冀爱云 刘建峰 魏香兰 师延峰 张 鑫 朱昌生

西安市结核病胸部肿瘤医院 (西安710061)

正交试验优选逐痰消痹方涂膜剂提取工艺研究*

冀爱云 刘建峰△魏香兰 师延峰 张 鑫 朱昌生▲

西安市结核病胸部肿瘤医院 (西安710061)

目的：逐痰消痹方涂膜剂的优选提取工艺。方法：采用正交试验设计提取方式，以高效液相色谱法测定提取液中芫花素的含量并与芫花素对照品进行对比从而判定最佳提取工艺。对确定的最佳工艺进行验证性试验。结果：60%的乙醇10倍量回流提取3次每次1h为最佳提取工艺，在验证试验中证实工艺稳定。结论：优选的工艺合理、稳定、可行。

逐痰消痹方涂膜剂由甘遂、木香、大戟、白芥子、川芎、芫花等16味中药组成，具有逐水祛痰，化瘀通络，通阳利肺之功效，用于包裹性胸膜炎、胸腔积液、胸膜黏连、胸膜肥厚等症的治疗[1]。本课题采用先进的技术和工艺，将其制成涂膜剂，改型后药物更易吸收，疗效更加稳定，且减小药物对患者皮肤的刺激，适于临床应用。成熟的提取工艺是涂膜剂疗效的关键因素之一，本研究采用正交试验法对该方提取工艺进行了优选，保证前期提取过程稳定可行。

1 仪器与试药

1.1 仪 器 高效液相色谱仪(岛津LC-2010ATH)；紫外可见检测器(UV-VIS)；Shim-pack VP-ODS柱(250mm×4.6mm，0.45μm)色谱柱；赛多利斯BP211D型电子分析天平；KQ3200DE型超声波清洗器。

1.2 试 药 逐痰消痹方涂膜剂；芫花素对照品(批号：111899-201001)由中国药品生物制品检定所测定；甲醇为色谱纯；超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果 2.1 因素水平的设计 根据处方中各味药的主要成分和理化性质，将白芷、甘遂、川芎和丹参等粉碎备用，与芫花、木香、枳实、甘遂等混合，用乙醇提取。为了确保疗效，本方提取工艺的确定是以君药芫花的有效成分芫花素的提取程度以及出膏率为考核指标，对逐痰消痹方涂膜剂的乙醇提取工艺进行优选。

本实验拟定的影响因素包括乙醇的浓度(A)、乙醇的用量(B)、提取的时间(C)、提取的次数(D)[4]。根据预实验，每个因素选3个水平，A选取60、80、95，B选取6、8、10倍，C选取1h、1.5h、2h，D选取1、2、3次。

2.2 样品中芫花素的含量测定 色谱条件: 色谱柱：Shim-pack VP-ODS柱(250mm×4.6mm，0.45μm)；甲醇-水-冰乙酸流动相(65︰35︰0.8)；检测波长：338nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；进样量：10μL。

溶液的制备:标准品：精密称取芫花素对照品0.00091g，加甲醇定容至10mL,制成每1mL含0.091mg的溶液，即得。供试品：根据处方投药，每个试验组取药总量相等。按照正交设计表中所列条件进行试验，滤过，取续滤液，即得。 阴性供试品：按处方比例取处方中缺芫花的阴性样品，提取，滤过，方法同供试品。

线性关系考察:芫花素对照品溶液精密吸取(91μg/mL)量分别为1μL、2μL、3μL、4μL、5μL并注入液相色谱仪分别测定，将纵坐标设定为峰面积积分值(y)，将横坐标设定为芫花素对照品进样量(μg)，绘制标准曲线，计算得回归方程y=4.00×106x-2.41×105，r=0.9999，线性范围为0.091～0.455μg。

测定: 对各供试品溶液、对照品溶液、阴性供试品溶液进行提取，提取量均为10μl，注入高效液相色谱仪，按色谱条件测定峰面积，计算芫花素含量，色谱图见图1，结果见表1。

