陈思，麦惠洪

(惠州市中心人民医院，广东惠州516000)

膀胱尿路上皮癌患者尿液中EGFR mRNA的表达及意义

陈思，麦惠洪

(惠州市中心人民医院，广东惠州516000)

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)mRNA在膀胱尿路上皮癌(BUC)患者尿液中的表达及意义。方法 选择60例BUC患者(BUC组)和15例健康志愿者(对照组)，采用RT-PCR技术检测两组尿液EGFR mRNA的表达，比较不同病理分期BUC患者EGFR mRNA表达的差异。结果 BUC组EGFR mRNA阳性表达率为70.0%，对照组无阳性表达，两组比较有统计学差异(P<0.05)。BUC组中，非肌层浸润性患者EGFR阳性表达率为60.0%，肌层浸润性患者EGFR阳性表达率为100%，两组比较有统计学差异(P<0.05)。结论 EGFR mRNA在BUC中的过度表达与肿瘤的发生发展有关，其可作为预测肿瘤临床病理学分期的参考指标。

膀胱肿瘤；表皮生长因子受体；病理分期

膀胱尿路上皮癌(BUC)占膀胱癌的90%以上[1]。尿脱落细胞学及膀胱镜检查是膀胱癌诊断的金标准，但前者敏感性较低，且易受血尿、感染等因素影响，特异性稍低；后者为有创检查，且对不典型增生、原位癌的识别仍存在困难[2，3]。研究显示，肿瘤标志物表皮生长因子受体(EGFR)在膀胱癌患者的血液和肿瘤组织中过度表达，可作为膀胱癌诊断、检测及评价疗效的指标[4～6]。本研究应用RT-PCR技术检测BUC患者尿液中EGFR mRNA的表达，探讨检测尿液EGFR mRNA用于BUC诊断和病理分期的可能性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择我院2013年1月～2014年6月收治的BUC患者60例(BUC组)，男39例、女21例，年龄41～87岁、平均56岁。均经病理检查证实，其中非肌层浸润性膀胱癌45例，肌层浸润性膀胱癌15例。另取15例健康志愿者作为对照组，男7例、女8例，年龄38～68岁、平均47.5岁。两组性别、年龄具有可比性。

1.2 检测方法 采集受试者新鲜中段尿液1.0 mL置于EP管，离心弃上清，于沉淀物中再次加入1.0 mL尿液，离心弃上清，重复3次，以保证得到足量样品，在最终沉淀中加入1 mL生理盐水混匀，离心弃上清，生理盐水洗涤，在沉淀中加入1 mL RNA提取液，混匀后移入新的EP管内。离心管中先倒入0.3 mL淋巴细胞分离液，自然沉淀15 min后，低速离心5 min，吸取白细胞层于离心管中，生理盐水洗涤，加入1 mL Trizol充分混匀。加入氯仿分层，异丙醇沉淀，75%乙醇洗涤，提取总RNA。cDNA合成与PCR扩增参考文献[7]方法。PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，紫外灯下照相。观察到168 bp产物带则证明逆转录模板有效，441 bp处出现产物带图像则判定EGFR表达阳性。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件，计数资料用百分比表示，组间比较用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组尿液EGFR mRNA表达情况比较 BUC组EGFR阳性表达42例，阳性率70.0%；对照组未见EGFR阳性表达。两组比较有统计学差异(P<0.05)。

2.2 不同病理分期BUC患者尿液EGFR mRNA表达情况比较 BUC组非肌层浸润性患者45例，EGFR阳性表达27例，阳性率60.0%；肌层浸润性患者15例，EGFR阳性表达15例，阳性率100%。二者比较有统计学差异(P<0.05)。

3 讨论

肿瘤的发生、复发、转移具有十分复杂的生理机制，其中基因变异尤其是原癌基因变异发挥重要作用[8]。EGFR是一种由原癌基因编码的酪氨酸激酶受体，在生理状态下不表达或有限表达，当编码该受体的原癌基因发生突变时，可导致多余的表皮生长因子受体产生，增强细胞信号的传导，该受体的激活能导致细胞生长、增殖、迁移，导致肿瘤的发生和转移[9]。

