郑和平，覃晓琳，黄进梅，薛耀华，白 顺，吕 萍，杨 斌

（广东省皮肤性病防治中心，广东广州510091）

梅毒是由梅毒螺旋体（Tp）感染引起的性传播疾病，病程漫长，早期侵犯生殖器和皮肤，晚期侵犯全身各器官，几乎能累及全身各个脏器，危害极大［1］。Tp潜伏感染时间长，可很长时间无明显临床症状。因此，早期诊断对控制梅毒的传播具有重要意义。目前，诊断Tp感染主要通过血清学方法检测Tp非特异性抗体和特异性抗体。这些试验均采用Tp天然抗原作为诊断抗原，而Tp目前还不能在体外持续培养，从而导致制备天然抗原较困难。因此，多采用基因重组方法制备Tp抗原代替天然抗原以建立酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫印迹法（Western－Blot）检测血清中的抗Tp抗体［2］。目前已重组的Tp抗原有20多种，其中Tp47是Tp外膜脂蛋白［3］，重组Tp47不仅具有高免疫原性，而且能够作为Tp诊断抗原，在梅毒诊断中具有重要意义［4］。本研究利用分子克隆技术获得Tp47重组蛋白，并通过Western－Blot对其免疫反应性进行了研究。

1 材料与方法

1.1 一般资料 Tp Nichols标准株、载体pGEX－6P－1由本院保存，表达宿主菌大肠埃希菌（E.coli）BL21（DE3）购自广州科昂公司。18例不同临床分期梅毒患者阳性血清标本、10例梅毒阴性血清标本为本院临床检测标本。

1.2 试剂 细菌基因组DNA提取试剂盒购自亚能公司；DNA分子标记物、Taq DNA聚合酶、T4连接酶、限制性内切酶、GST纯化柱均购自大连Takara公司；蛋白分子标记物购自Fermentas公司；质粒提取试剂盒、聚合酶链反应（PCR）扩增产物快速胶回收试剂盒和DNA纯化试剂盒购自碧云天公司；异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（IPTG）、氨苄西林购自上海生工生物工程技术有限公司，三羟甲基氨基甲烷（Tris）、十二烷基磺酸钠（SDS）、丙烯酰胺、LB培养基购自Sigma公司。……