李奉京 蒲志群 北京蓝谱生物技术开发有限公司

结核病是由结核分枝杆菌引起的一种严重影响人类健康的慢性传染病。据世界卫生组织报道，目前全球有约三分之一( 20 亿) 人口受感染，每年新发结核患者达900 多万，死亡人数约 300 万。中国是全球22 个结核病高负担国家之一，结核患者数仅次于印度位居世界第二。为加强全球结核病防控工作，联合国制定了千年防治目标，要求全球结核病控制至2015 年结核病的患病率和死亡率均降低50%，但结核病防治工作中肺结核病人的发现仍是难点和重点。目前结核病的诊断仍然依赖于临床资料、痰涂片镜检和细菌培养。然而，涂片法灵敏度低，分离培养方法耗时长，随着全球结核病防治工作的进展，现有的细菌学实验方法已不能满足临床和防治工作要求。为提高肺结核病人的发现率，新的基于分子生物检测的方法不断的涌现，其中荧光定量PCR 方法，XPERT 方法需要昂贵的仪器设备，在设施简陋技术缺乏的基层实验室条件尚不能满足这些方法的开展。而 LAMP 方法不需要昂贵的仪器，操作步骤相对简单，对实验室的条件设备要求不高，因此，该方法有望成为结核病诊断方法中新的宠儿。

全球结核病流行状况（WHO report，2013）

LAMP 法是一种全新的DNA 扩增方法，具有简单、快速、特异性强、灵敏度高等特点，采用2 对引物在等温条件下即可完成DNA 的扩增，扩增结果可通过肉眼观察荧光或浊度进行判定，同时采用封闭系统减少了工作区域扩增子的污染，且整个反应过程需时较短。PURE-LAMP 检测试剂盒就是日本荣研公司与FIND 基金合作开发出的一种基于LAMP 技术速高效检测结核分枝杆菌的试剂盒，被WHO 推荐为最适合现场快速检测结核病的重要产品之一。该试剂盒采用的是干粉试剂，可常温运输和保存，配合简单的前处理试剂，操作简便，无需复杂的技术要求，一台简单的恒温装置就可以在一个小时之内完成检测，直接通过肉眼观察荧光进行结果判定，可以说为设备简陋的基层实验室提供了分子检测平台。

最近，中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心的欧喜超、赵雁林等，帕斯适宜卫生科技组织（PATH）的张治英、李俊晨等，香港中文大学的Man Kam，盖茨基金会项目北京办的池俊英，中国人民解放军总医院的张志坚等科研机构的专家们联合发表于国际著名期刊《PLOS ONE》上的一篇文章报道了PRUE-LAMP 检测试剂盒在中国区县级实验室应用评估结果。研究者们收集了来自中国两个县级结核病实验室的1378 份肺结核疑似病例，排除不合格样本后可供研究分析的共有1329 份。采集三个时期的痰液（时痰，晚痰和早痰）样本用于检测。将PURE-LAPM与标准L-J 培养法做对照。研究结果显示，在供试样本中，PURE-LAMP 法检测结核分枝杆菌的灵敏度达到70.67%。同时，PURE-LAMP 法在基于涂片阳性培养呈阳性，涂片阴性培养呈阳性的病患中灵敏度分别为92.12%和53.81%。PURE-LAMP 法在检测结核分枝杆菌中的特异性为98.32%。并且，与固体培养法相比，PURE-LAMP 能显著降低污染率。

PURE-LAMP 法具有较高的灵敏度和特异性。其具有高效、快速和安全的优点，适合在基层及偏远地区广泛推广使用。