肖海霞，托乎提·阿及德，石国庆，张莉，李海（1.石河子大学动物科技学院，新疆石河子83000；.新疆畜牧科学院畜牧研究所，新疆乌鲁木齐830000；3.新疆农垦科学院，新疆石河子83000；4.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193；.昭苏县畜牧兽医局，新疆昭苏83600）

断奶应激对母马血液生化和激素的影响

肖海霞1，2，托乎提·阿及德2，石国庆1，3*，张莉4*，李海5
（1.石河子大学动物科技学院，新疆石河子832000；2.新疆畜牧科学院畜牧研究所，新疆乌鲁木齐830000；3.新疆农垦科学院，新疆石河子832000；4.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193；5.昭苏县畜牧兽医局，新疆昭苏835600）

为研究断奶应激对母马血液生化和激素的影响，选择15匹断奶马驹的英纯血母马，测定母马断奶前、断奶当天和断奶后10个血液指标。根据断奶马驹月龄和母马年龄分别对母马测定指标进行R2.14.2语言分析。结果表明：断奶当天所有母马葡萄糖（GLU）含量都显著高于断奶前（P＜0.05）；断奶当天，7月龄和8月龄断奶马驹的母马游离脂肪酸（FFA）含量显著低于断奶前（P＜0.05），而6月龄断奶马驹的母马断奶前后差异不显著；6～9岁母马在断奶当天白蛋白（ALB）含量最高，游离脂肪酸（FFA）和皮质醇（COR）含量最低，其中游离脂肪酸（FFA）与断奶前差异显著，皮质醇（COR）和白蛋白（ALB）与断奶后差异显著（P＜0.05），而10～13岁母马的白蛋白（ALB）、游离脂肪酸（FFA）和皮质醇（COR）含量在断奶前后差异都不显著。由此可知在马驹断奶时应重点关注6月龄断奶马驹的母马和10～13岁母马。

血液生化指标；激素；断奶；母马

近年来动物福利问题日益成为人们关注的热点。一般认为在良好福利条件下，动物的生产表现较好，生理生化指标也比较正常。在生产实践中，马驹断奶会使母马产生应激，其生产性能、血液生理生化和行为指标都会产生波动，并对母马机体造成危害，降低母马的动物福利，经济效益受损。血液的生化和激素成分是家畜生命活动的物质基础，是机体生理功能和代谢过程的内在反映，也是评价动物健康状况和判断家畜应激程度的参考依据［1］。因此，了解家畜血液生化和激素指标对提高家畜生产性能和家畜的动物福利，减少应激对家畜的影响以及指导生产者对应激采取相应的措施具有重要的实际意义。用于评价家畜应激状态的血液指标通常有葡萄糖［2-3］、总蛋白和球蛋白［3-4］、β-羟丁酸［3］、尿素氮［5］、肌酸激酶［6］、游离脂肪酸［7-8］、皮质醇［2，9］和去氢表雄酮［10］等。目前，在仔猪、羔羊和犊牛上都已开展断奶应激的研究［1，4，6，11-13］，但关于母马断奶应激的研究鲜有报道。本试验采用突然断奶法将英纯血母马和马驹完全分离，根据断奶马驹月龄和母马年龄分别分析断奶前后测定的10个血液指标的变化，为实际生产中提高母马的健康福利、制定母马断奶应激监测技术和改进饲养管理技术措施等方面提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验时间和地点试验于2013年11月18日—12月10日在新疆伊犁哈萨克自治州昭苏县新疆伊犁马研究繁育中心进行。

1.2 试验动物和分组选择健康的15匹断奶马驹的英纯血母马进行试验，母马的年龄在6～13岁，均为经产胎次，其中2胎次8匹，6胎次7匹。根据马驹的断奶月龄将母马分成3组，第1组：6月龄断奶马驹的母马5匹；第2组：7月龄断奶马驹的母马5匹；第3组：8月龄断奶马驹的母马5匹。根据母马的年龄分成2组：A组为6～9岁母马7匹，B组为10～13岁母马8匹。

