋巴细胞（CD16+ CD56+）水平显著低于对照组，而A组与对照组T细胞亚群水平相比差异无统计学意义（P>0.05）；随着疾病的加重，CD3+、CD4+、CD8+、CD16+ CD56+显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）；A组、B组、C组NK细胞（CD19+）水平均显著高于对照组，随着病情的加重，NK细胞水平显著升高，差异亦有统计学意义（P<0.05），见表3。

2.4 各组IL-13、IFN-γ免疫指标水平比较

A、B、C三组IL-13、IFN-γ水平显著高于对照组，随着病情的加重，IL-13、IFN-γ水平逐渐升高，差异有统计学意义（P<0.05），见表4。

3 讨论

手足口病是由肠道内病毒感染所导致的传染性疾病，好发于7岁以下的小儿；手足口病病原主要以柯萨奇病毒A和肠道病毒71型（EV71）为主[4]，其中EV71病毒存在嗜神经性，多数患儿合并有神经系统损害症状。患儿在早期主要表现为咽痛、高热、水疱等，均属于普通感染；少数患儿继发性出现意识障碍、昏迷、脑膜刺激征时则属于重症手足口病。由于重症手足口病的危害较大，因此及时评估患者的病情并采取积极的治疗措施对提高患儿的疗效、改善预后具有重要的意义。

大量研究显示[5，6]，感染EV71病毒所致手足口病会使患儿的应激反应增强，其中一个重要的表现是介导COR的分泌。本研究中随着病情的加重，COR水平逐渐升高，危重型患儿体内COR水平高出正常值的15倍。这是因为，COR能有效增强机体对外界刺激的防御作用，但是当病情没有得到有效控制，应激反应过度时会导致COR过度分泌，进而引起血糖升高、脑组织缺血、神经病变等[7]。由于EV71病毒具有一定的嗜神经性，因此患儿的神经系统会出现损害；当神经系统损害时会刺激脑垂体释放大量的β-EP[8]，部分β-EP会进入血液，病情越重血浆β-EP水平越高。本研究中危重患儿血浆β-EP水平最高，普通型最低，但均显著高于对照组。因此我们推测手足口病患者呼吸抑制、肺水肿等均是由β-EP升高所致，这也证实β-EP可以作为评价病情的指标之一。

许红梅[9]对EV71感染后患儿的免疫功能进行研究后发现，免疫性损伤是导致手足口病的主要原因之一。在感染初期，机体原有的免疫系统对EV71病毒起到抵抗作用；随着病情的加重，患儿T淋巴细胞、NK细胞、B淋巴细胞发生变化，导致机体内出现大量炎症因子和抗体。本研究中，B组、C组IgG、IgA、IgM水平显著高于对照组；而A组与对照组各免疫球蛋白水平相比差异无统计学意义；随着病情的加重，IgG、IgA、IgM水平显著升高，说明感染重症期患儿体内体液免疫功能亢进，产生大量免疫球蛋白保护机体；但是免疫亢进又会在一定程度上引起免疫损伤，致使患儿病情进一步转化为危重症。国外研究亦证实手足口病是一种自身免疫性疾病，本研究结果也证实此结论。这一结果也提示免疫球蛋白对重型和危重型手足口病患儿的检测价值更高。另外B组、C组T细胞亚群、B淋巴细胞水平显著低于对照组，A组与对照组无明显差异；A组、B组、C组NK细胞水平均显著低于对照组，随着病情的加重NK细胞水平显著升高。曾慧慧[10]报道称手足口病患儿在病毒感染下激活体液免疫和细胞免疫，其中体液免疫被过度激活，而细胞免疫则激活不足。这一结论被上述结果证实，提示手足口病患儿存在细胞免疫功能低下，可以将细胞免疫指标作为诊断病情的参考指标之一；其中B淋巴细胞、NK细胞可以作为手足口病的评价指标，而T细胞亚群对重症型患儿评价的价值更高；与刘亚敏[11]报道结论一致。

正常情况下，机体内多种细胞因子相互发生制约，共同维持机体免疫的平衡；当EV71病毒感染后，机体免疫功能被激活，从而释放大量细胞因子[12]。细胞因子主要体现在两个方面：免疫防护需要细胞因子参与，细胞因子也会刺激免疫损伤。IL-13主要由Th2细胞分泌，促进B细胞活化，介导体液免疫。IFN-γ由Th1细胞分泌，介导机体的细胞免疫反应。本研究A、B、C三组IL-13、IFN-γ水平显著高于对照组，随着病情的加重，IL-13、IFN-γ水平逐渐升高，这提示病情跟炎症反应密切相关，两种因子分别增高，体液免疫和细胞免疫相互拮抗，共同促进了疾病的进展。

综上所述，EV71感染所致手足口病伴有细胞免疫、体液免疫等免疫功能紊乱，并与疾病进展密切相关；对患儿进行免疫指标和神经内分泌指标监测，有助于评估患儿的病情。

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（收稿日期：2014-11-27）