张乐平 沈 健

(江苏省中医院药学部，江苏 南京 210029)

过敏性哮喘是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病，其中白细胞介素5(IL－5)和白细胞介素10(IL－10)是参与调节哮喘气道炎症反应的重要细胞因子［1］。平哮合剂是江苏省中医院院内自制剂，临床研究证实其治疗支气管哮喘疗效肯定［2］。本实验通过观察平哮合剂对过敏性哮喘豚鼠模型血清和肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中 IL－5和 IL－10水平的影响，以探讨其治疗哮喘的可能机制，结果如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 豚鼠，60只，体质量160～180 g，雌雄各半，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供，实验动物生产许可证号 SCXK(苏)2002－0004。

1.1.2 药品及试剂 平哮合剂，由江苏省中医院制剂部提供(苏药制字Z04000538，批号150511，经浓缩后每mL药液含生药4 g);卵清蛋白，武汉生命技术有限公司进口分装(Sigma);醋酸地塞米松片(天津天药药业股份有限公司，国药准字H12020686);戊巴比妥钠，中国医药(集团)上海化学试剂公司。IL－5和IL－10酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒，上海史瑞可生物科技有限公司。

1.1.3 主要仪器 BIO－RAD 3550酶标仪，Microplate Reader，美国 Bio－Rad公司;S－888F型超声雾化器，中外合资南京道芬电子有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 模型制备及分组 取豚鼠50只，按文献［3］方法造模，每只豚鼠腹腔注射10%卵清蛋白溶液(卵清蛋白10 g加入0.9%氯化钠注射液100 mL中进行配比)1 mL，2周后进行引喘。取1%卵清蛋白溶液(卵清蛋白1 g加入0.9%氯化钠注射液100 mL中进行配比)20 mL注入超声雾化器，将豚鼠放入雾化箱内，开动雾化器，当豚鼠出现喘促、咳嗽等呼吸道痉挛梗阻症状时，表示过敏性哮喘豚鼠造模成功。取造模成功的豚鼠40只，随机分为4组，即模型对照组、平哮合剂1组、平哮合剂2组及地塞米松组，每组各10只。另选进行造模的10只豚鼠为空白对照组。

1.2.2 给药方法 模型对照组及空白对照组均予0.9%氯化钠注射液5 mL/kg灌胃，平哮合剂1组、平哮合剂 2组分别予平哮合剂 5.0、

2.5 mL/kg灌胃给药，地塞米松组予醋酸地塞米松0.1 mg/kg灌胃给药。均每日1次，连续7 d。

1.3 检测指标及方法 检测豚鼠血清及BALF中IL－5及IL－10含量。方法:末次给药后1 h，5组豚鼠予1%戊巴比妥钠3 mL/kg腹腔注射进行麻醉，开胸充分暴露胸腔，结扎右主支气管，气管插管直至左主支气管，固定，用注射器缓慢注入0.9%氯化钠注射液5 mL，回抽3次，回收率＞80%，收集获得BALF，EP管分装，3 000 r/min离心10 min，取上清液。收集获得BALF后，每只豚鼠颈动脉插管取血，血液置37℃水浴凝固后，3 000 r/min离心10 min，取血清。用(ELISA)法测定血清及BALF中IL－5及IL－10水平，具体测定方法步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.4 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，多组样本比较采用单因素方差分析(ANOVA)，并采用最小显著差异法(LSD)行两两比较。

2 结果

2.1 5组豚鼠血清IL－5及IL－10水平比较见表1。

表1 5组豚鼠血清IL－5及IL－10水平比较 pg/mL，±s

表1 5组豚鼠血清IL－5及IL－10水平比较 pg/mL，±s

与空白对照组比较，＊＊P＜0.01;与模型对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

组 别 n IL－5 IL－10空白对照组10 77.22±15.21 54.28±10.92模型对照组 10 114.24±24.56＊＊ 34.59±8.27＊＊平哮合剂1组 10 91.63±19.41△△ 46.33±9.37△△平哮合剂2组 10 105.13±20.42△ 41.75±9.11△地塞米松组 10 88.58±18.29△△ 50.85±11.19△△

由表1可见，与空白对照组比较，模型对照组血清IL－5水平显著升高(P＜0.01)，IL－10水平显著降低(P＜0.01)。与模型对照组比较，平哮合剂1组、平哮合剂2组及地塞米松组血清IL－5水平显著降低(P＜0.01，P＜0.05)，IL－10水平显著升高(P＜0.01，P＜0.05)。平哮合剂1组、平哮合剂2组及地塞米松组血清IL－5及IL－10水平两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。

2.2 5组豚鼠BALF中IL－5及IL－10水平比较 见表2。

表2 5组豚鼠BALF中IL－5及IL－10水平比较pg/mL，±s

表2 5组豚鼠BALF中IL－5及IL－10水平比较pg/mL，±s

与空白对照组比较，＊＊P＜0.01;与模型对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

组 别 n IL－5 IL－10空白对照组10 136.63±23.41 85.98±17.49模型对照组 10 186.40±35.80＊＊ 51.30±9.73＊＊平哮合剂1组 10 156.19±30.59△△ 73.38±17.23△△平哮合剂2组 10 171.36±28.93△ 66.54±14.81△地塞米松组 10 153.34±26.57△△ 75.68±15.87△△

