补肾中药对H-P-O轴干预的实验研究进展*

2015-01-24杨丽娟周惠芳

中国中医基础医学杂志 2015年3期

关键词：性腺下丘脑垂体

杨丽娟，周惠芳

(1．南京中医药大学，南京 210029;2．云南中医学院，昆明 650200)

补肾中药对H-P-O轴干预的实验研究进展*

杨丽娟1，2，周惠芳1△

(1．南京中医药大学，南京 210029;2．云南中医学院，昆明 650200)

H-P-O性腺轴对女性的月经和生殖有重要影响，近年来关于补肾类中药对性腺轴结构和内分泌功能的研究不断深入。纵观近年来相关实验报道，补肾中药从形态学、内分泌学及神经递质学等方面均对H-P-O性腺轴有改善和保护作用，间接证明了中医肾主生殖理论的科学性及心(脑)-肾-子宫轴与H-P-O性腺轴的相关性，为今后该领域的中西医实验研究提供了思路。

H-P-O性腺轴;补肾中药;实验研究

1977年Besedovsky，HO提出了神经-内分泌-免疫网络调节理论，下丘脑-垂体-性腺轴(HPG轴)是其中重要的组成部分。下丘脑分泌促性腺激素释放激素(GnRH)，在正中隆起处经垂体门脉系统到达垂体前叶，使垂体前叶分泌并释放促卵泡激素(FSH)和黄体生成激素(LH)，促性腺激素调控卵巢的分泌及生殖功能，同时卵巢分泌的性激素又对垂体和下丘脑有反馈调节作用，下丘脑、垂体和卵巢之间相互协调、相互影响，形成完整而又协调的神经内分泌系统，即下丘脑-垂体-卵巢轴(H-P-O axis)［1］。这一性腺轴对女性的月经和生殖有着极其重要的影响，其功能失调常导致月经不调、不孕或流产等。中医认为肾藏精、主生殖，肾气的盛衰与生殖关系密切，肾气盛，天癸至，精血充沛，任通冲盛，才能正常行经，两精相搏才能受孕。诸因损于肾，伤及冲任，可导致肾失封藏、冲任不固，终致不孕或孕后流产。现代药理学认为，补肾中药在激素水平上的调节主要体现在对下丘脑-垂体-性腺轴(H-P-G)的调节，除对促卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)等有明显的调节作用外，还对中枢神经系统有明显的调节作用［2］。目前国内有许多研究者进行了与之相关的临床研究及动物实验研究，现将近年来的研究情况综述如下。

1 补肾类中药对卵巢-子宫的影响

1.1 补肾类中药对性腺靶器官微结构的影响

张森等［3］研究补肾中药淫羊藿苷(ICA)促动物生殖作用，给性成熟雌性大鼠不同剂量的ICA，观察其对大鼠卵巢和子宫质量的影响，并通过组织切片观察其对卵泡发育和子宫发育的影响。结果表明，ICA能提高大鼠卵巢和子宫质量。组织切片显示，ICA能明显促进大鼠卵泡发育。该研究提示，ICA可以促进大鼠卵巢和子宫的发育。周惠芳等［4］观察补肾助孕方对SD大鼠胚胎着床期子宫内膜及卵巢的形态学变化，结果显示中药补肾助孕方中、高剂量组与模型组比较，能明显促进胚胎着床期子宫内膜的生长及子宫内膜腺体的增生和发育，并能促进胚胎着床期卵巢黄体细胞的发育。由此得出中药补肾助孕方通过促进子宫内膜的生长及内膜腺体的发育，使腺体和间质发育同步，促进卵巢黄体细胞的增生和改善黄体细胞的结构，从而提高子宫内膜的容受性及改善黄体功能，有利于胚胎着床和发育。

从上述研究可以看出，补肾类中药有类激素样作用，可以促进性腺器官的发育，增加其质量，在微结构方面促进子宫内膜腺体和卵巢黄体细胞的发育，利于胚胎的着床及发育。

1.2 补肾类中药对性激素分泌的影响

夏天等［5］运用血清药理学方法，观察补肾调冲方对高雄激素培养的大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌功能的影响。结果显示，补肾调冲方含药血清可改善高雄激素对颗粒细胞功能的抑制状态，促进细胞增殖及E2和P的分泌，其作用呈剂量依赖性。并由此推测，补肾调冲方通过促卵泡发育、提高雌孕激素水平、改善雌/雄激素比值来调节卵巢功能。葛翠莲等［6］以未成年雌性大鼠为对象，采用放免法检测补肾健脾方高、中、低剂量组、阳性对照组和空白对照组大鼠血清FSH、LH、E2和P水平;各组大鼠卵巢、子宫称重并作比较，结果显示，补肾健脾方组血清FSH、LH、E2、P水平显著增高，卵巢和子宫质量明显增重。提示该方能提高大鼠生殖激素水平，促进卵巢和子宫的发育，改善卵巢功能以促进排卵，也说明该方对下丘脑-垂体-卵巢轴功能有整体调节作用。

