张 丽，焦 凯，张 菊

(第四军医大学唐都医院内分泌科，西安 710038)



·论 著·

21-羟化酶缺陷症基因诊断方法的建立及应用

张 丽，焦 凯△，张 菊

(第四军医大学唐都医院内分泌科，西安 710038)

目的 建立一种荧光偏振检测技术联合直接测序法诊断先天性肾上腺皮质增生症中21-羟化酶缺陷症的新方法，并对中国人群中最常见的2种基因缺失和8种点突变进行检测。方法 收集40例健康者及2例患者外周血，提取基因组DNA。设计通用引物，同时扩增CYP21A2和CYP21A1P等位基因片段，然后用序列特异的TAMRA荧光标记探针对扩增产物进行杂交检测，利用荧光偏振仪检测扩增杂交的荧光偏振值，确定是否存在该基因的缺失，同时用直接测序法验证检测结果；对Exon3 Del 8 bp(GAGACTAC)缺失进行检测时，将缺失的8个碱基设计在引物上，确保引物的特异性。同时根据CYP21A2基因与其假基因序列差异，设计5对特异性引物扩增CYP21A2基因，PCR后直接测序检测中国人群中最常见的8种点突变，包括P30L、i2g、I172N、E6Cluster、V281L、920-921insT、Q218X、R356W。结果 荧光偏振法未检测到CYP21A2基因大片段缺失，检测结果与直接测序法结果对比差异无统计学意义(P>0.05)，一致率达100%，40例健康者未检测到点突变，1例患者检测出Exon1 G56R,Exon7c.920-921InsT插入杂合突变，1例患者检测出Exon4I172N、Exon8Q318X杂合突变。结论 荧光偏振检测法联合直接测序法诊断21-OHD是一种高效的检测手段，可以广泛用于临床，不仅能对患者基因突变类型进行分析，在指导遗传咨询及产前诊断方面亦发挥重要作用。

先天性肾上腺皮质增生症； 21-羟化酶缺乏症； 荧光偏振； CYP21A2基因

先天性肾上腺皮质增生症(CAH)是一组由于肾上腺皮质激素合成途径中的必需酶基因的缺陷所引起的一种常染色体隐性遗传病，是引起两性畸形最常见的病因[1]。其……