龚楚惠，李霞斌，罗 华，唐 红，寇玉玲，孙兴旺

（泸州医学院附属医院病理科，四川泸州646000）

胃肠间质瘤169例免疫组化特征分析

龚楚惠，李霞斌，罗 华，唐 红，寇玉玲，孙兴旺

（泸州医学院附属医院病理科，四川泸州646000）

目的探讨胃肠间质瘤（GIST）CD117、DOG-1、CD34、α-SMA、S-100的免疫组织化学特点及其在GIST诊断中的选择策略。方法回顾性分析泸州医学院附属医院2005年1月至2013年12月收治的169例胃肠间质瘤，用免疫组织化学EnVision法检测石蜡组织中CD117、DOG-1、CD34、α-SMA、S-100的表达情况，比较分析各指标的表达水平。结果169例GIST中CD117、DOG-1、CD34、α-SMA、S-100的阳性率分别为95.2%、93.5%、74.3%、43.9%和27.2%。其中88.8%的病例CD117、DOG-1双阳性，53.3%的CD117阴性病例表达DOG-1。63.3%的病例同时表达CD117、DOG-1和CD34，仅1.1%的病例3项指标为阴性。CD117和DOG-1的阳性率均显著高于CD34、α-SMA、S-100的阳性率，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论CD117和DOG-1在GIST诊断中互补，联合检测可提高GIST的诊断率，可作为常规选用的指标。对于DOG-1/CD117/CD34联合检测为阴性的患者，α-SMA、S-100具有辅助诊断价值。

胃肠道间质肿瘤； 免疫组织化学； 原癌基因蛋白质c-kit； DOG-1

胃肠间质瘤（gastrointestinal stromal tumor，GIST）是最常见的消化道间叶性肿瘤，可发生在消化道的任意部位，最常发生在胃和小肠，极少数病例可发生在胃肠道以外的部位，如网膜或肠系膜等[1]。免疫组织化学一般为CD117（kit）阳性表达，有5%～10%的GIST患者不表达CD117，联合检测CD117、DOG-1、CD34、SMA、S-100有助于提高其诊断率。作者对本院169例GIST患者联合检测CD117、DOG-1、CD34、SMA、S-100表达水平进行回顾性分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 资料

1.1.1 一般资料 选择泸州医学院附属医院2005年1月至2013年12月存档的331例GIST患者，筛选资料完整、首次发病、术前无放疗或化疗史、诊断明确的GIST患者169例，其中男91例，女78例，男女比例1.2∶1；年龄23～87岁，平均54.8岁。GIST的分布情况：胃81例，十二指肠10例，小肠50例，肠系膜/腹膜/网膜18例，结直肠12例，食管4例，腹膜后4例。肿瘤直径：＜5 cm 89例，5～10 cm 59例，＞10 cm 21例。参照Miettinen组织分型标准[2]分为：梭形细胞型、上皮样细胞型、混合细胞型，梭形细胞型129例，上皮样细胞型28例，混合细胞型12例。本研究获得本机构“研究伦理复审委员会”批准。

1.1.2 试剂 兔抗人CD117（克隆号A450229）和鼠抗人CD34抗体（克隆号QBend10）购自基因科技（上海）有限公司；兔单抗DOG-1（克隆号AR0278）、鼠单抗SMA（克隆号AM0005）和鼠单抗S-100（克隆号AM0209）购自广州深达生物制品技术有限公司；免疫组织化二抗试剂盒和DAB显色试剂盒购自丹麦DAKO公司。

1.1.3 免疫组织化学染色 术后标本4%中性甲醛固定，常规取材、石蜡包埋，3 μm连续切片。免疫组织化学采用EnVision两步法。染色步骤和抗体稀释度按照产品说明进行，常规设置阳性及阴性对照。

