瞿伟，彭亚婷，周国凤

(南昌市第三医院，南昌330006)

乳腺叶状肿瘤(PTs)是少见的纤维上皮来源的肿瘤，占乳腺肿瘤的0.3%～1%，有复发和转移的潜能。根据间质细胞异型性、间质细胞密度、核分裂象、间质过度生长及肿瘤边界几个特征，PTs可分为良性、交界性及恶性。虽有报道p53、c-kit、EGFR、CD10等标志物与以上病理学特征之间的关系，然而仍难以准确区分纤维腺瘤与良性PTs，良性PTs与交界性PTs，交界性PTs与恶性PTs［1］。本研究通过免疫组化SP法检测E-cadherin蛋白在PTs及纤维腺瘤上皮组织中的表达，检测Ki-67在PTs间质成分中的表达，从而探讨E-cadherin的表达与PTs病理学特征及Ki-67表达之间的相关性，分析E-cadherin在鉴别PTs和纤维腺瘤的意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 南昌市第三医院2011年4月～2013年5月手术切除的PTs患者60例，年龄26～76岁，平均45岁;肿物直径1.8～21 cm，平均6.3 cm;其中，良性PTs 41例，交界性PTs 16例，恶性PTs 3例。选择同期乳腺纤维腺瘤患者10例作为对照组，年龄1 9～48岁，平均30.6岁;肿物直径1.5～4cm，平均2.2 cm，分别取肿瘤组织。

1.2 方法

1.2.1 病理形态观察方法 所有肿瘤组织经10%中性福尔马林固定、石蜡包埋及HE染色，由两名病理医师显微镜下观察肿瘤的间质细胞异型性、间质细胞密度、核分裂象、间质过度生长、肿瘤边界的病理学特征。1～3项分为轻、中、重3级，核分裂象为计算每10个(400倍)HPF内间质细胞核分裂数(直径0.5 mm)。病理诊断标准:良性PTs为间质细胞密度低，无间质过度生长，核轻度异型，肿瘤边界清楚，和(或)核分裂≤2个/10 HPF(400倍);恶性PTs为间质细胞密度高、间质过度生长、核重度异型、核分裂≥5个/10 HPF(400倍)和(或)肿瘤边界不清。符合以上5个诊断标准中的4个及以上则诊断为良性或恶性PTs，不完全符合良性或恶性PTs诊断标准时则诊断为交界性PTs。

1.2.2 E-cadherin、Ki67检测方法 所有组织经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，SP法免疫组化染色。鼠抗人E-cadherin、Ki-67单克隆抗体(即用型，克隆号:4A2C7、EP5)和SP免疫组化试剂盒均购自北京中杉金桥公司。以阳性对照切片作为阳性对照，血清代替一抗为阴性对照，PBS代替一抗为空白对照。Ki-67用0.01 mol/L、pH 6.0的柠檬酸盐进行高压修复，E-cadherin用0.001 mol/ L、pH 9.0的EDTA进行热修复。最后DAB显色，苏木精复染，盐酸乙醇分化，氨水返蓝。结果判定:在显微镜下观察，E-cadherin为上皮成分中胞膜及近胞膜胞质着色，Ki-67为胞核着色。E-cadherin按阳性细胞比例及着色深浅评分。阳性强度判定:无着色为0分，淡棕黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;阳性细胞数目为实际百分率;两者相乘为评分结果，分值范围0～300。Ki-67计算阳性细胞比例。

1.2.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。E-cadherin在叶状肿瘤、纤维腺瘤上皮成分中表达是否存在差异采用t检验，E-cadherin表达与临床病理参数的相关性分析采用Pearson相关性分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 E-cadherin蛋白表达 E-cadherin蛋白在纤维腺瘤中的阳性表达为236.50±60.14，在叶状肿瘤中的阳性表达为175.93±83.83，P=0.032。见插页Ⅲ图8。

2.2 E-cadherin表达与叶状肿瘤病理学特征的关系 E-cadherin的表达随着间质细胞密度的增加而减少(P=0.00);E-cadherin的表达与肿瘤边界、组织学分级、细胞异型性、细胞生长过度及核分裂象无关性(P均＞0.05)。见表1。

