黄穗华 蒋 玲 邓杰方

广东医学院附属西乡人民医院呼吸内科，广东深圳 518101

淋巴管转移是影响非小细胞肺癌（nonsmallcell lung cancer，NSCLC）患者预后的主要原因[1]。现有研究表明血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial cell growth factor C，VEGF-C）参与了肿瘤淋巴管生成和转移过程[2-3]。探讨NSCLC 患者VEGF-C 表达及其与微血管密度和淋巴结转移的关系对于指导NSCLC 治疗和预后具有重要的价值[4]。本研究探讨了NSCLC 患者VEGF-C 蛋白表达与淋巴管内皮透明质酸受体-1（LYVE-1）标记的微淋巴管密度（Lymphatic microvessel density，LMVD）和淋巴结转移的关系，有关结果如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2013 年5 月～2014 年10 月在我院确诊并经手术治疗的NSCLC 患者共58 例为病变组。纳入标准：病理学检测确诊；接受淋巴结转移分析；对本研究知情同意。其中男41 例（70.69%），女17例（29.31%），年 龄36 ～74 岁，平 均（57.6±8.8）岁；TNM 分 期：Ⅰ期 12 例（20.69%），Ⅱ期23例（39.66%），Ⅲ 期20 例（34.48%），Ⅳ 期3 例（5.17%）；33 例淋巴结转移（56.90%），25 例未见转移（43.10%）。选择同期在我院接受检查和治疗的肺良性病变患者共12 例为良性组，男8 例（66.67%），女4 例（33.33%）；年龄35 ～75 岁，平均（58.2±8.5）岁；肺大疱4 例（33.33%），肺错构瘤3 例（25.00%），肺外伤5 例（41.67%）。

1.2 免疫组化染色

10%甲醛固定并常规石蜡包埋病变组织，行5μm 连续切片，进行HE 及免疫组织化学染色。美国R&D 公司提供VEGF-C、LYVE-1 单克隆抗体。免疫组化试剂盒（北京中衫公司提供）测定VEGF-C、LYVE-1 表达水平。LYVE-1 和 VEGF-C石蜡切片分别采柠檬酸缓冲液以及EDTA 缓冲液进行高温修复。DAB 显色，苏木精复染。

1.3 结果判定

（1）VEGF-C 蛋白表达判定。采用Mattern法，结合细胞染色强度和染色细胞所占面积进行积分判定。根据染色强度，赋分分别为：不染色（0分）、轻度染色（1 分）、中度染色（2 分）、强染色（3分）。根据染色面积，赋分分别为：无细胞染色（0分）、＜25%细胞染色（1 分）、25%～50%细胞染色（2 分）、＞50%细胞染色（3 分）。两种积分之和＞2 分者定为表达阳性；≤2 定为表达阴性。（2）LMVD 计数采用Wendner 方法进行。在低倍镜下对整个切片进行分析，寻找淋巴血管密集。接着在高倍镜下对染色的淋巴血管计数。4 个视野平均值即为LMVD。

1.4 统计学方法

所有数据采用SPSS13.0 进行分析。计数资料进行x2检验，计量资料比较采用t 检验，P ＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 VEGF-C、LYVE-1在病变组织的表达情况

HE 染色示：病变组VEGF-C 蛋白表达阳性45 例，阳性率为77.59%（45/58），良性组阳性率为25.00%（3/12），两组VEGF-C 阳性率差异有统计学意义（P ＜0.05）。两组LYVE-1 在组织中均呈阳性。病变组LMVD 较肺良性组明显增多，差异有统计学意义（t=9.672，P ＜0.05）。见表1、图1。

表1 NSCLC组织与肺良性病变组织LMVD比较

图1 VEGF 在NSCLC 组织中的表达（免疫组化×100）

2.2 VEGF-C表达与LYVE-1 标记淋巴管密度的关系

VEGF-C 表 达 阳 性 组 织LMVD 为（12.73±2.41）个/HP×200，显著高于阴性组织，差异有统计学意义（t=4.748，P ＜0.05）。Pearson 相关分析表明VEGF-C 阳性表达与LMVD 有显著相关性（r=0.734，P ＜0.05）。见表2。

