张胜男，李 煌，张玉琴，徐 伟，陈立典，黄 枚，褚克丹，阙金花

福建中医药大学药学院，福州 450122

脑缺血目前已成为世界范围内的主要致残、致死因素［1］。并且随着年龄的增长发病率逐渐升高。然而，缺血性中风的发病机制较为复杂，兴奋性毒性、钙超载、氧化应激、凋亡、炎症反应等［2-5］。文献报道，脑缺血损伤与细胞外钙离子大量内流有关［6］，钙超载被认为是神经细胞死亡的最终共同途径［7］。因此，钙离子浓度的维持在脑缺血病理变化中起着重要作用。

天花粉是葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.或双边栝楼Trichosanthes rosthorinii HarIlls 的干燥根，具有清热泻火、消肿排脓之功效。现代药理研究表明，天花粉对于减轻大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的作用［8］。然而，其作用于脑缺血的成分尚未明确。泻根醇酸是天花粉中四环三萜类成分，具有细胞毒性、抗炎、抗肿瘤、抗氧化等生物活性［9-13］。但是，其对神经细胞作用的影响尚无报道。本文以NMDA 建立PC12 钙离子超载模型，观察泻根醇酸对NMDA 诱导的PC12 细胞损伤的影响，并用Western Blot 法检测CREB 等相关基因蛋白的表达，初步在分子细胞水平上探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂

PC12 细胞株购于北京北纳创联生物技术研究院;泻根醇酸(bryonolic acid)由福建中医药大学药学院分离提供，纯度＞98%;胰蛋白酶、RPMI-1640培养基、胎牛血清(FBS)均购于美国Hyclone 公司;噻唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、Fura-2/AM 均购于美国Sigma 公司;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)试剂盒购于南京建成生物工程研究所;Bax、Bcl-2、CREB、p-CREB、CaMKII、p-CaMKII、β-actin 均购于美国Cell Signaling Technology 公司。

1.1.2 主要仪器设备

超净工作台(苏州安泰空气技……