由表2可见，与空白对照组比较，模型对照组豚鼠BALF中IL－5水平显著升高(P＜0.01)，IL－10水平显著降低(P＜0.01)。与模型对照组比较，平哮合剂1组、平哮合剂2组及地塞米松组豚鼠BALF中IL－5水平显著降低(P＜0.01，P＜0.05)，IL－10水平显著升高(P＜0.01，P＜0.05)。平哮合剂1组、平哮合剂2组及地塞米松组豚鼠BALF中IL－5及IL－10水平两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨论

嗜酸性粒细胞(EOS)是哮喘炎症反应的重要细胞，在哮喘患者和哮喘动物模型气管壁、痰液和BALF 中都可找到大量 EOS［4－5］。IL－5 是辅助性T细胞(Th)2细胞释放的细胞因子，在EOS的成熟、活化、存活及向气道的聚集方面发挥关键作用。IL－5亦可刺激EOS释放组胺、白三烯、前列腺素以及其他细胞因子，引起气道炎症［6－7］。IL－10是一种细胞因子合成抑制因子，主要由调节性T细胞分泌，可抑制多种炎症前因子的转录。IL－10可通过抑制 IL－5，或直接作用于EOS凋亡，从而抑制 EOS，对抗气道炎症［8］。本实验结果显示，过敏性哮喘模型组豚鼠血清和BALF中IL－5水平与空白对照组相比均显著升高(P＜0.01)，IL－10水平显著降低(P＜0.01)，进一步证明了IL－5和IL－10在哮喘中的作用。

哮喘属中医学哮病、喘证范畴，其基本病机为风痰痹阻，夹瘀夹热，痰随气升，气因痰阻，相互搏结，壅塞气道，肺气郁滞，失于宣降。治疗上应重视祛风化痰、清热宣闭、气血同调，着眼于胸阳痹阻，开泄气机［2］。平哮合剂是根据哮喘的病机特点，优选经现代药理证实具有抗炎平喘、解痉化痰作用的中药射干、杏仁、麻黄、瓜蒌、薤白、桃仁、僵蚕、黄芩、地龙、炙甘草等共同组合而成。方中麻黄宣肺散寒，射干开结消痰，并为君药。杏仁降利肺气，与麻黄相伍，一宣一降，以恢复肺之宣降，加强宣肺平喘之功;桃仁止咳平喘，瓜蒌涤痰散结，开胸通痹，薤白通阳散结，化痰散寒，能散胸中凝滞之阴寒，化上焦结聚之痰浊，宣胸中阳气以宽胸，共为臣药。僵蚕化痰散结，黄芩泻火除烦止渴，地龙泻热平喘，共为佐药。炙甘草调和诸药，为使药。诸药相合，共奏祛风化痰、开肺泄浊、降逆平喘之功效。前期研究证实，平哮合剂具有明确的平喘、抗炎作用［9］，本实验结果显示，平哮合剂能显著降低哮喘豚鼠模型血清和BALF中IL－5水平，升高IL－10水平。虽然本研究中平哮合剂1组与平哮合剂2组豚鼠血清和BALF中IL－5、IL－10水平差异无统计学意义(P＞0.05)，但平哮合剂1组(高剂量组)呈现出改善效果更好的趋势，可能存在一定的量效关系，有待进一步验证。

［1］ Miller AL.The etiologies，pathophysiology，and alternative/complementary treatment of asthma［J］.Altern Med Rev，2001，6(1):20－47.

［2］ 史锁芳，曹世宏，郝月琴，等.平哮合剂治疗支气管哮喘发作期的临床研究［J］.中国中医药科技，2005，12(1):6－8.

［3］ 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学［M］.北京:人民卫生出版社，1990:1178.

［4］ Macedo P，Hew M，Torrego A，et al.Inflammatory biomarkers in airways of patients with severe asthma compared with non－ severe asthma［J］.Clin Exp Allergy，2009，39(11):1668－1676.

［5］ Moreno－ Alvarez P，Sánchez－ Guerrero E，Martínez－Cordero E，et al.Aerosolized polymerized type I collagen reduces airway inflammation and remodelling in a guinea pig model of allergic asthma［J］.Lung，2010，188(2):97－105.

［6］ Takatsu K，Nakajima H.IL－5 and eosinophilia［J］.Curr Opin Immunol，2008，20(3):288－294.

［7］ Holgate ST.Pathogenesis of Asthma［J］.Clinical ＆Experimental Allergy，2008，38(6):872 – 897.

［8］ Ogawa Y，Duru EA，Ameredes BT.Role of IL－10 in the resolution of airway inflammation［J］.Curr Mol Med，2008，8(5):437－445.

［9］ 郝月琴.平哮合剂对哮喘豚鼠模型影响的实验研究［J］.天津中医学院学报，2002，21(3):44－45.