何义明，陆建荣，赵建华（南通市第三人民医院检验科，江苏226300）

汽油漂浮集菌法在抗酸杆菌检验中的应用

何义明，陆建荣，赵建华
（南通市第三人民医院检验科，江苏226300）

目的：提高抗酸杆菌痰涂片的检出率，有助于对肺结核早发现、早诊断、早治疗。方法：对43例肺结核患者的痰液同时采用直接涂片法和汽油漂浮集菌法检测结核分枝杆菌。结果：直接涂片法阳性9例（20.9%），汽油漂浮集菌法检测抗酸杆菌阳性29例（67.4%），两者阳性率比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论：汽油漂浮集菌法检测抗酸杆菌阳性率大大提高，方便、经济、快捷、敏感性高，值得推广。

抗酸杆菌；漂浮集菌法；汽油；聚合酶链反应

结核分枝杆菌可通过呼吸道、消化道或破损皮肤侵入易感机体，引起多种组织器官的结核病，其中以通过呼吸道引起的肺结核最多。

目前临床上诊断肺结核及其疗效观察，仍把痰涂片找抗酸杆菌作为重要手段，也是预防工作的重点。这种方法对结核病早发现、早治疗也起到至关重要的作用[1]，但直接痰涂片找结核分枝杆菌的阳性率低于30%[2]。结核菌特点是细胞壁脂质含量高，占干重的60%，比重小。我科2011年5月—2014年8月对确诊肺结核患者43例，根据相似相溶原理，采用汽油漂浮集菌法检测结核分枝杆菌取得一定的效果，现报告如下。

1　临床资料

1.1一般资料确诊肺结核患者43例，男38例（88.4%），女5例（11.6%），年龄26～88岁，平均54.9岁。所有入选病例均符合“肺结核诊断和治疗标准”[3]。1.2方法（1）95%乙醇浸泡过夜、晾干的新玻片，0.4%KOH，90号汽油，50mL广口玻璃瓶及配套橡皮塞，抗酸染液（BaSO公司），OLYMPUS显微镜。（2）取患者晨起后深咳痰10～20mL于广口瓶中，按《结核病诊断细菌学检验规程》推荐要求直接涂片1张。剩下的标本，浓痰按1∶1比例加0.4%KOH，稀痰按约2∶1比例加0.4%KOH，加塞于高压锅内消毒灭菌15分钟。（3）待稍冷却后，加入3～5滴90号汽油，垫一次性清洁塑料薄膜加塞，于振荡器上振荡10分钟后加无菌盐水注满广口瓶，使液体不溢出为宜。（4）将玻片覆盖在广口瓶口，使玻片接触到瓶内液面，瓶内液面过低的可以在玻片边滴加几滴无菌盐水。静置30min。快速翻转玻片，使漂浮物吸附在玻片。将玻片置于200℃烤箱中，15～20分钟，玻片干燥。将两组玻片按要求行抗酸染色、镜检。

1.3统计学处理数据采用SPSS15.0统计软件处理，率的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

1.4结果判定按《全国临床检验操作规程》标准，油镜下观察2种方法的涂片，300油镜视野内见不到结核分枝杆菌时为阴性；300油镜视野内见到1～3条结核分枝杆菌时报具体条数；3～9条/100视野为+；1～9条/10视野为++，1～9条/视野为+++，≥10条/视野为++++[4]。结果：直接涂片法阳性9例（20.9%），汽油漂浮集菌法检测抗酸杆菌阳性29例（67.4%），两种方法阳性率比较差异有统计学意义（P<0.01）。

2　讨论

目前肺结核治疗已经非常成熟，患者经过科学合理的化疗，多数可以治愈。现有条件下获得早期、及时、准确地诊断，成为治疗肺结核的关键。痰培养阳性一直被认同为诊断肺结核的金标准。由于结核分枝杆菌生长缓慢，分裂一代需18～20小时。在改良罗氏培养基上，从接种到长出肉眼可见菌落需4～8周，从而增加患者住院时间，加大患者的费用，增加了与之接触的人群感染的风险，延误患者的治疗。

目前对结核病的诊断主要以接触史、症状体征、结核菌素皮试、影像学、痰涂片抗酸染色、基因扩增（PCR）等作为临床确诊或排除的标准，PCR法有成本高及假阳性率高的缺点[5]。传统的直接涂片法具有快速简便的优点，但阳性率较低，致使大多数需要紧急治疗的活动性肺结核被称之为结核菌阴性肺结核，不得不依靠其它诊断标准进行诊治。本组资料表明，汽油漂浮集菌阳性率比传统的直接涂片法高，提示汽油漂浮集菌法较直接涂片法更易找到抗酸杆菌，与冯士勇的报道相仿[6]。

《结核病诊断细菌学检验规程》中所介绍的直接涂片法，是把约0.1mL痰液均匀摊涂，使之变成10mm×20mm的薄膜。汽油漂浮集菌法把10～20mL的痰液中所含结核分枝杆菌，通过消化、汽油漂浮，富集在一张玻片上，因而敏感度显著提高，能有效的减少漏诊，帮助临床及时确诊，使患者得到及时治疗，这对结核病的防治十分重要。且汽油漂浮集菌具有所需设备简单、费用低、报告时间短等优点，同时该检测方法收集标本的条件、标本量、油镜每个视野的实际面积均容易被“标准化”，所以是一种具有推广价值的检测方法。

[1]Phillips MS，Gaym an JE，Todd MW.ASHP guidelines on medication-use evaluation.American Journal of Health-System Pharmacists［J］.Am J Health Syst Pharm，1996，53（16）：1953-1955.

[2]赵雁林，姜广路.中国结核病防治规划——痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册［M］.北京：中国协和医科大学出版社，2009：5-6.

[3]中华医学会结核病学分会.肺结核诊断和治疗指南［J］.中华结核和呼吸杂志，2001，24（2）：70-72.

[4]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.3版.南京：东南大学出版社，2006.

[5]毛文捷，邹盛华，张丽水，等.实时荧光定量聚合酶链反应在肺结核诊断中的应用［J］.检验医学与临床，2012，9（18）：2273-2274.

[6]冯士勇.1274例结核患者痰涂片与培养结果分析［J］.检验医学与临床，2013，10（A02）：271-272.

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