EGFR是由c-erbB-1基因生成的一跨膜糖蛋白，定位于细胞膜，分子量约170 kD。EGFR在多种细胞甚至胎盘中均有表达，具有酪氨酸激酶活性，参与细胞增殖和分化的调控。目前有关EGFR与膀胱癌的关系研究结论较一致，认为EGFR表达与膀胱癌的发生和分级均有关系。顾勇[10]发现，EGFR在膀胱癌患者黏膜中阳性表达率为56.5%，在正常膀胱黏膜中无阳性表达，两组比较有统计学差异(P<0.01)，其中EGFR的阳性表达率随着膀胱癌病理分级和临床分期的增高而增高。费夏玮等[11]研究显示，膀胱移行细胞癌组织中，EGFR的表达率与肿瘤临床分期显著相关(P<0.05)，EGFR的阳性表达强度随着肿瘤分期的升高而增强(P<0.05)，认为EGFR的过度表达对膀胱移行上皮癌的发生发展起协同作用。包卿兵等[12]发现，EGFR在膀胱癌组织过度表达率为64%，在正常膀胱组织中无表达。癌组织中EGFR过度表达在不同的临床病理特征之间有统计学差异(P<0.05)，复发肿瘤中EGFR过度表达明显高于不复发(P<0.05)，它们之间存在相关性(P<0.05)；李应龙等[7]收集62例膀胱移行细胞癌(TCC)患者和25例健康人外周静脉血及癌组织标本，采用RT-PCR方法检测EGFR mRNA表达，结果显示膀胱TCC组织中EGFR mRNA的平均阳性率为72.6%，在Tis-1、T2、T3、T4期膀胱TCC组织中EGFR mRNA的阳性率分别为57.1%、62.5%、85.7%、100%，在Tis-1、T2、T3、T4期膀胱TCC患者外周血中EGFR mRNA的阳性率分别为14.3%、25.0%、78.6%、90.9%，在组织和外周血中低分期(Tis-1、T2)与高分期(T3、T4)膀胱TCC表达EGFR mRNA阳性率有统计学差异(P<0.01)。而健康人外周静脉血中均未发现EGFR mRNA表达。因此认为，膀胱TCC组织及外周血中EGFR mRNA表达阳性率与肿瘤分期、是否转移有关。然而上述研究的对象均为癌症患者的肿瘤组织和(或)外周血，本研究对BUC患者的尿液进行检测，无创、操作更简单、受检者的接受度更高。结果显示，EGFR在正常人群尿液中呈阴性，在膀胱癌中的阳性表达率为70.0%，随膀胱癌病理分级的增高而增高。与上述文献结果基本一致。另一方面，本研究运用RT-PCR技术在分子水平探讨了EGFR与膀胱癌发生发展的相关性，得出EGFR过度表达与膀胱癌的发生发展呈正相关的结论。

综上所述，EGFR mRNA在膀胱尿路上皮癌中的过度表达与膀胱癌的发生发展有关，与肿瘤的浸润深度分化状态关系十分密切，其水平高低可作为预测肿瘤临床病理学分期的参考指标。关于EGFR在膀胱癌的发生发展中的地位和机制仍需进一步研究。

[1] 乔鹏飞,张志宏,徐勇,等.膀胱癌侵及前列腺与膀胱癌伴偶发前列腺癌的临床特点及预后比较[J].山东医药,2013,53(45):10-12.

[2] Mowatt G, N'Dow J, Vale L, et al. Photodynamic diagnosis of bladder cancer compared with white light cystoscopy: Systematic review and meta-analysis[J]. Int J Technol Assess Health Care, 2011,27(1):3-10.

[3] 杨青,李俊,梁朝朝.核基质蛋白22联合尿脱落细胞学检查对膀胱癌诊断的价值[J].安徽医科大学学报,2012,58(2):220-222.

[4] 张玉瑞,刘宏民,王庆伟,等.尿液修饰核苷检测在膀胱尿路上皮癌预后监测中的应用价值[J].中华泌尿外科杂志,2012,33(6):429-433.

[5] 祝庆亮,谷江,张永春,等.多原发膀胱癌与单发膀胱癌中P53、Bcl-2、C-erbB-2、EGFR的表达及临床意义[J].南京医科大学学报(自然科学版),2012,57(7):989-994.

[6] 关云哲,王振中,杨东彪.小分子蛋白激酶抑制剂对浅表性膀胱癌细胞瘤细胞EGFR下游信号通路的影响[J].中国老年学杂志,2013,33(13):3137-3139.

[7] 李应龙,石家齐,陈方敏.外周血EGFR mRNA在膀胱癌中的表达及在微转移中的意义[J].贵阳医学院学报,2009,52(4):366-369.

[8] 陈俊星,郭胜杰,毛晓鹏,等.原癌基因PIM-1在膀胱尿路上皮癌中的表达和意义[J].中华实验外科杂志,2011,28(12):2092-2094.

[9] 叶木石,苏劲.PTEN、PCNA、CerbB-2在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义[J].实用临床医药杂志,2011,15(24):50-52.

[10] 顾勇.C-erbB-2和EGFR及nm23-H1在膀胱癌中的表达及临床意义[J]. 临床医药实践,2011,28(5):333-336.

[11] 费夏玮,刘光香,祝帅,等.p53、VEGF、COX-2和EGFR在膀胱癌组织中表达的相关性及临床意义[J].现代泌尿外科杂志,2013,14(3):249-253.

[12] 包卿兵,刘军,林建中.表皮生长因子受体和HER2在膀胱移行上皮细胞癌中的过度表达和意义[J].山西医药杂志,2007,51(12):1089-1091.

惠州市科技计划项目(20140802)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.01.013

R737.14

B

1002-266X(2015)01-0035-02

2014-08-22)