张延萍 牛睿祺 周冬菊

（河南科技大学化工与制药学院 河南洛阳 471023）

制药工程专业实验开发
——鞣质的提取与含量测定

张延萍 牛睿祺 周冬菊

（河南科技大学化工与制药学院 河南洛阳 471023）

以杠板归为原料，70%丙酮提取，采用磷钼钨酸-干酪素比色法测定鞣质含量。在磷钼钨酸溶液的配制过程中，使用溴水替代液溴；在含量测定时，使用26%碳酸钠溶液替代29%碳酸钠溶液。通过本实验教学改革，为制药工程专业提供一个新的实验项目。

杠板归 磷钼钨酸-干酪素 鞣质 制药工程实验

教改实验在深化教育改革、全面提高教育质量方面起着至关重要的作用，受到教育界的高度重视。开发新的实验项目或新的试验方法是很有必要的［1］。

鞣质是植物的次生代谢产物，广泛存在于植物界中，据统计约70%以上的生药中含有鞣质类成分。在医药领域，最初鞣质成分被认为仅有收敛及蛋白质凝固作用，临床用于止血，止泻及抗菌抗病毒［2］。近30年，由于新技术，新方法的应用，鞣质的研究取得重大进展，还发现其具有抗突变、抗脂质过氧化、清除自由基、抗肿瘤、抗艾滋病与降血糖等多种药理活性［3］。尤其在抗肿瘤治疗中显示出了诱人的前景。

在制药工程专业实验中，涉及的天然产物成分有黄酮、生物碱、香豆素、多糖、挥发油等，鞣质未有涉及［4］，本研究旨在开发切实可行、操作简便的学生实验。

一、实验部分

1.实验目的

1.1 掌握标准曲线的绘制方法

1.2 掌握磷钼钨酸-干酪素法测定鞣质含量的原理及方法

2.实验原理

鞣质，是存在于植物体内的一类结构比较复杂的多元酚类化合物。其理化性质如下：

2.1 物理性质

2.1.1 性状：鞣质多为无定形粉末，呈米黄色、棕色、褐色等，具有吸湿性（很难结晶）。

2.1.2 溶解性：鞣质具有较强的极性，溶于水、甲醇、乙醇、丙酮等亲水性溶剂，可溶于乙酸乙酯、乙醚同乙醇混合物，难溶或不溶于无水乙醚、无水氯仿等亲油性溶剂

2.2 化学性质

2.2.1 还原性：易被氧化，具有较强的还原性，可以与菲林试剂及福林试剂反应。

2.2.2 与蛋白质作用：可与蛋白质结合生成不溶于水的复合物沉淀。利用此性质，可使兽皮的蛋白质形成致密、柔韧、难以透水的皮革。

2.2.3 与三氯化铁作用：鞣质的水溶液可与三氯化铁作用呈蓝黑色或绿黑色。蓝黑墨水的制造就是利用鞣质的这一性质。

2.2.4 与生物碱作用：因具有酸性，可与生物碱结合生成难溶于水的沉淀。

2.2.5 与铁氰化钾的氨溶液作用：鞣质的水溶液与铁氰化钾氨溶液反应呈深红色，并很快变成棕色［5］。

鞣质的量=总多酚-不被吸附的多酚

2.3 主要仪器

中草药粉碎机、50目筛、恒温水浴锅、UV1200型紫外可见分光光度计、万分之一天平、百分之一电子天平、棕色容量瓶（250mL×1个，50mL×1个，25mL×6个）、白色容量瓶（1000mL×1个）、圆底烧瓶（1000mL×1个，100mL×1个）、冷凝管、移液管（10mL×1个，5mL×7个，1mL×2）个，100mL量筒、烧杯（1000mL×1个，200mL×1个，50mL×2个）、100mL具塞锥形瓶、三角漏斗、布氏漏斗和1000mL抽滤瓶。

2.4 试剂

丙酮、钨酸钠、钼酸钠、硫酸锂、盐酸、磷酸、溴水、三氯化铝（结晶）、结晶乙酸钠、甲醇、无水碳酸钠均为分析纯；干酪素（生化试剂）；没食子酸对照品（中国药品生物制品鉴定所）；市售杠板归药材。

2.5 溶液的配制

2.5.1 对照品溶液的制备

精密称取没食子酸对照品25mg，置50mL棕色容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取5mL，置50mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.05mg·mL-1的对照品溶液。

2.6 标准曲线绘制

精密量取浓度为0.05mg·mL-1的没食子酸对照品溶液1、1.5、2、2.5、3mL，分别置于25ml棕色容量瓶中，各加入磷钼钨酸试液1mL，再分别加入水11、10.5、10、9.5、9mL，用26%（质量/体积）碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，常温放置30min，同时以相应的试剂为空白，在760nm处测定吸光度。以没食子酸溶液浓度为纵坐标，以吸光度为横坐标，绘制标准曲线。

2.7 鞣质含量测定

2.7.1 总酚测定方法

精密量取0.5mL供试品溶液，置于25mL棕色容量瓶中，各加磷钼钨酸试液1mL，再分别加水11.5mL，用26%碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，常温放置30min，同时以相应的试剂为空白，在760nm处测定吸光度。计算总酚含量。

二、结果与讨论

1.溶液的制备

磷钼钨酸试液药典采用加0.2ml液溴煮沸［6］，溶液由墨绿色转为鹅黄色，由于液溴容易挥发并且毒性较大，本实验采用20ml溴水替代，可以达到满意效果。如放置后变为绿色，可加溴水适量，煮沸出去多余的溴即可。

2.标准曲线的绘制

以吸光度为横坐标，以没食子酸浓度（mg·ml-1）为纵坐标，绘制标准曲线，经回归分析，回归方程为：C=0.009A-0.001，r=0.999，没食子酸在0.001～0.006 mg·ml-1范围内有良好的线性关系。在溶液配的准，仪器稳定的情况下，此法相关系数可以达到三个9以上。

三、结语

本实验通过70%丙酮提取，磷钼钨酸-干酪素比色法测定杠板归中鞣质含量。磷钼钨酸溶液配制时，采用溴水代替液溴；含量测定时采用26%碳酸钠溶液代替29%碳酸钠溶液。实验操作简便可行，可以让学生掌握鞣质的理化性质、掌握标准曲线的绘制及紫外分光光度计的使用。此实验试剂简单易得，是适合制药工程专业实验的综合实验项目。

［1］雷解民，陈国先.对教改实验复杂性和方法论的思考［J］.中国教育学刊，2001，5:47-51

［2］杜国成.中药鞣质成分的药理作用探析［J］.中国医药科学，2011，1（16）:27，28

［3］于占洋，金哲雄.鞣质抗氧化作用研究进展 ［J］.黑龙江医药，2014，1（26）:985，986

［4］天津大学等编.制药工程专业实验指导 ［M］.北京:化学工业出版社，2005.

［5］匡海学主编.中药化学 ［M］.北京:中国中医药出版社，2011:337-338

［6］国家药典委员会.中华人民共和国药典 ［M］.一部.北京:化学工业出版社，2005:

张延萍，女，1974年生，博士，副教授，河南科技大学制药工程系主任，副主编出版《伏牛山药用植物志》系列著作。

本研究获河南科技大学实验开发基金资助，项目号：SY1213027