饶桂荣，张换敬，黄 彬，陈光明，王洪敏，杨富强

HBV感染慢性化的发生除HBV本身的生物学特性外，更重要的是取决于机体的免疫应答状态，因此建立一种不仅能预防HBV感染，更能有效免疫清除肝细胞内病毒的治疗性疫苗，是当今这一医学领域的研究热点和难点[1-3]。治疗性DNA疫苗的作用机制是通过产生内源性抗原提高机体特异性细胞免疫，打破患者免疫耐受状态以清除病毒，该种疫苗是稳定、安全、有效的理想疫苗之一[4-5]。

基因载体的选择对DNA疫苗至关重要，一方面，标准质粒的骨架DNA成分均包括DNA复制起始位点及抗菌素抵抗基因等，这些成分会抑制目的基因表达，并且载体基因DNA可能插入宿主基因组，诱发插入突变和基因沉默的危险；另一方面，标准质粒转导效率低，目的基因只能实现瞬间表达，其分子量较大，容易引发免疫反应而被机体所清除。因此，安全、高效的表达是研究核酸DNA疫苗基因治疗的关键[6]。Chen等[7]和Kay等[8]开发的微环DNA载体技术有助于解决以上问题。微环是一种环状表达盒子，不含标准质粒中细菌骨架DNA，能在体内长期表达高水平的目的基因产物。微环在结构、基因表达的持久性和细胞内稳定性等方面与共价闭环DNA相同，使微环成为安全、高效的理想载体之一。微环DNA的制备方法是将含目的基因的亲本质粒转化入宿主菌ZYCY10P3S2T后，以阿拉伯糖诱导重组酶的表达，重组酶介导其识别位点发生重组，使亲本质粒重组形成含细菌骨架的质粒和含目的基因表达盒的微环DNA[9]。……