2 补肾类中药对下丘脑-垂体的影响

2.1 补肾类中药对下丘脑-垂体超微结构影响

宋春风等［7］以大量醋酸可的松造成大鼠肾阳虚模型，取其垂体制成超薄切片进行电镜观察。结果显示，肾阳虚大鼠垂体内分泌细胞存在着不同程度的粗面内质网、高尔基体扩张、线粒体空化、细胞变形、核固缩等超微结构损伤。使用益气补肾中药后，减轻肾阳虚大鼠超微结构的损伤，提示益气补肾中药可能通过调节细胞的蛋白质和能量代谢，减轻垂体的超微结构损伤，达到纠正肾阳虚证的效应。钱风雷等［8］以温补肾阳为主、滋补肾阴为辅的补肾中药，观察其对长期大运动量游泳运动所致大鼠低血睾酮和下丘脑-垂体-性腺轴(HPG)功能的调节作用。实验结果表明，下丘脑-垂体-性腺轴调节功能减退是造成运动性低血睾酮的重要原因，而合理采用补肾中药能显著改善运动性低血睾酮大鼠垂体和性腺激素水平，对调节下丘脑-垂体-性腺轴功能和维持性腺轴各级细胞超微结构的正常和完整性有保护作用。

2.2 补肾类中药对下丘脑-垂体蛋白表达及神经递质的影响

陆炜等［9］观察补肾中药对垂体促性腺激素释放激素(GnRH)受体及其基因表达的影响，将SD大鼠(35 d龄，相当于青春启动期)分为对照组、滋阴泻火组和益肾填精组，采用免疫组织化学方法检测GnRH受体的蛋白表达水平，采用原位杂交组织化学方法检测GnRH受体mRNA表达水平。结果显示，给予滋阴泻火中药合剂后，大鼠垂体GnRH受体mRNA表达水平显著下调，GnRH受体蛋白合成减少;而给予益肾填精中药合剂后，大鼠垂体GnRH受体mRNA表达水平显著上调，GnRH受体蛋白合成增多。由此可见，不同补肾中药可通过改变垂体GnRH受体及其mRNA表达水平，调节下丘脑-垂体-性腺轴的功能。张森等［10］通过腺垂体细胞的原代培养技术和半定量RT-PCR技术，观察补肾中药淫羊藿苷对大鼠腺垂体合成分泌GTH的影响，建立了腺垂体细胞总RNA的提取，FSH和LH特异基因的PCR扩增体系和条件，并以B-actin为内参照与FSH和LH特异基因进行多重比较。结果淫羊藿苷能提高大鼠腺垂体细胞中GTHmRNA水平，但并非与剂量呈线性关系。

沈皓等［11］以正常青春启动期雌性SD大鼠为实验动物模型，按随机数字表法分为3组，分别喂饲生理盐水、滋阴泻火中药合剂和益肾填精中药合剂，灌胃法喂饲每日1次，剂量5 ml，共30 d。采用免疫组织化学法及计算机图像处理技术对下丘脑内侧视前区、弓状核和正中隆起3处的GnRH和神经肽Y (neuropeptide Y，NPY)进行定量形态观察，采用组织匀浆法和放射免疫法测定下丘脑视前区GnRH含量，采用脑片孵育实验和高效液相色谱法测定内侧基底下丘脑单胺类递质的释放量，采用推挽灌流技术及放射免疫法测定下丘脑视前区GnRH和NPY的释放量，高效液相色谱法测定该部位单胺类递质的释放量。结果显示，滋阴泻火中药可以显著抑制下丘脑GnRH周期性分泌中心及紧张性分泌中心GnRH的合成与释放，而益肾填精中药则显著促进其合成与释放。滋阴泻火中药可能通过抑制下丘脑GnRH紧张性分泌中心去甲肾上腺素的释放，促进下丘脑GnRH周期性分泌中心多巴胺的释放，并同时促进这两个GnRH分泌中心NPY的合成和释放，使下丘脑GnRH神经元的功能活动显著降低，从而明显抑制下丘脑-垂体的促性腺机能。益肾填精中药则可能通过降低下丘脑GnRH紧张性分泌中心NPY的合成和释放，使GnRH神经元功能显著活跃，从而明显促进下丘脑-垂体的促性腺机能。该实验可以看出，补肾中药可能通过对下丘脑GnRH及其相关神经递质去甲肾上腺素、多巴胺和NPY合成与释放的调节作用，调整下丘脑-垂体的促性腺机能。

