李春龙，廖 洪，杨 瑛，吴长洪(广东省深圳市盐田区妇幼保健院检验科 518081)



HPV分型及其高危亚型与宫颈病变的相关性分析*

李春龙，廖 洪，杨 瑛，吴长洪(广东省深圳市盐田区妇幼保健院检验科 518081)

目的 观察人乳头瘤病毒(HPV)亚型分布情况，探讨HPV高危亚型与宫颈病变的相关性。方法 回顾性分析5 545例行液基细胞学检测(TCT)及HPV分型检测筛查宫颈癌患者的临床资料，其中细胞学结果为无明确意义的非典型鳞状上皮细胞改变(ASCUS)及以上级别者，进行阴道镜宫颈活检，分析HPV亚型分布情况及高危亚型与宫颈病变的相关性。结果 5 545例女性共筛查出HPV感染者3 106例，感染率56.01%，其中单型感染者2 243例，占72.22%(2 243/3 106)；多重感染者863例，占27.78%(863/3 106)；共检测出4 194株HPV亚型。感染频度前5位的HPV亚型分别是16型(21.75%)、58型(20.12%)、52型(10.59%)、18型(7.46%)以及68型(5.05%)。ASCUS、鳞状上皮内低度病变及高度病变的病变率分别为27.07%(471/1 740)、26.67%(144/540)、61.57%(133/216)，宫颈细胞学病变分级程度越高，宫颈高度病变率越高(P<0.05)。病理结果为CINⅡ、CIN Ⅲ、宫颈癌患者的HPV高危亚型的阳性感染率分别为92.13%、96.21%、100.00%，提示HPV高危亚型的感染率越高，宫颈病变程度越高(P<0.05)。TCT、HPV高危亚型和病理活检3种方法进行对比分析显示，宫颈细胞学检查异常程度和病理活检病变分级越高，HPV高危亚型阳性率越高；在TCT结果异常的患者中，HPV高危亚型阳性的患者宫颈高度病变发生率更高。以病理活检为金标准，HPV高危亚型筛查在鳞状上皮高度病变患者中对宫颈高度病变的灵敏度高达90.91%，特异度高达85.71%，阳性预测值高达90.91%。结论 宫颈细胞学检查异常程度和病理活检病变分级越高，HPV高危亚型阳性率越高；HPV分型检测对细胞学异常者宫颈高度病变筛查有重要意义。

HPV分型检测； 高危亚型； 宫颈病变

近年来，宫颈癌的发生率呈上升趋势，是发病率第二位的女性恶性肿瘤，有数据显示，宫颈癌占所有女性恶性肿瘤的25%[1]。研究已证实，人乳头瘤病毒(HPV)是宫颈癌和宫颈上皮内瘤变的致病因素之一，尤其是高危型HPV更容易导致宫颈癌前病变，而宫颈癌的癌前病变期可逆，因此，HPV感染并对其准确分型，进行早期干预治疗对挽救患者性命具有重要的意义。此外，应用HPV检测筛查宫颈癌，有助于提高宫颈病变诊断的准确性，同时，对HPV进行分型，有利于临床制定相关干预措施。经阴道镜多点去活体做病理学检查作为诊断宫颈癌的金标准，长期以来由于操作过程中设备需求高，技术人员专业性的要求也高，因而不能作为筛查的主要手段。近年来，薄层液基细胞学检测技术(TCT)、高危型HPV(HR-HPV)筛查以及联合LCT和HR-HPV在宫颈癌临床筛查上的应用大大提升了筛查的准确性和特异性[2-3]。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本院妇科门诊2009年1月至2014年6月共对5 545例女性进行机会性宫颈癌筛查，均进行HPV分型检测和TCT。对HPV高危亚型阳性或TCT结果为无明确意义的非典型鳞状上皮细胞改变(ASC-US)及以上级别者，进行阴道镜宫颈活检。所有患者知情同意，排除生殖道畸形和急性炎性反应、有宫颈锥切及子宫切除手术史、妊娠、免疫缺陷、肿瘤史患者。

