陈晓杰 南飞飞 张明智△

1）山东中医药大学第一临床医学院 2）郑州大学第一附属医院 郑州 450052

热休克蛋白（heat shock protein，HSP）由美国学者最初在高温环境的细胞中发现。是一个高度保守的多肽类蛋白质家族，其成员众多、含量丰富、广泛存在。研究证实，其合成受很多应激因素的影响，如感染、中毒、恶变以及缺血等。目前，其分类主要按照分子量大小划分，包括HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、HSP27等。在其家族中，与肿瘤关系较为密切的主要有HSP90和HSP27［1-2］。

1 资料与方法

1．1 一般资料 选择2009-01—2012-12平顶山市第一人民医院神经外科经手术切除的12例星形胶质细胞瘤手术标本（胶质瘤组），诊断全部有病理检查支持，男7例，女5例；年龄36～72岁。所有患者术前均未经放化疗。病理诊断和分级全部按2007年WHO 中枢神经系统肿瘤分类标准确定：Ⅱ级7例，Ⅲ级3例，Ⅳ级2例。另选取12例同期住院的经手术切除的正常脑组织患者（正常脑组织组），男8例，女4例；年龄18～49岁。标本切除离体后，6h内放入-80 ℃冰箱保存。

1．2 方法

1．2．1 常规HE染色：二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）各15min，二甲苯：无水乙醇＝1：1 2min，100%乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各5min，80%乙醇5min，蒸馏水5min，苏木精液染色5min，流水稍洗1～3 s，1%盐酸乙醇1～3s，0．5%伊红液染色1～3min，蒸馏水稍洗1～2s，80%乙醇稍洗1～2s，95%乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各3 s，无水乙醇5～10 min，石炭酸二甲苯5～10 min，二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）各2min，中性树胶封固［3］。

1．2．2 免疫组织化学方法：检测HSP27蛋白在人脑星形胶质细胞瘤、瘤旁以及正常脑组织中表达情况。①免疫组化二步法：脱蜡、水化组织切片，预处理组织切片，蒸馏水漂洗，置于TBS 中10 min，一抗孵育10～30 min，TBS 漂洗10 min，EnVisionTM 孵育10～30 min，TBS漂洗10 min，色源底物溶液孵育10min，蒸馏水漂洗，复染及封片，显微镜下观察［3］。②判定免疫组化结果的标准：由本院2位病理科医师进行双盲阅片，对每张切片进行10个高倍镜下（×400）视野内阳性细胞随机计数，阳性细胞数为最终判断标准：没有着色为0分，淡黄色着色为1分，棕黄色着色为2分，棕褐色着色为3分；……