2.3 补肾类中药对下丘脑-垂体激素分泌影响

徐红艳［12］等研究中药壮阳促孕散，对雌性肾阳虚大鼠垂体性腺轴分泌激素的影响，并初步探讨其作用机制。先用氢化可的松造雌性大鼠肾阳虚模型，造模21 d，从试验第8天开始中药治疗组灌胃中药壮阳促孕散，阳性对照组灌胃金匮肾气丸，连续给药14 d，放射免疫法测定血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)、黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)。结果表明，模型对照组造模后大鼠出现明显的阳虚症状，体质量下降，血清中E2、P下降，FSH、LH升高。给药后，阳性对照组中药治疗组大鼠体质量增加，血清中E2、P升高，FSH、LH下降。由此可见，中药壮阳促孕散可调节雌性肾阳虚大鼠血清中FSH、LH、E2和P的分泌，对生殖内分泌有促进作用。

李亚丽等［13］用D-半乳糖连续腹腔注射致亚急性衰老动物模型，造模后灌胃六味地黄汤连续60 d后，大鼠断头取垂体、卵巢。采用全自动微粒子化学发光免疫分析方法检测各组大鼠血清LH、E2、FSH含量，原位杂交方法检测各组大鼠卵巢细胞FSHR 和LHR的变化，Western Bloting法检测各组大鼠卵巢ER的变化。结果显示，与正常对照组比较，模型组大鼠垂体指数和卵巢指数均明显降低，血清E2含量明显降低，LH、FSH升高，ER、FSHR、LHR的表达明显降低，差异有统计学意义。与模型组比较，六味地黄汤组垂体指数和卵巢指数都明显升高，血清E2含量明显上升，LH、FSH降低，ER、FSHR、LHR的表达明显升高，呈现一定的剂量依赖性。研究发现，衰老大鼠的ER、FSHRmRNA和LHRmRNA表达量明显下降，而六味地黄汤能上调卵巢的 ER、FSHRmRNA和LHRmRNA水平，提示该药可以通过调节激素受体而发挥对内分泌的调控作用。其可能机制即雌激素与受体结合发挥生物学效应，使生殖轴的反馈机制得以恢复，降低FSH和LH水平，同时雌激素又可上调自身受体和FSHR、LHR，使FSH和LH发挥生物学效应，促进卵泡发育，构成良性循环，恢复H-P-O轴的调控功能。

3 总结及展望

国家级名老中医夏桂成教授总结多年临床实践，创造性地提出了“心(脑)-肾-子宫轴”为女性的生殖轴学说，指出肾在维持女性正常的行经、胎孕等方面起着主导作用，所以补肾应贯穿于疾病治疗的始终。该学说与与H-P-O轴相对应，H-P-O轴功能的正常决定了女性的生殖生理功能正常。肾虚证与临床上许多疾病有着密切关联。实验研究证明，补肾类中药对多脏器多系统均有调节作用，其对于下丘脑-垂体-卵巢的调节作用是多方面的，既能直接促进性腺细胞分泌促性腺激素及性激素，又能通过调节激素受体的表达而发挥内分泌的调控作用。纵观近年来的研究，大多集中在补肾类中药对性腺轴结构和分泌功能的影响上，却鲜有对补肾中药干预下丘脑-垂体信号传导通路的分子机制研究，应尽快完善该方面的研究，以明确中药作用靶点及通路，这必将对中医药理论、实践的创新和发展起到良好的推动作用。

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［4］周惠芳，李爱萍，谈勇，等．补肾助孕方对大鼠胚胎着床期子宫内膜及卵巢形态学的影响［J］．陕西中医，2009，30(1): 117．

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［12］徐红艳，鞠玉琳，张敏，等．壮阳促孕散对雌性肾阳虚大鼠垂体-性腺轴分泌激素的影响［J］．湖北农业科学，2011，10 (50):4241．