1.2 方法

1.2.1 HPV分型检测 采用中国凯普生物科技公司的HPV分型检测试剂盒，可检测21种HPV亚型，包括高危亚型13种(HPV16、HPV18、HPV3l、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV68型)，低危亚型5种(HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44型)以及中国人群常见型3种(HPV53、HPV66、CP8304型)[4]。宫颈上皮脱落细胞标本采集后4 ℃标本，48 h内完成检测。抽提纯化DNA，PCR扩增，以凯普医用核酸分子快速杂交仪为平台，利用导流杂交的原理，在已经固定好核酸探针的低密度基因芯片膜上，采用凯普导流杂交HPV-DNA检测法检测HPV的分型。

1.2.2 TCT检测 采集宫颈脱落上皮细胞标本后，根据ThinPrep液基细胞学检测仪(美国新柏氏公司)的操作规范，TCT制片染色后，由2名细胞病理学医师独立阅片，结果不能确定者再请上级医生阅片确定结果。采用2001年国际癌症协会伯塞斯达系统报告染色观察结果[3,5]，即正常范围(WNL)、无明确意义的ASCUS改变、鳞状上皮内低度病变(LSIL)、鳞状上皮内高度病变(HSIL)、鳞状细胞癌(SCC)、腺上皮不正常为意义不明的不典型腺细胞(AGUS)和腺癌。根据TBS标准，LSIL即CINⅠ,HSIL包括CIN Ⅱ和 CIN Ⅲ。细胞学LSIL以上病变诊断为阳性。

1.2.3 病理诊断标准 TCT检查结果为ASCUS及以上级别者，进行阴道镜检查，对宫颈可疑病变部位采集标本活检。以组织病理学的诊断作为金标准，根据组织学的标准，宫颈病变的病理结果报告分为：正常、炎性反应、湿疣；宫颈上皮内瘤变：分为CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ；宫颈浸润癌；其他。CINⅡ级及以上病变程度规定为宫颈高度病变标准。

1.3 统计学处理 采用SPSS 18.0统计软件对资料进行统计分析。计数资料用百分率(%)表示，组间比较采用χ2检验，显著性标准取α=0.05。

2 结 果

2.1 HPV亚型分布 本组5 545例女性共筛查出HPV感染者3 106例，感染率56.01%，其中单型感染者2 243例，占72.22%(2 243/3 106)；多重感染者863例，占27.78%(863/3 106)。共检测出4 194株HPV亚型。单型感染者中，检出率超过5.00%的HPV亚型分别是HPV16型541株(24.12%)、HPV58型495株(22.07%)、HPV52型248株(11.06%)、HPV18型135株(6.02%)、HPV11型127株(5.66%)、HPV33型122株(5.44%)、HPV68型113株(5.04%)；多重感染者中，检出率超过5.00%的HPV亚型分别是HPV16型371株(19.02%)、HPV58型349株(17.89%)、HPV52型196株(10.05%)、HPV18型178株(9.12%)、HPV53型103株(5.28%)、HPV68型99株(5.07%)。结果见表1。

表1 HPV亚型分布情况[n(%)]

2.2 TCT检测结果 TCT结果显示，WNL者3 049例，大于或等于ASCUS者2 496例，占45.01%。其中ASCUS 1 740例，LSIL 540例，HSIL 216例。

2.3 病理活检结果 对2 496例大于或等于ASCUS者进行病理组织活检，结果显示，病变为炎性反应或湿疣的患者1 212例，CIN Ⅰ 540例，CIN Ⅱ432例，CINⅢ 264例，宫颈癌48例，宫颈高度病变率29.81%(744/2 496)。ASCUS、LSIL、HSIL的高度病变率分别为27.07%(471/1 740)、26.67%(144/540)、61.57%(133/216)。可见，随着宫颈细胞学病变分级程度越高，宫颈高度病变率越高(P<0.05)。

2.4 HPV高危亚型与宫颈病变的关系 病理诊断为炎性反应或湿疣、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌的患者中，感染HPV高危亚型的阳性率分别为38.45%(466/1 212)、60.56%(360/540)、92.13%(398/432)、96.21%(254/264)、100.00%(48/48)。可见，HPV高危亚型的感染率越高，宫颈病变程度越高(P<0.01)。

2.5 HPV高危亚型检测与病理结果对比分析 本组宫颈高度病变患者共有744例，在HPV高危阳性者中的检出率为45.87%(700/1 526)，在HPV高危亚型阴性中的检出率为4.54%，两者比较，差异具有统计学意义(P<0.01)。以病理结果为诊断金标准，HPV高危型阳性对宫颈高度病变诊断的灵敏度为94.09%，诊断特异性为52.85%，阳性预测值为45.87%，阴性预测值为95.46%。结果见表2。

