张玉昆

北京大学深圳医院呼吸内科，广东深圳 518000

支气管哮喘（bronchial asthma）是由多种细胞和细胞组成成分参与的气道慢性炎症性疾病。目前哮喘机制尚不完全清楚，其病因复杂，研究显示，支气管哮喘与感染、免疫、遗传及环境等多种因素有关[1-2]。其中免疫功能起着关键性作用，深入探讨哮喘的发病机制，寻找更有效的治疗方法控制哮喘的发生发展尤其是支气管哮喘的急性发作期具有重要的临床意义[3]。本研究通过建立小鼠动物哮喘模型，为临床诊治哮喘急性发作提供理论依据，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2013 年1 ～9 月选取广州医科大学SPF 动物实验中心提供雌性昆明小鼠45 只作为研究对象，均为周龄为4 ～6 周、体重18 ～22g 的健康清洁级小鼠。

1.2 方法

将上述小鼠置于同一清洁饲养室内，通风良好，室温18 ～22℃，湿度60%～70%，饲养3d 后，随机分为三组：急性哮喘发作组、慢性哮喘组和正常组，按照实验流程，哮喘发作组、慢性哮喘组分别于0、14d 将20μg 卵蛋白+150μL 氢氧化铝+50μL 生理盐水混悬液行腹腔注射致敏；2ld 起，哮喘发作组将小鼠置于5L 的密闭容器中，给予超声雾化器雾化（2%卵蛋白+生理盐水40mL）每天1 次，每次持续约30min，出现哮喘样发作为止，连续6d。于28d 将哮喘发作组小鼠处死。慢性哮喘组于30d 起，给予同样剂量的方法雾化吸入，每天1次，每次持续约10min，持续10d；正常组仅给予等量生理盐水进行腹腔注射及雾化。于40d 将慢性哮喘组和正常组的小鼠处死。

将小鼠眼球取血，每只采血约1 ～1.5mL，离心后取上层血清，拟行IL-17 和IgE 测定。小鼠血清IL-17 的测定严格按照酶联免疫试剂盒的说明书进行，IgE 测定按照特定的蛋白仪进行。将小鼠颈椎脱位处死，暴露气管，进行支气管肺泡灌洗，将灌洗液用双层无菌纱布过滤后进行离心处理，取细胞沉渣进行细胞分类计数。将细胞沉渣HE 染色后，光学显微镜下进行细胞分类计数，计算出嗜酸性粒细胞（ESO%）及中性粒细胞所占百分比（NE%）。

表1 各组小鼠血清IL-17和IgE水平的比较（）

表1 各组小鼠血清IL-17和IgE水平的比较（）

注：*示①组与②组比较；▲示②与③比较；●示③和①比较，P ＜0.05

组别 IL-17（ng/mL） t P IgE（ng/mL） t P①急性发作组* 21.26±3.60 4.5727 ＜0.05 7.95±1.06 3.2160 ＜0.05②慢性组▲ 15.51±3.28 2.3545 ＜0.05 6.57±1.28 3.0969 ＜0.05③正常组● 12.82±2.97 7.0041 ＜0.05 5.21±1.12 6.8816 ＜0.05 F 4.2691 3.7856 P ＜0.05 ＜0.05

表2 各组小鼠支气管肺泡灌洗中ESO%和NE%水平的比较（）

表2 各组小鼠支气管肺泡灌洗中ESO%和NE%水平的比较（）

注：*示①组与②组比较；▲示②与③比较；●示③和①比较，P ＜0.05

组别 ESO% t P NE% t P①急性发作组* 18.65±2.26 8.7914 ＜0.05 18.75±3.59 4.3453 ＜0.05②慢性组▲ 9.25±3.47 4.2282 ＜0.05 11.98±4.85 2.8841 ＜0.05③正常组● 4.85±2.05 17.5165 ＜0.05 7.85±2.69 9.4104 ＜0.05 F 7.859 6.2510 P ＜0.05 ＜0.05

1.3 统计学方法

应用SPSS18.0 统计软件进行数据分析，计量资料用（）表示，两样本均数的比较采用t 检验，多样本均数的比较采用方差分析，以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组小鼠血清IL-17和IgE水平的比较

急性哮喘发作组、慢性哮喘组和正常组血清中IL-17 和IgE 水平进行比较，其中急性哮喘发作组血清中IL-17 和IgE 水平最高，三组间进行方差分析及组间进行比较，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表1。

2.2 各组小鼠支气管肺泡灌洗中ESO%和NE%水平的比较

急性哮喘发作组、慢性哮喘组和正常组支气管肺泡灌洗中ESO%和NE%水平的进行比较，三组间进行方差分析及组间进行比较，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表2。

3 讨论

支气管哮喘是一种常见气道的慢性炎症，可以控制但不可以治愈。每年约25 万人死于哮喘[4]。研究显示，免疫功能的改变在哮喘的发生发展过程中起着重要的作用[5-6]。IL-17 是一种强大的前炎症细胞因子，人体内IL-17 主要由外周血CD4+T 细胞产生，包括155 个氨基酸残基，为同源二聚体蛋白。IL-17 与多种细胞因子协同作用起到放大哮喘的炎症反应[7]。IL-17 可以诱导气道平滑肌细胞及上皮细胞表达多种细胞因子，这些炎症细胞相互作用又可以分泌多种细胞因子，共同催化多种细胞在气道内浸润，构成一个复杂的网络。在这个网络中，IL-17 扮演了重要的角色[8-9]。研究还显示，哮喘发作时IgE 水平升高，IgE 主要由B 淋巴细胞产生，哮喘患者体内的B 淋巴细胞处于高激活状态，IgE 的合成增加也是哮喘发作的关键之一，但目前IgE 合成增加的具体机制还需要进一步研究[10-11]。

本研究通过检测哮喘小鼠血清IL-17 及IgE 的水平及小鼠肺泡灌洗液中细胞分类的变化的分析，结果显示，在哮喘急性发作期，血清中IL-17 和IgE水平及支气管肺泡灌洗中ESO%和NE%水平均较高，提示IL-17、IgE、ESO、NE 均参与哮喘的发生发展，并在一定程度上反映哮喘的严重程度。与相关研究结果一致[12-13]。由于目前临床治疗哮喘只能控制哮喘的症状，不能从根本上治疗哮喘，因此，我们可以考虑从上游阻断哮喘的炎症反应，如通过抑制IL-17 及IgE 的产生，可以达到治疗哮喘并控制其发作的目的。从而为临床防治哮喘提供新的方法和思路。

综上所述，IL-17、IgE、ESO、NE 均参与的哮喘的发生发展，并在一定程度上反映哮喘的严重程度。尽管哮喘的发病机制目前尚未完全明确，通过本研究，有望今后为哮喘的防治提供新的思路及方法。

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