A.对照品 B.供试品 C.阴性对照品

2.3 出膏率的测定 用移液管吸取各工艺提取液5mL，置于105℃干燥至恒质量的蒸发皿中，水浴蒸干，于减压干燥箱中干燥至恒质量，计算出膏率。

表1 L9(34)正交试验设计与结果

2.4 正交试验分析 以干浸膏的率和芫花素含量为指标，对乙醇浓度(A)、乙醇用量(B)、提取时间(C)、提取次数(D)4个因素进行考察。按L9(34)正交表分别进行提取，实验设计及结果见表1。不考虑交互作用，由R值可知，各因素对测定结果的影响次序为D> B> C > A。通过方差分析可知，4个因素中，A、B、C、D的F值分别为1.00、16.565、12.612、122.684，D具有显著影响(P0.01)，其他因素均不具显著影响。考虑到大生产时生产周期及操作成本的问题，确定最佳提取工艺为A1B3C1D3。即60%的乙醇、10倍量、每次1h、提取3次。

2.5 验证试验 按处方量称取同一批药材(组成方剂)3份，按最佳提取工艺进行验证试验，结果3批芫花素含量分别是83.78%、85.47%、80.65%，出膏率分别是16.32%、15.87%、15.22%表明该工艺稳定可行。

3 讨 论 研究中我们主要选用乙醇作为提取溶剂，主要是考虑逐痰消痹方中芫花、枳实、甘遂等药物的主要成分为醇溶性成分[2-4]。本研究采用正交试验方案设计，考虑到有效成分的提取受提取溶剂的浓度，用量，提取时间，提取次数的影响，将芫花素含量作为主要测定指标，得出提取次数是主要影响因素。通过反复试验，得出稳定可靠、易于提取的工艺，且经验证该法优越、可行。为保证临床药效，更好地控制涂膜剂生产质量提供参考。本研究在注重涂膜剂质量的同时，优选出适合工业化生产的提取方法，为涂膜剂的进一步开发提供科学的依据。

在此基础上，我们将对涂膜剂的具体工业化生产进行实践，借鉴其他成熟的工业技术，力图为逐痰消痹方涂膜剂的批量生产探求合理、高效的模式，以适应临床需求特点，为此类药品的生产提供参考。

[1] 弓显凤, 董荣秀, 赵 琳, 等. 中西医结合加磁热治疗结核性胸膜炎[J]. 浙江中西医结合杂志, 2007, 17 (10): 597-598.

[2] 葛 莉, 冯一凡，王卫峰，等. 正交试验优选丹川胶囊的醇提工艺[J]. 陕西中医, 2012, 33(8): 1072-1073.

[3] 曹雨诞, 张 丽, 李 媛，等. 甘遂的毒性成分、炮制方法及炮制减毒机制的研究进展[J]. 中国药房, 2011, 22 (19): 1817-1819.

[4] 张永勇, 倪 丽, 范春林，等. 枳实中一个新的酚苷成分[J]. 中草药, 2006, 37(9): 1295-1297.

(收稿2014- 08-02；修回2014-09-17)

Study on the extraction technology of Zhutan Xiaobi plastics

Xi'an TB and Thoracic Tumor Hospital (Xi’an 710061)

Ji Aiyun Liu Jianfeng Wei Xianglan et al

Objective:To potimize the optimum extraction process of Zhutan Xiaobi plastics. Methods:HPLC analysis on contect of genkwanin in Zhutan Xiaobi extract. Selected the best extraction process by orthogonal test. Results:Indicate 60% ethanol quantity of 10 times, reflux extraction 2 hours, 3 times was the optimum craft of extraction. Conclusion: The extraction technology is reasonable, stable and feasible.

Orthogonal experiment @ Zhutan Xiaobi plastics

*陕西省中医管理局中医药科研课题(lc81)

正交试验 @逐痰消痹方涂膜剂

R283

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.02.052

△陕西省中医药研究院(西安710003)

▲通讯作者