表1 E-cadherin表达与乳腺叶状肿瘤病理学特征参数的关系

2.3 E-cadherin蛋白表达与临床特征及Ki-67表达的相关性 E-cadherin蛋白的表达与PTs患者年龄、肿瘤大小、间质细胞及上皮细胞Ki-67的表达无相关性(r分别=－0.27、0.248、－0.208、－0.102，P均＞0.05)。

3 讨论

E-cadherin主要参与细胞的黏附作用，被认为是一种重要的抑癌基因。乳腺癌等许多上皮来源的肿瘤都有E-cadherin的缺失［1］。与上皮性肿瘤不同，本组实验发现，E-cadherin在PTs的上皮成分中高表达，而在间质细胞中不表达。另外，E-cadherin的表达随着间质细胞密度的增加而减少;E-cadherin的表达与患者年龄、肿瘤大小及边界、组织学分级、细胞生长过度及异型性、核分裂象及Ki-67的表达无关。以往人们认为上皮成分不影响叶状肿瘤的形成和发展。然而，从以上研究结果可以看出叶状肿瘤的上皮成分与间质成分存在着一定的关联，且这种关联对叶状肿瘤的发展可能有重要作用。

叶状肿瘤的上皮成分和间质成分都参与PTs的形成，且上皮成分参与间质的生长。上皮蛋白的表达与间质特征的关系表明这两种成分之间是相互关联的［2～4］。Wnt信号通路可能是上皮—间质之间相互作用的重要通路［5］。Wnt通路中的许多蛋白，如上皮 Wnt5A、间质 SFRP4等在 PTs中都有过表达［6］。Wnt通路也能影响依赖E-cadherin的细胞黏附，Wnt通路能影响PTs上皮成分中E-cadherin的表达［7］。由此推测E-cadherin在PTs上皮成分中的变化可能与其间质特征相关。

然而，除抑癌基因作用外，E-cadherin还可能作为原癌基因发挥作用。胞质内E-cadherin的裂解片段及其向核内的迁移已经表明，E-cadherin能促进Cyclin D1等目标基因的转录［8，9］。另外，E-cadherin也能参与细胞内信号转导［10，11］。根据以上推测E-cadherin可能通过以上机制促进PTs恶性转化，但本研究结果显示，E-cadherin在叶状肿瘤中充当着类似抑癌基因的角色，这需要今后在细胞及基因水平进一步研究证实。

PTs中上皮性E-cadherin的表达也可能是由于Wnt成分的改变所引起的。这种作用更可能通过非经典型Wnt通路而不是经典型Wnt通路产生的，尽管两种通路都与E-cadherin介导的黏附作用有关。β-catenin是经典型Wnt通路中的关键因子，能调节E-cadherin阻遏蛋白的表达。相反，E-cadherin复合物能调控β-catenin介导的经典型Wnt通路。许多上皮性肿瘤中都能发现经典型Wnt信号通路的激活与E-cadherin表达的下降同时发生。Wnt蛋白通过钙流入激活非经典型Wnt通路［12］。作为钙依赖性黏附分子，E-cadherin与非经典型Wnt通路有关。Wnt5A是非经典型Wnt通路中的一个因子，能够促进 E-cadherin介导的细胞黏附［13］。Wnt5A与E-cadherin的表达在肝癌及乳腺癌中都呈正相关［14］。除Wnt5A外，Wnt信号通路的其他成员，如SFRPs也能增加E-cadherin的表达。SFRP4在PTs的间质成分中表达异常［5］。

PTs与纤维腺瘤有时在形态学上难以鉴别，这两者在发生、发展过程中有着一定的联系，有着相同的起源但不同的分化方向。目前，研究更倾向于上皮成分与间质成分互相作用的模式参与PT的起源［15］。本研究结果表明，E-cadherin在乳腺纤维腺瘤上皮成分中的表达比乳腺叶状肿瘤上皮成分中更高，这可能对我们鉴别这两者有一定的作用。E-cadherin在上皮成分中表达不够高时，我们更倾向于诊断叶状肿瘤。另外，E-cadherin在良性叶状肿瘤上皮成分中的表达水平随着间质细胞密度的增加而减少，这提示，E-cadherin在叶状肿瘤间质细胞生长的过程中可能起着抑制作用，可通过后续研究进一步证实。

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