黄满英，付　云，刘　瑜

(1．安徽省合肥市第二人民医院口腔科，安徽 合肥　230011；

2.中山大学光华口腔医学院附属口腔医院牙周科，广东 广州　510055)



唾液β-葡萄糖醛酸苷酶与慢性牙周炎相关性研究

黄满英1，付云2，刘瑜1

(1．安徽省合肥市第二人民医院口腔科，安徽 合肥230011；

2.中山大学光华口腔医学院附属口腔医院牙周科，广东 广州510055)

摘要：目的检测慢性牙周炎患者唾液β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase，β-G)水平，并与治疗后及健康人群对照，以期明确β-G与慢性牙周炎的关系，为牙周炎诊断及疗效监测提供有效参考。方法选择18名慢性牙周炎患者，采集牙周基础治疗前及治疗后全唾液并记录牙周临床指数；检测全唾液中β-G(比色法)水平，并分析与牙周临床参数之间的相关性。结果(1)基础治疗后，牙周临床参数改善明显(P<0.05)；(2)治疗前实验组唾液β-G活性水平(2.845±0.72，10-3U·mL-1)与健康对照组(2.24±0.31，10-3U·mL-1)差异有显著性(P<0.05)，与平均牙周袋深度(r=0.485)、深袋数(r=0.540)、深袋构成比(r=0.598)之间明显相关(P<0.05)；治疗后β-G酶活性水平(2.18±0.71，10-3U·mL-1)明显下调(P<0.05)，与对照组差异无显著性(P>0.05)。结论唾液β-G活性水平能在一定程度上反映当前牙周炎状态及控制程度，该指标可为牙周炎诊断和疗效监测提供参考。

关键词：β-葡萄糖醛酸苷酶；慢性牙周炎；唾液

牙周炎是由牙周病原菌和宿主免疫机制及环境因素之间通过复杂的相互作用造成组织损害的炎性疾病。其特征性表现是免疫细胞与炎症因子在牙周组织中聚集以及牙周支持组织丧失。流行病学调查显示牙周病发病率在中年人人群中约23.2%，老年人人群中约37.4%。

牙周病诊断技术包括临床检查、放射检查、细菌学检查、基因检查和生化检查等。生化检查的标本主要包括唾液、龈沟液和血液，唾液标本因收集简便、无创，处理方法简单，更适合作为椅旁快速诊断或大范围流行病学研究[1]。Hady Haririan等用PCR方法检测侵袭性牙周炎和慢性牙周炎患者唾液标本和龈下菌斑标本中的细菌，两种标本细菌检出率无统计学差异[2]，说明唾液标本与龈沟液标本同样具有研究意义。同时全唾液成分包括宿主来源的蛋白、宿主细胞、激素(皮质醇)、细菌以及细菌产物、离子和挥发性气体，这些物质不仅包含牙周局部信息还能传递系统信息，而牙周炎与全身状况密切相关，通过对唾液成分的分析和研究有可能揭示其所表达的各种信息，从而有助于对疾病做出更全面客观的诊断。

本研究通过检测牙周炎患者全唾液β-G治疗前、后水平，以及其与牙周临床参数间的相关性，并与牙周健康对照组比较，以期明确β-G与牙周炎临床状态的关系，为牙周炎诊断、疗效监测及预后评估提供依据。

1资料和方法

1.1研究对象实验组：选取某口腔医院牙周科就诊患者18名(男12名，女6名)，年龄24～48岁，平均年龄(35.11±7.27)岁。纳入标准[3]：(1)明确诊断为慢性牙周炎者，诊断标准见《牙周病学》(曹采芳 主编.2版.北京:人民卫生出版社)；(2)口腔内无未充填活动性龋齿，缺失牙数小于5颗(不含第三磨牙)；(3)无口腔黏膜疾病，无根尖瘘管；(4)无遗传性疾病及全身系统疾病；(5)3个月内无使用抗生素及免疫抑制剂；(6)近2年内无牙周治疗史；(7)无重度吸烟史、非妊娠者。 对照组8名(男4名，女4名)，年龄26～44岁，平均年龄(34.75±6.56)岁。牙列完整，无附着丧失，牙龈色、形、质正常，并符合(2)～(7)标准。

1.2实验仪器和试剂(1)Florida 牙周探针(Florida Probe，USA)；(2)多功能P5超声波牙科治疗仪(Suprasson，France )；(3)Gracey刮治器 (Densplay，USA)；(4)内源性β-葡萄糖醛酸苷酶测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)；(5) TECAN酶标仪(TECAN，Swiss Confederation)；(6)Biofuge Stratos高速离心机 (Sorvall，Germany)。