1.3 断奶方法及饲养管理

1.3.1 断奶方法断奶前母马与马驹一起单厩饲喂；采用突然断奶的方法，将母马和马驹先驱赶到对应马圈里，然后将马驹单独放置在马驹圈内，使母马和马驹完全隔离。

1.3.2 饲养管理断奶前母马和马驹单厩饲喂，断奶后母马单厩饲喂。母马断奶前后的饲喂方式相同：每匹母马每天饲喂2次混合饲料，每次1 kg；每天3次苜蓿，每次3 kg；每天2次干草，每次3 kg。使其充足饮水并自由采食定量分配的饲草。

1.4 样品采集与处理

1.4.1 采血时间母马血样分别于断奶前第10天（以下简称断奶前）、断奶当天和断奶后第12天（以下简称断奶后）晨饲2 h后采集。

1.4.2 采血和处理方法由颈静脉采血10 mL，倾斜放置4℃冰箱静置一夜析出血清后，以3 000 r/min离心20 min，收集血清于-20℃低温冰箱保存备用，取3～5 mL送北京华英生物技术研究所检测。

1.5 血液生化和激素指标测定方法总蛋白（TP）：双缩脉法；白蛋白（ALB）：溴甲酚绿法；球蛋白（GLB）：总蛋白一白蛋白；尿素氮（BUN）：两点动力法；葡萄糖（GLU）：葡萄糖氧化酶法；肌酸激酶（CK）：采用连续监测法（N-乙酰半胱氨酸法）；游离脂肪酸（FFA）：改良比色法；β-羟丁酸（β-HB）：酶法；皮质醇（COR）：放射免疫测定；去氢表雄酮（DHEA-S）：放射免疫测定。

1.6 统计分析由于在试验过程中1匹母马意外死亡，3匹母马出现肠扭转未能采样，因此只有11匹母马有检测结果。根据断奶马驹月龄和母马年龄分别进行整理分析，整理统计分析工具主要采用Excel软件、R2.14.2语言、Duncan′s多重比较法，试验结果用平均值±标准误表示。

2 结果与分析

有研究表明，断奶应激会导致血液葡萄糖（GLU）［11］、β-羟丁酸（β-HB）［11］、肌酸激酶（CK）［6，12］、游离脂肪酸（FFA）［13］和皮质醇浓度升高［14-15］；而总蛋白（TP）、球蛋白（GLB）［16-17］、尿素氮（BUN）［12］和去氢表雄酮（DHEA）浓度下降［10］。这些指标的变化不利于家畜机体的生理功能及代谢过程，会对家畜机体造成危害，损害家畜的动物福利，降低经济效益。因此，在生产实际中可以参考这些指标来判断家畜应激程度，并尽可能避免应激或将应激降至最小。

2.1 不同时期所有母马血清生化和激素指标变化由表1可见，所有母马的GLU、FFA和COR在不同时期发生显著的变化，其中，断奶当天GLU含量最高，并且与断奶前差异显著（P＜0.05）。断奶当天FFA和COR含量最低，其中FFA与断奶前差异显著（P＜0.05），而COR与断奶后差异显著（P＜0.05）。

表1 所有母马不同断奶时期血液生化和激素指标的测定结果

2.2 不同断奶月龄马驹的母马断奶前后血液生化和激素指标变化

2.2.1 具体时期不同断奶月龄马驹的母马血清生化和激素指标的影响由表2可知，在断奶前、断奶当天和断奶后3个时期，6、7、8月龄断奶马驹的母马所测定的10个血清指标之间都没有明显的变化（P＞0.05）。