表2 HPV高危亚型检测与病理结果对比(n)

2.6 TCT不同分级的HPV高危亚型感染率及宫颈高度病变率 471例被病理诊断为宫颈高度病变的ASCUS患者中，HPV高危亚型阳性患者的宫颈高度病变率为40.22%(444/1 104)，显著高于HPV高危亚型阴性的4.25%(27/636)，差异有统计学意义(P<0.01)，提示HPV高危亚型阳性的ASCUS患者宫颈高度病变发生率更高。同理，在LSIL和HSIL的患者中，HPV高危亚型阳性患者的宫颈高度病变率分别为36.67%(132/360)和90.91%(120/132)，显著高于HPV高危亚型阴性的6.67%(12/180)和14.29%(12/84)，差异具有统计学意义(P<0.05)。此外，以病理活检为金标准，HPV高危亚型筛查在HSIL患者中对宫颈高度病变的灵敏度高达90.91%(120/132)，特异度高达85.71%(72/84)，阳性预测值高达90.91%(120/132)。上述结果表明，在TCT结果异常的患者中，HPV高危亚型阳性的患者宫颈高度病变发生率更高，HPV高危亚型阳性的HSIL患者需立即进行阴道镜采集病理活检，以及早发现宫颈高度病变。结果见表3。

表3 TCT、HPV高危亚型以及病理活检结果对比(n)

3 讨 论

有多机构研究显示，HPV亚型感染率具有较大的地域差异，国际癌症研究协会分析了全球25个国家共3 607例宫颈癌患者的HPV亚型感染情况，发现感染率最高的HPV16平均感染率高达57.40%；其次为HPV18，感染率12.60%～25.70%[6]。有研究报道，亚洲国家感染率最常见的是HPV52型和HPV58型，有流行病学研究显示，上海的宫颈癌标本中，HPV52和HPV58型感染率高达42.50%[7]。有权威数据显示，中国女性最常见的HPV亚型感染频度前5位的分别是HPV16、HPV18、HPV52、HPV58、HPV31[8-9]。本组研究筛查了5 545例女性，共筛查出HPV感染者3 106例，感染率56.01%，感染频度前5位的HPV亚型分别是HPV16型(21.75%)、HPV58型(20.12%)、HPV52型(10.59%)、HPV18型(7.46%)以及HPV68型(5.05%)，基因型与亚洲国家的相关报道基本一致，检出频度略有差异，可能与HPV亚型在人群中的分布有地域差异有关，也可能与研究对象的来源不同有关[10]。

研究已证实，HPV高危亚型感染是导致宫颈高度病变的必要条件，有统计数据表明，99.80%的宫颈癌患者感染HPV高危亚型[9]。本组研究显示，病理结果为CIN Ⅱ、CIN Ⅲ、宫颈癌患者的HPV高危亚型的阳性感染率分别为92.13%、96.21%、100.00%，可见HPV高危亚型的感染率越高，宫颈病变程度越高(P<0.01)。TCT、HPV高危亚型和病理活检3种方法进行对比分析显示，宫颈细胞学检查异常程度和病理活检病变分级越高，HPV高危亚型阳性率越高；在TCT结果异常的患者中，HPV高危亚型阳性的患者宫颈高度病变发生率更高，以病理活检为金标准，HPV高危亚型筛查在HSIL患者中对宫颈高度病变的灵敏度高达90.91%，特异度高达85.71%，阳性预测值高达90.91%。因此，临床检查发现HPV高危亚型阳性的HSIL患者需立即进行阴道镜采集病理活检，以及早发现宫颈高度病变。

宫颈病变严重程度及其预后转归除了与感染HPV高危亚型有关，还与遗传、年龄、免疫状态、婚育史、生活习惯等诸多因素有关[11]。因此，在临床工作中，应结合多种方法对高危人群进行筛查。本组研究结果有助于了解笔者所在地区范围内的HPV各亚型分布趋势，对疫苗研制或临床重点筛查具有重要的指导意义，对TCT不同分级的患者进行临床分层管理也有参考价值。HPV亚型检测对筛查宫颈癌和宫颈癌手术后随访具有重要的临床应用价值。

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广东省计划生育委员会科研基金资助项目(2010312)。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.08.033

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1672-9455(2015)08-1109-03

2014-10-10

2014-11-20)