1.3实验方法

1.3.1唾液标本的采集[4]所选实验对象进行全口龈上洁治抛光，双氧水冲洗牙周袋，口腔卫生宣教，预约一周后复诊。复诊时间定于上午9：00～11：00，采集前禁食1 h，并以蒸馏水含漱2次。每5 min轻吐唾液至无菌收集管，此过程避免吮吸，血污染样品弃去，重新采集。5 mL无菌注射器收集1.5 mL清亮液体至无菌EP管，-20℃保存，3 h内转移至实验室，-80℃冻存，待测。基础治疗后一月复诊，唾液采集过程同上。

1.3.2牙周临床参数检查采用Florida探针，记录观察全口牙近颊、颊侧、远颊、近舌、舌侧、远舌6个位点探诊深度(probing depth，PD)、附着丧失(clinical attachment loss，CAL)及探诊出血(bleeding on probing，BOP)，以SBOP(+)表示探诊出血阳性位点数，PD≤4 mm为浅袋，46 mm为深袋。

1.3.3牙周基础治疗继唾液标本采集、牙周临床检查后，P5超声龈下工作尖+Gracey刮治器全口分区局麻下刮治、根面平整，双氧水冲洗，术后不予抗生素辅助治疗。

1.3.4唾液β-G检测唾液标本-20℃、4℃逐步解冻，10 000×g低温离心10 min，取上清0.05 mL。根据内源性β-葡萄糖醛酸苷酶测定试剂盒(南京建成生物研究所)提供实验步骤加样(比色法)，37℃避光反应1 h，加终止液，3 500×g离心10 min，540 nm紫外光、1 cm光径蒸馏水调零，测定各管吸光度(OD)值。以0.05 mL双蒸水为空白对照，1 mmol·L-1酚酞标准液为标准管，同样测OD值。以37℃条件下，每分钟能催化生成1 μmol·L-1酚酞的酶量为一个活性单位(U)，如公式(1)所示。

(1)

2结果

2.1实验组治疗前后牙周临床参数比较如表1所示，平均探诊深度、平均附着丧失、探诊出血位点构成比、深袋构成比、中袋构成比经配对t检验分析，与初诊水平差异有显著性。其中牙周袋构成比变化差异大，深袋构成比从(11.76±10.72)%减少至(2.78±3.22)%，中袋构成比从(27.06±10.04)%减少至(13.20±8.28)%，如图1所示。

表1　基础治疗前、后牙周临床参数比较

2.2唾液β-G活性水平组间比较牙周炎患者治疗前唾液中β-G活性水平(2.85±0.72)10-5U·L-1高于健康对照组(2.24±0.31)10-5U·L-1、，差异有显著性(P<0.05)；治疗后β-G活性水平(2.18±0.71)10-5U·L-1与治疗前相比显著下调(P<0.05)，与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)。

如图2所示，β-G活性水平95%置信区间组间比较，实验组治疗前(2.49～3.20，10-5U·L-1)明显高于对照组(1.99～2.50，10-5U·L-1)，与对照组仅有极小部分重叠，治疗后β-G活性水平95%置信区间(1.78～2.57，10-5U·L-1)完全包括对照组β-G活性范围。

图1基础治疗前、后牙周袋分布比较

图2唾液β-G活性95%置信区间组间比较

2.3唾液β-G活性水平与牙周临床参数相关性如表2所示，唾液β-G活性水平与牙周临床参数相关性分析显示：实验组治疗前β-G活性水平与平均探诊深度(MPD)、深袋数、深袋构成比显著相关，与其他牙周临床参数不相关；基础治疗后，唾液β-G活性与牙周临床参数均不相关。

牙周基础治疗后，唾液β-G下调量与MPD减小量明显相关(r=0.621，P=0.013)。

表2　唾液β-G活性与牙周临床参数相关分析(r值)

注：*P<0.05。

3讨论

牙周病的主要发病机制是牙周菌斑内有关致病菌产生的可溶性物质直接毒害组织细胞，或破坏细胞间质以及激活宿主的炎性反应和免疫反应，在此过程中会产生大量的超氧化物、酶类或其他免疫因子。多项研究发现牙周炎患者唾液或龈沟液中酶的活性与牙周组织破坏程度相关[5-6]，而β-G作为溶酶体释放的内源性水解酶，主要参与细胞外基质以及基底膜蛋白多糖类物质的降解，在牙周炎发生发展中起着举足轻重的作用，有研究表明，慢性牙周炎和牙龈炎患者外周血白细胞在细菌抗原刺激下β-G的活性明显增强[7]，并且1-型糖尿病伴牙周炎患者外周血白细胞在外界抗原刺激下β-G活性比单纯牙周炎患者β-G活性强[8]。细胞体外实验研究表明，细菌脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)能抑制细胞有氧呼吸，导致乳酸释放，改变局部pH值，从而增强β-G活性[9]。以上研究表明，β-G活性与局部环境中细菌量和细菌毒力密切相关，同时与机体对抗原免疫反应的强度相关。