2.2.2 具体断奶月龄马驹的母马在不同时期的血清生化和激素指标变化由表3可见，FFA浓度在7月龄和8月龄断奶马驹的母马断奶前后发生了显著变化，其中断奶当天7月龄和8月龄的FFA浓度最低，并且它们都与断奶前差异显著（P＜0.05），而6月龄断奶马驹的母马的FFA浓度在断奶前后差异不显著（P＞0.05）。其余9个指标在不同月龄断奶马驹的不同时期之间差异都不显著（P＞0.05）。

2.2.3 不同胎次断奶月龄马驹的母马血清生化和激素指标变化由表4可知，对于不同断奶月龄马驹的母马，不同胎次只在DHEA-S水平上表现明显的变化，6胎次DHEA-S浓度显著高于2胎次的DHEA-S，其他9个指标之间差异不显著（P＞0.05）。

2.3 不同年龄母马断奶前后的血液生化和激素指标变化

2.3.1 具体时期不同年龄母马血清生化和激素指标的变化由表5可知，6～9岁母马和10～13岁母马在断奶前、断奶当天和断奶后3个时期的10个血清生化和激素指标之间都没有明显的变化（P＞0.05）。

2.3.2 不同年龄母马在不同时期的血清生化和激素变化由表6可见，ALB、FFA和COR浓度在6～9岁母马的断奶前后发生了显著变化，GLU浓度在10～13岁母马的断奶前后发生了显著变化，其中断奶当天6～9岁母马的ALB浓度最高并且与断奶后差异显著（P＜0.05）；断奶当天FFA和COR浓度最低，其中FFA与断奶前差异显著（P＜0.05），COR与断奶后差异显著（P＜0.05）。10～13岁母马断奶当天的GLU最高并且与断奶前差异显著（P＜0.05），其余指标差异都不显著（P＞0.05）。

表2 具体时期不同断奶月龄马驹母马的血液生化和激素指标测定结果

表3 不同月龄断奶马驹母马在不同时期的血液生化和激素指标的变化

表4 不同胎次断奶月龄马驹母马的血液生化和激素指标

2.3.3 不同胎次母马的血清生化和激素指标变化由表7可知，不同胎次母马所测定的10个指标之间差异不显著（P＞0.05）。

3 讨论

3.1 不同时期所有母马血清生化和激素指标变化本试验发现马驹断奶前后，所有母马的GLU、FFA和COR含量都发生显著变化。血液中的GLU是糖在体内的运输形式，是测定机体能量平衡的一个重要指标，与家畜生产性能密切相关。应激是对扰乱机体正常生理功能所作出的反应，大多家畜应激时血清GLU浓度会升高，因为发生应激时，胰高血糖素和儿茶酚胺能促进糖原降解提供葡萄糖供能，同时增强了淋巴、肌肉和结缔组织中的糖异生作用。断奶应激会影响母马的生理、健康和营养福利。杨培歌等［8］报道地面温度过低使生长猪产生应激并且体内血糖含量显著升高。

本研究结果表明，断奶当天所有组别的母马GLU含量都显著高于断奶前，这与Lynch［11］对犊牛的断奶应激研究结果一致，说明马驹断奶会导致所有母马产生断奶应激。与6月龄和7月龄断奶马驹的母马相比，8月龄断奶马驹的母马GLU含量在断奶当天和断奶后都是最低的，说明8月龄断奶马驹的母马所产生的断奶应激低于7月龄和6月龄断奶马驹的母马。而在断奶当天和断奶后，6～9岁母马比10～13岁母马的GLU含量低，从而说明在GLU水平上所反映的应激程度是6～9岁母马小于10～13岁母马。

