毛倩倩，卜　宾，唐青海，阚云超，姚伦广，唐存多，焦铸锦，杨建伟（南阳师范学院南阳市兽医生物工程技术研究中心河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室/昆虫生物反应器河南省工程实验室，河南南阳473061）



犬细小病毒NY株VP2蛋白的原核表达及反应原性鉴定

毛倩倩，卜宾，唐青海＊，阚云超，姚伦广，唐存多，焦铸锦，杨建伟＊
（南阳师范学院南阳市兽医生物工程技术研究中心河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室/昆虫生物反应器河南省工程实验室，河南南阳473061）

摘 要：犬细小病毒（CPV）编码的VP2基因容易发生变异，导致病毒嗜性和致病性的改变。为制备一株高致病性的CPV毒株（NY株，基因型为2a型）重组VP2蛋白，构建重组原核表达载体pET28a-CPVVP2，转化E.coli BL21（DE3）表达菌株，通过不同温度、不同IPTG浓度和不同诱导时间等条件的优化进行表达蛋白，采用SDS-PAGE和Western blot进行蛋白鉴定。结果表明，重组CPV-NY毒株VP2蛋白（rVP2）的分子质量约为72ku，在不同温度条件下均以包涵体形式存在，在37℃条件下以终浓度为0.2 mmoL/L IPTG诱导4h表达量达到最高。rVP2不仅与His标签mAb反应，也能与CPV特异性阳性血清反应，说明rVP2具有良好的反应原性，为CPV抗体检测试剂盒和基因工程疫苗的研究奠定了基础。

关键词：犬细小病毒NY株；VP2；原核表达；鉴定

犬细小病毒病以出血性肠炎、剧烈呕吐、白细胞减少及心肌炎为主要特征［1］，该病发病率高，传染性强，病死率高，成为危害犬和猫健康的重要传染病之一［2-3］。该病的病原是犬细小病毒（Canine parvovirus，CPV），该病毒属于细小病毒科（Pavoviridae），细小病毒属（Pavovirus）。该病毒基因组为单股、负链、线形DNA，全长5 323bp，编码3个结构蛋白VP1、VP2和VP3，其中，VP2基因全长1 755bp，编码584aa［4-5］。……