夏晓梅 豁银强 汤尚文

摘要 建立了高效液相色谱检测牛奶中氯霉素残留的方法。用乙腈提取氯霉素，提取液浓缩后用甲醇溶液溶解，在波长278 nm处用高效液相色谱仪测定氯霉素。该方法氯霉素浓度为1～30 mg/L时，样品平均回收率为85.33%～97.20%，相对标准偏差（RSD）为5.18%～10.63%。该方法适于牛奶中氯霉素残留的检测。

关键词 高效液相色谱；氯霉素；牛奶；检测

中图分类号 S859.84 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）01-0294-01

Abstract A liquid chromatography method was developed for determining chloramphenicol in milk.Chloramphenicol were extracted by +When the content of chloramphenicol in the range of 1 mg/L to 30 mg/L，the recovery rate of this method was 85.33%～97.20%，and the RSD was 5.18%～10.63%.The experimental results showed that this method was suitable for the detection of chloramphenicol residue in milk.

Key words high performance liquid chromatography（HPLC）；chloramphenicol；milk；determination

氯霉素可以通过抑制细菌蛋白质合成而发挥抑菌作用，对大多数革兰氏阳性和阴性菌有效，对革兰氏阳性菌作用性较强。在畜牧业生产中，氯霉素常常被用于治疗动物各种传染性疾病，特别是在治疗奶牛乳腺炎的过程中，使用频率非常高。由于用药随意性大、用药后没有及时停止挤奶，常常导致牛奶及奶制品中残留氯霉素。氯霉素对人体健康有非常不利的影响，能够杀伤颗粒性白细胞，抑制红细胞的成熟，容易引起再生障碍性贫血，损害视力，引起急性中毒性表皮松懈症，使眼睑粘连及产生角膜瘢痕，对老年人、新生儿、早产儿以及肝肾功能不全的病人影响更大。氯霉素的应用已有近50年的历史，但由于上述毒副作用使氯霉素成为第1种被禁止用于可食用动物的抗生素[1]。为了保障消费者的健康，扩大我国动物产品在国际市场上的销售，需要建立牛奶中氯霉素残留量的测定方法，对市场上的牛奶产品进行监测管理，预防氯霉素的污染。

目前，牛奶中常用的氯霉素检测方法有微生物学方法[2]、放射免疫法[3]、色谱法[4]和酶免疫分析法[5]等。该文利用高效液相色谱法检测牛奶中氯霉素残留，以期建立一种快速、简便的牛奶中氯霉素残留的检测方法。

1 材料与方法

1.1 试验仪器

高效液相色谱仪（岛津LC-15C）；紫外分光光度计（岛津UV-1800）；超声波清洗器KQ2200（昆山市超声仪器公司）；旋转蒸发仪RE-3000A（上海亚荣）；涡旋混合器XW-80A（海门其林贝尔）；0.45 μm有机微孔滤膜。

1.2 试验试剂

氯霉素标准品（合肥博美，纯度≥98.0%）、甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）。水为试验室自制超纯水。

1.3 标准品配制

精密称取氯霉素标准品10 mg置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并准确定容至刻度，摇匀，配成质量浓度1.0 mg/mL的储备液，置于4 ℃冰箱中保存，使用前再用甲醇稀释成相应的质量浓度。

1.4 牛奶试样配制

取不含氯霉素的牛奶样品，准确添加一定量的氯霉素标准储备液，配制成1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L的供试样品。

1.5 供试样品提取

准确称取10 mL左右牛奶供试样品，置于50 mL具塞离心管中，加入乙腈定容，涡旋振荡提取1 min，超声提取10 min，以5 000 r/min离心10 min，上清液转移至100 mL蒸发瓶中，重复提取2次，合并上清液，上清液用旋转蒸发仪35 ℃旋转蒸发至近干，用甲醇定容至10 mL，经0.45 μm滤膜过滤，试液供液相测定[6]。

2 结果与分析

2.1 高效液相色谱条件的建立

取氯霉素储备液经稀释后，用石英比色皿在紫外分光光度计上扫描，结果见图1。可以看出，氯霉素在278 nm处有最大吸收波长。因此，选择氯霉素检测波长为278 nm。

色谱柱，岛津Shim-Pack VP-ODS（150.0×4.6 mm，5 μm）；流动相，甲醇-水溶液（体积比为40∶60）；流速0.8 mL/min；波长278 nm；柱温30 ℃；进样量10 μL。

2.2 液相色谱标准曲线

标准溶液系列：取一定量的氯霉素储备液，稀释成浓度分别为1、5、10、15、20、25、30 mg/L的系列标准溶液，绘制标准曲线，结果见图2。

在1～30 mg/L范围内氯霉素标准曲线的回归方程为Y=0.202 7x+0.375 3，相关系数R2=0.999 1。

2.3 方法回收率与精密度

按1.4方法配制牛奶试样，按1.5处理方法进行提取，测定氯霉素含量，计算回收率，每个水平进行3次重复试验，结果见表1。样品平均回收率在85.33%～97.20%，相对标准偏差（RSD）为5.18%～10.63%。

3 结论与讨论

在使用高效液相色谱法检测牛奶中氯霉素的过程中，存在以下问题：一是检测结果易受到牛奶中所含蛋白质、脂肪、糖类、维生素、无机盐、水分等的影响。二是牛奶中的营养物质会污染仪器，降低仪器的使用寿命。在检测牛奶中氯霉素含量的方法中，常用的提取剂有乙酸乙酯和乙腈[6]。该试验采用乙腈作为萃取溶剂，经提取浓缩后用甲醇溶解，然后进行测定，其方法的平均回收率为85.33%～97.20%。方法简便、快速，加标回收率和精密度良好，能够满足实际应用需要[7]。

4 参考文献

[1] 毕建玲.氯霉素分子印迹聚合物的制备及其在食品残留分析中的应用[D].武汉：华中科技大学，2008.

[2] 宋杰，宋燕青，王勇鑫，等.微生物法在检测牛奶中氯霉素残留的应用[J].河北师范大学学报，2005（1）：85-87，91.

[3] 宋巍巍，丁明星，张挪威，等.伏安免疫法检测牛奶中氯霉素残留[J].分析化学，2007（12）：1731-1735.

[4] 陈少芸，严成钊，柴平海，等.食品中氯霉素残留检测方法应用的探索——高效液相色谱法[J].食品工业，2004（2）：35-37.

[5] 古丽沙依拉·斯坦别克.酶联免疫法测定牛奶中氯霉素应注意的事项[J].新疆畜牧业，2013（08）：46-48.

[6] 张杰，许家胜，刘连利.高效液相色谱法测定牛奶中的氯霉素残留[J].化学研究与应用，2013（4）：593-595.

[7] 陈基耘.气质联用法测定牛奶中氯霉素残留量[J].中国测试，2010（6）： 42.