表5 具体时期不同年龄母马血液生化和激素指标

表6 不同年龄母马在不同时期的血液生化和激素指标的变化

表7 不同胎次母马的血液生化和激素指标

3.2 不同断奶月龄马驹的母马断奶前后的血液生化和激素指标变化在应激、饥饿、长时间运动等生理条件下，脂肪组织中脂肪的动员都会加强，此时下丘脑一垂体一肾上腺轴的激活会导致血浆中游离脂肪酸增加［13］。与程发祥［13］研究结果相反。本试验中断奶当天，7月龄和8月龄断奶马驹的母马FFA含量显著低于断奶前，而6月龄断奶马驹的母马断奶前后差异不显著，从而说明7月龄和8月龄断奶马驹的母马在FFA水平上所反映的断奶应激反应程度上低于6月龄断奶马驹的母马。

3.3 不同年龄母马断奶前后的血液生化和激素指标变化血清总蛋白、白蛋白、球蛋白含量是评价血清蛋白质营养重要指标之一。应激条件下，家畜体内皮质醇分泌增多，蛋白分解加快，从而使血清蛋白含量降低［16］。冷静等［17］发现不同日龄断奶仔猪在断奶后7 d内的TP、ALB和GLB均会迅速降低。与冷静等［17］结果相反，本研究发现6～9岁母马在断奶当天ALB含量最高，并且与断奶前差异显著，而10～13岁母马的ALB含量在断奶前后差异不显著从而说明6～9岁母马在ALB水平上所表现的断奶应激程度小于10～13岁母马。与程发祥［13］研究结果相反，本研究中的6～9岁母马在断奶当天FFA含量最低，并且与断奶前差异显著，从而说明6～9岁母马在FFA水平上所表现的断奶应激程度较小。

应激时家畜的下丘脑分泌促肾上腺皮质激素释放激素，促进垂体分泌促肾上腺皮质激素，使肾上腺皮质激素合成和释放增加，从而使体内皮质醇浓度上升。汤继顺等［14］研究发现，26日龄的杜长×大×三元杂交仔猪在断奶后1周内血清皮质醇含量极显著升高。Erber等［15］研究发现，断奶当天采用突然断奶法、代乳母马法和逐步断奶的马驹在断奶当天的皮质醇显著增加。本试验中断奶当天，6～9岁母马COR浓度显著低于断奶后，而10～13岁母马COR浓度断奶当天和断奶后均有上升的趋势，从而说明不同年龄母马在皮质醇浓度水平上反映出断奶应激程度是10～13岁母马高于6～9岁的母马。

3.4 不同胎次母马血清生化和激素指标的变化去氢表雄酮（DHEA-S）浓度的下降已经被作为应激反应的指标［10］。本试验发现，不同断奶月龄马驹的母马的6胎次DHEA-S浓度显著高于2胎次的母马，说明对于不同断奶月龄马驹的母马胎次小的母马应激程度较高；而不同胎次在6～9岁和10～13岁母马之间差异不显著，这个可能是由于年龄越大，生产胎次相对越多，分析不同断奶月龄马驹的母马时，不同的断奶马驹年龄组中既有胎次高的又有胎次低的，因此之间会存在差异，而不同年龄母马的胎次基本与母马年龄的变化趋势一致，因此导致不同年龄母马胎次间差异不显著。

综上所述，除了GLU、FFA和COR外，其余7个测定指标在断奶前后都没有显著变化，但是从显著差异的指标变化可以发现6月龄断奶马驹的母马断奶应激程度较高，可能是因为马驹的断奶月龄小，断奶前6月龄马驹对母马的依赖性高于7月龄和8月龄马驹，断奶后6月龄断奶马驹的母马所表现的念亲性就高于其他两组，从而导致应激反应大。而从母马年龄分组的比较分析发现，10～13岁母马的应激程度略高于6～9岁母马可能是因为10～13岁母马在代谢水平和免疫力上低于6～9岁母马。

4 结论

6月龄断奶马驹的母马和10～13岁母马在马驹断奶时所表现的断奶应激程度较高，因此在马驹断奶实际生产中应予以重点关注，尽量避免和减少断奶应激对母马的影响，从而提高母马的健康福利。同时可以将血液葡萄糖（GLU）、游离脂肪酸（FFA）和皮质醇（COR）的含量作为母马是否处于应激状态的辅助性检测指标，这对生产者采取应对应激措施具有一定指导意义。

致谢：本试验得到了新疆伊犁马研究繁育中心居马洪、江阿努尔和努尔兰以及石河子大学毋状元的大力支持，在此表示衷心地感谢！

［1］朱孟玲，徐孝宙，张建生，等.小梅山猪及其二元杂交猪断奶前后血清指标的检测［J］.畜牧与兽医，2011，43（7）:66-69.