表2 VEGF-C蛋白表达与淋巴管密度的关系

2.3 VEGF-C表达与淋巴结转移、PTNM 分期的关系

有淋巴结转移NSCLC 患者VEGF-C 阳性率为96.00%，PTNM Ⅲ+Ⅳ期阳性率为100.00%，显著高于无淋巴结转移者和PTNM Ⅰ+Ⅱ期者（x2=8.567、11.011，P ＜0.05）。Pearson 相关性分析结果表明：VEGF-C 阳性率与淋巴结转移情况和PTNM 分期有显著相关性（r=0.769、0.745，P ＜0.05）。见表3。

3 讨论

NSCLC 患者预后较差，复发率较高[5]。近年来的研究已经表明：淋巴管转移可能是导致NSCLC复发率较高的主要原因[6-8]。淋巴管生成因子可以调控淋巴管生成。淋巴管VEGF-C 与受体结合后，可以激活下游信号通路，促进淋巴管生成[9]。一般情况下，VEGF-C 在人体的表达是受抑制的。但是在病理状态下，肿瘤细胞可以大量分泌VEGF-C，并诱导肿瘤淋巴管形成和转移，促进肿瘤进展[10-11]。因此，探讨VEGF-C 与微血管密度和淋巴结转移的关系对于更好的认识NSCLC、预防NSCLC 复发具有重要的临床意义。从本研究的结果来看，相比于良性病变者，NSCLC 患者VEGF-C 阳性率更高，是良性组的3 倍。研究结果与多数文献报道结论是一致的[12-13]。该结果表明VEGF-C 与NSCLC 的进展存在密切的关系。

表3 VEGF-C表达与淋巴结转移、PTNM 分期的关系[n（%）]

LYVE-1 是一种由322 个氨基酸组成的膜蛋白[14]。由于该蛋白在正常组织和病变组织中均呈阳性，因此可以用作肿瘤组织淋巴血管的特异性标记物。在本组资料中，良性组和病变组LYVE-1 均为阳性表达，也证实了LYVE-1 的特异标记价值。从LMVD 比较来看，病变组中VEGF-C 表达阳性组织的LMVD 为（12.73±2.41）个/HP×200，显著高于阴性组织，差异有统计学意义（t=4.748，P ＜0.05）。Pearson 相关分析表明VEGF-C 阳性表达与LMVD有显著相关性（r=0.734，P ＜0.05）。这一结果VEGF-C与淋巴管形成及转移有密切的关系。关于VEGF-C与淋巴管形成和转移的关系，R.P.Hulse 等[10]认为淋巴管的通透性更强，肿瘤细胞可以从内皮细胞间隙更方便的进入淋巴管，并导致NSCLC 复发。他们的意见是VEGF-C 高表达，让淋巴管增多，为肿瘤进展和复发提供了条件。过江等[11]则认为VEGF-C 本身是一种趋化因子，具有活化淋巴管、诱导淋巴内皮细胞分泌趋化因子及类似物的作用，可以让肿瘤细胞通过间质液被动进入淋巴管，并出现转移。虽然学者们关于VEGF-C 高表达与淋巴管形成和转移的具体机制存在一定的不同，但是都认为VEGF-C 的高表达为淋巴管形成和转移提供了“动力”[1，5，14-16]。本研究还探讨了VEGF-C 表达与淋巴结转移、TNM 分期的相关性。从结果来看，有淋巴结转移、TNM 分期恶性程度越严重NSCLC 患者更容易出现VEGF-C 高表达。VEGF-C 与TNM 分期及淋巴结转移情况有显著的相关性。上述结果表明对于有淋巴结转移以及TNM 分期越严重的患者，在治疗中更要注意术后NSCLC 的复发。

综合本研究的结果，VEGF-C 与淋巴管形成和淋巴结转移有密切的关系，可以调节肿瘤淋巴管形成和转移。基于本研究结果，抑制VEGF-C 分泌或阻断VEGF-C 合成信号，可以有效的改善NSCLC患者治疗和预后，有必要进一步深入探讨VEGF-C在NSCLC 进展、复发以及治疗和预后的价值。

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