1.2 结果判定 在瘤细胞相应部位出现棕黄色颗粒为阳性细胞，不同抗体表达部位有差异，CD117、DOG-1和CD34阳性为胞膜和（或）胞质着色，α-SMA阳性为胞质着色，S-100为胞膜和（或）胞核着色。每张切片于显微镜下随机观察5个高倍视野（20×），计算瘤细胞阳性率平均值（肿瘤阳性细胞数/视野中瘤细胞总数×100%），每例切片瘤细胞阳性率大于或等于5%，且阳性部位定位准确判为阳性，否则为阴性；低倍镜（10×）下，每例切片阳性瘤细胞弥漫分布，瘤细胞阳性率大于75%，判为弥漫阳性。

1.3 统计学处理 应用SPSS17.0统计软件进行数据分析，计数资料以率表示，采用χ2检验和Fisher确切概率法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 免疫组织化学染色结果 CD117表达在瘤细胞膜和胞质，阳性率为95.2%（161/169），多表现为弥漫、均匀的强阳性；偶表现为局灶阳性和/或弱阳性。DOG-1阳性信号主要位于梭形细胞的胞质，阳性率为93.5%（158/ 169）。膜阳性者主要见于上皮样细胞。镜下DOG1染色呈弥漫强阳性；部分病例表现为弥漫弱阳性或局灶强阳性。在一些患者中，CD117虽呈弥漫弱阳或局灶阳性，DOG-1仍可表现出弥漫强阳性。CD34表达于细胞膜和细胞质，阳性率为76.1%（124/169）。呈弥漫阳性表达，但其染色范围和强度多数病例不及CD117、DOG-1。α-SMA阳性表达74例，占43.9%，常为胞质着色，表现为局灶阳性，弥漫着色者极其罕见。46例（27.2%）GIST表达S-100，镜下表现与α-SMA类似。

2.2 169例GIST患者中5项免疫组织化学指标阳性率比较 CD117和DOG-1的阳性率均显著高于CD34、α-SMA、S-100，差异均有统计学意义（P≤0.001），表1。

表1 169例GIST中5项免疫组织化学指标阳性率比较

2.3 169例GIST患者中CD117和DOG-1表达的相互关系 169例GIST中，88.8%的患者同时表达CD117和DOG-1，11%的患者至少表达CD117或DOG-1中的一种抗体。CD117阳性率略高于DOG-1，但差异均无统计学意义（P=0.608），见表2。

表2 169例GIST中CD117和DOG-1表达的相互关系（n）

2.4 169例GIST患者中CD117、DOG-1和CD34表达情况 63.3%（107/169）的患者可同时表达CD117、DOG-1和CD34。19例CD117阴性或DOG-1阴性患者中17例表达CD34，达89.5%，高于CD117、DOG-1同时阳性者。

3 讨 论

GIST是一种形态学、临床表现和生物学行为都具有高度异质性的疾病，其诊断须依靠形态学结合临床资料综合考虑。在实际工作中，对于HE镜下形态符合GIST的病例，常规选择CD117、DOG-1、CD34、α-SMA、S-100等指标协助诊断，但上述指标在GIST中的敏感性和特异性各不相同，有效的指标检测将对诊断率的提高大有裨益。

CD117是由原癌基因c-kit编码的酪氨酸激酶受体。GIST以c-kit基因过表达和CD117免疫组织化学染色阳性为其特征，85%～95%的GIST显示CD117免疫组织化学染色阳性，其染色稳定、重复性高。值得注意的是，5%～10%的GIST为CD117阴性[4]，这给病理诊断带来一定的困难。CD117失表达的原因可能有GIST发生发展过程中丢失所致，也可能与使用酪氨酸激酶抑制剂治疗有关。另外，部分消化道原发性梭形细胞瘤，例如Kaposi′s肉瘤和黑色素瘤，形态学表现与GIST类似，且CD117染色也呈阳性。因此，CD117不能成为独立确诊GIST的指标。