［2］Sepponen K，Po so A R.The inducible form of heat shock Protein 70 in the serum，colon and small intestine of the Pig:Comparison to conventional stress markers［J］.Vet J，2006，171:519-524.

［3］Campbell N A，Reece J B，Mitchell L G.Biology［M］.In:Mulligan，E（ed）.1999:907-910.

［4］吴金节，王希春，李义刚，等.高铜对断奶应激仔猪血清生化指标及激素水平的动态影响［J］.中国医学报，2006，11（26）:677-680.

［5］Stanley C C，Williams C C，Jenny B F.Effects of feeding milk replacer once versus twice daily on glucose metabolism metabolism in Holstein and Jersey calves［J］.Dairy Scie，2002，85（9）:2335-2344.

［6］周向梅，高得仪，王清兰，等.仔猪断奶应激对血液和生化的影响［J］.中国兽医杂志，1999，25（9）:6-8.

［7］杨静.不同隔离时间的急性应激对鸡血液生化指标和下丘脑CRH、AVT、mRNA表达的影响［J］.广东饲料，2011，（5）: 35-37.

［8］杨培歌，顾宪红.应激对猪生产性能、行为及血液理化指标影响的研究进展［J］.中国畜牧兽医，2013，40（1）:111-116.

［9］Becker B A，Nienaber J A，Christenson R K.Peripheral concentrations of cortisol as an indicator of stress in the Pig［J］.Am J Vet Res，1985，46（5）:1034-1038.

［10］Zinder O，Dar D E.Neuroactive steroids:their mechanisms of actionandtheirfunctionin thestressresponse［J］.ActaPhysiolScand，1999，167:181-188.

［11］Lynch E M.Characterisation of physiological and immune-related biomarkers of weaning stress in beef cattle［D］.Ireland:National University of Ireland Maynooth，2010.

［12］高艳霞，叶纪梅，张祥，等.断奶应激对犊牛血液中代谢物和激素的影响［J］.中国畜牧兽医，2006，33（9）:3-5.

［13］程发祥.暖季放牧羔羊体内15种血清生化指标和13种激素变化规律的研究［D］.乌鲁木齐:新疆农业大学，2009.

［14］汤继顺，吴金节，王希春，等.锌源和锌水平对断奶应激仔猪血清激素水平的影响［J］.中国农业科学，2006，39（6）:1241-1247.

［15］Erber R，Wulf M，Rose-Meierh fer S，et al.Behavioral and Physiological responses of young horses to different weaning Protocols：a Pilot study［J］.Stress，2012，15（2）：184-194．

［16］刘圈炜，卢庆萍，张宏福，等．持续高温对生长猪血清生化指标及肌肉营养物质含量的影响［J］．动物营养学报，2010，22（5）：1207-1213．

［17］冷静，朱仁俊．不同日龄断奶应激对仔猪血液生化和免疫指标的影响［J］．安徽农业科学，2010，38（4）：1853-1854．

S821.4

：A

：0258-7033（2015）19-0075-05

2015-03-09；

2015-04-20

国家公益性行业（农业）科研专项（201003075）；自治区重大专项项目（201230116—8）；自治区高新项目（201411106）作者简介：肖海霞（1975-），女，在职博士，副研究员，主要从事动物遗传育种与繁殖的研究，E-mail：xhxqzp@163.com

*通讯作者：石国庆，博士，研究员，E-mail：nkkxyxms@163.com