本实验中，牙周炎患者唾液β-G活性水平与牙周健康者相比明显升高，治疗后β-G活性下调，且牙周炎控制水平与β-G活性下调程度正相关。支持Zambon等关于慢性牙周炎患者唾液β-G活性的研究结果[10-12]，同时与慢性牙周炎患者龈沟液β-G活性的研究结果[13-14]也一致。以上结果表明，无论在唾液标本还是龈沟液标本中，β-G活性与当前牙周状态密切相关，是牙周炎发展和控制与否的指示性物质。

通过对组间β-G活性水平比较还发现：实验组治疗前唾液β-G 活性95%置信区间(2.49～3.20，10-5U·L-1)与对照组(1.99～2.50，10-5U·L-1)差异显著，仅存在极小部分重叠(图2)。Zambon等[10]对380名牙周炎患者唾液β-G活性水平研究发现：当以40 IU/50 μL-1为临界点时，对牙周炎(至少4个位点PD≥5 mm)诊断敏感性达91.3%，以100 IU/50 μL-1为临界点时，对牙周炎诊断特异性达84.9%。因此推测：可通过确定某一界限范围将唾液β-G活性作为牙周炎初步筛查和大范围人群普查的指标之一。但如何确定这一临界点尚需要进一步大样本量的研究。

本实验中治疗前β-G与平均袋深、深袋位点数、深袋百分比相关(表2)。支持Lamster等[9]研究结论，该实验中唾液β-G活性与平均探诊深度和深袋(PD ≥5 mm)位点数显著相关，当唾液中β-G活性≥100 IU时，其有4个位点深袋的风险值是3.77。同时，Ishisaka等[8]发现外周血白细胞β-G活性与牙周临床参数也相关，进一步表明β-G与牙周炎当前炎症程度相关，是牙周炎发展的指示性物质。

本研究结果提示：唾液β-G活性水平能在一定程度上反映当前牙周炎状态及炎症控制程度，该指标可为牙周炎诊断和疗效监测提供有效参考，但具体活性值以及在何种标本中更能真切反应牙周状态尚待进一步研究。

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Study of the correlation between salivary levels of

β-G and chronic periodontitis

HUANG Man-ying1,FU Yun2,LIU Yu1

(1.DepartmentofStomatology,TheSecondPeople'sHospitalofHefei,Hefei230011,China;

2.DepartmentofPeriodontology,TheAffiliatedStomatologicalHospitalofGuanghuaSchool

ofDentistry,ZhongshanUniversity,Guangzhou510055,China)

Abstract:ObjectiveThe aims of study were to investigate the changes of the salivary levels ofβ-G in patients with chronic periodontitis before and after initial periodontal therapy,and evaluate the relationship between the content of the enzyme and periodontal clinical parameters.MethodsEighteen patients with moderate to severe chronic periodontitis were selected.They first underwent supragingival scaling and oral health instruction (OHI).A week later,non-stimulated whole saliva was collected and periodontal clinical parameters were examined and the patients were treated with subgingival scaling and root planning.The salivaryβ-G was examined by flourometric assay.A month later,the salivary levels of β-G were reevaluated.ttest was used to analyze the differences of salivary enzymes levels and periodontal parameters before and after initial periodontal therapy; pearson correlation was used to analyze the correlation between the levels of enzymes and periodontal parameters.Results(1) The changes in the clinical periodontal variables were significant following initial periodontal therapy;(2) At baseline,the salivaryβ-G activity of chronic periodontitis patients was statistically higher than that of controls (P<0.05),and correlated significantly with mean probing depth (MPD) and the number of sites with probing depth ≥6 mm.Following initial periodontal therapy,the salivaryβ-G activity decreased significantly.Conclusion The salivary β-G activity could be a reflection of current status of chronic periodontitis.The detection of the enzyme may therefore aid clinician in the diagnosis and therapeutic evaluation of the disease.

Key words:β-glucuronidase (β-G);saliva;chronic periodontitis

(收稿日期：2014-05-21，修回日期：2014-09-11)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.02.041