DOG-1在经典型GIST及无c-kit基因突变的GIST均有过表达现象，因此被认为是最敏感的指标。Espinosa等[5]研究报道，DOG-1的总体阳性率为75%～100%。本研究结果显示，DOG-1阳性率略低于CD117（89.8%比91.5%），但差异无统计学意义（P＞0.05）。同时，本组研究对CD117和DOG-1在GIST的免疫表型组合进行了比较，结果显示，176例GIST中，85.2%表现为CD117阳/ DOG-1阳，9.7%表现为CD117阳/DOG-1阴，4.3%表现为CD117阴/DOG-1阳，1.1%表现为CD117阴/DOG-1阴。与Lee等[6]研究结果接近，这也进一步验证了联合使用2种抗体，且共显阳性时更具有GIST确诊意义。West等[7]认为，超过1/3的CD117阴性病例能被DOG-1确诊出来。本研究显示，在15例CD117阴性的病例中有8例（53.3%）表达DOG-1。在CD117阴性的GIST病例，DOG-1更具诊断意义。另外，DOG-1在梭形细胞瘤中的假阳性率低于1%，说明其是GIST诊断中特异性最高的抗体。

CD117抗体在GIST诊断的价值得到认可之前，CD34曾是诊断GIST的首选抗体。Tan等[8]研究发现，80%～85%的胃GIST和50%的小肠GIST表达CD34，梭形细胞型及其变异型更常见到 CD34阳性染色。就GIST而言，CD34的敏感性不如DOG-1和CD117，特异性也比DOG-1低得多。但CD34作为联合检测指标，其诊断价值不容忽视。本研究结果显示，只有1.1%（2/169）的患者为CD117阴/DOG-1阴/CD34阴，而7例CD117阴/DOG-1阴患者中，5例（71.4%）表达CD34。因此，目前CD34主要用于那些在形态学上符合 GIST，而CD117和（或）DOG-1染色为阴性的患者。

传统观念认为，GIST能向平滑肌和神经方向分化，但平滑肌分化似乎更常见，既往的研究显示α-SMA阳性率约为30%～40%[10]。本研究显示，α-SMA阳性率为47.7%，比文献[10]报道的要高。α-SMA染色通常表现为局灶阳性，在正常组织（非肌肉组织）没有背景染色。S-100阳性染色在GIST中极其少见，阳性者多见于小肠的 GIST[11]。本研究中，S-100的阳性表达率为20.5%，其中有36.1%为小肠GIST，33.%为胃GIST，研究结果与参考文献[11]报道相似。另外，GIST中的S-100常表现为局灶阳性。因而，当S-100弥漫强阳性时，应考虑为其他的肿瘤，如神经鞘瘤、恶性黑色素瘤或颗粒细胞瘤。

诊断GIST的每种免疫指标都各具特点，选择性的联合检测不失为一种有效的诊断方式。对于拟诊GIST的CD117阴性病例应加做DOG-1指标检测以提高GIST检出率；CD117、DOG-1、CD34 3个指标均为阳性者，结合临床资料，GIST诊断成立；对于形态学上不能除外的GIST病例，若CD117和DOG-1染色均表现为弥漫阳性，可考虑诊断GIST[12]，若其免疫组织化学染色为上述1种或2种抗体的局灶染色阳性[13]，需警惕是否为腹腔内的血管肉瘤、尤文肉瘤、黑色素瘤。而对于形态学高度怀疑GIST的病例，若DOG-1、CD117染色为阴性，则要考虑选用肌组织标记（α-SMA）和神经组织标记（S-100），这2项指标虽没有GIST确诊意义，但可利用其诊断或排除胃肠道其他类型的间叶肿瘤。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.10.031

：B

：1009-5519（2015）10-1519-03

2015-03-11）

龚楚惠（1985-），女，贵州贵阳人，在读硕士研究生，主要从事分子病理学诊断工作；E-mail：gongchuhui@126.com。

孙兴旺（E-mail：lygunxw@163.com）。